书 书 书犐犆犛 ０７ ． ０８０ 犃 ２１ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ３８０９３ — ２０１９ β  内酰胺类抗生素高分子聚合物测定凝胶色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犺犻犵犺犿狅犾犲犮狌犾犪狉狆狅犾狔犿犲狉狊犻狀 β 犾犪犮狋犪犿犪狀狋犻犫犻狅狋犻犮狊 — 犌犲犾犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔 ２０１９  １０  １８ 发布 ２０１９  １０  １８ 实施 国家市场监督管理总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２００９ 给出的规则起草 。 本标准由中国标准化研究院提出并归口 。 本标准起草单位 ： 中国计量大学 、 中国标准化研究院 、 北京萨姆伯科技有限公司 。 本标准主要起草人 ： 许益鹏 、 叶子弘 、 俞晓平 、 马爱进 、 申屠旭萍 、 张雅芬 、 崔海峰 、 郝帅 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ３８０９３ — ２０１９ β  内酰胺类抗生素高分子聚合物测定凝胶色谱法 １ 　 范围 本标准规定了用凝胶色谱法测定 β  内酰胺类抗生素中高分子聚合物的方法 。 本标准适用于青霉素 Ｖ 钾 、 头孢曲松 、 头孢噻吩 、 头孢拉定 、 头孢呋辛 、 头孢哌酮 、 头孢唑林 、 头孢替唑 、 苯唑西林 、 盐酸普鲁卡因 １０ 种 β  内酰胺类抗生素研制和生产中内源性高分子聚合物的测定 。 本方法检出限为 ０．０８ μ ｇ 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ３ 　 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 ３ ． １ 内源性高分子聚合物 　 犲狀犱狅犵犲狀狅狌狊犺犻犵犺犿狅犾犲犮狌犾犪狉狆狅犾狔犿犲狉狊 β  内酰胺类抗生素分子自身聚合而成的一类高分子物质 。 ４ 　 原理 根据相对分子质量的大小 ， 利用高效凝胶色谱柱对 β  内酰胺类抗生素及其高分子聚合物进行分离 ， 经紫外检测器在 ２５４ｎｍ 测定 ， 以色谱峰保留时间定性 ， 以峰面积进行定量 。 ５ 　 试剂或材料 除非另有规定 ， 仅使用分析纯试剂 。 ５ ． １ 　 水 ： ＧＢ ／ Ｔ６６８２ ， 一级水 。 ５ ． ２ 　 乙腈 （ 犆犎 ３ 犆犖 ）： ＨＰＬＣ 级 。 ５ ． ３ 　 ５ 犿犿狅犾 ／ 犔 磷酸盐缓冲液 ， 狆犎 ７ ． ０ ： 准确称取 ０．４３２ｇ 的磷酸氢二钠和 ０．３１２ｇ 的二水合磷酸二氢钠 ， 用 ９５０ｍＬ 水溶解 ， 调整 ｐＨ 为 ７．０ ， 加水定容到 １Ｌ ， ０．２２ μ ｍ 孔径的滤膜过滤 。 ５ ． ４ 　 β  内酰胺类抗生素 ： 纯度 ≥ ９８％ 。 ６ 　 仪器设备 ６ ． １ 　 高效液相色谱仪 ： 配紫外检测器 。 １ 犌犅 ／ 犜 ３８０９３ — ２０１９ ６ ． ２ 　 高效凝胶色谱柱 ： 粒径为 ５ μ ｍ ， 孔径 １２ｎｍ 的硅胶基质 ， 长度 ３０ｃｍ ， 内径 ７．８ｍｍ ， 理论塔板数 １００００ 以上 。 ６ ． ３ 　 电子天平 ： 感量为 ０．００１ｇ 。 ６ ． ４ 　 溶剂过滤系统 ： 滤膜孔径为 ０．２２ μ ｍ 。 ７ 　 测定步骤 ７ ． １ 　 样品制备 按需称取一定量的抗生素样品 ， 根据样品的溶解特性 ， 易溶于水的样品用 ５ｍｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸盐缓冲液进行溶解 ， 微溶于水或难溶于水的样品用乙腈或乙腈和 ５ｍｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸盐缓冲液的混合液溶解 ， 并用 ０．２２ μ ｍ 孔径的滤膜过滤 。 青霉素 Ｖ 钾 、 头孢曲松 、 头孢噻吩 、 头孢拉定 、 头孢呋辛 、 头孢替唑 、 苯唑西林和盐酸普鲁卡因用 ５ｍｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸盐缓冲液进行溶解 ； 头孢哌酮和头孢唑林用体积比为 １∶１ 的 ５ｍｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸盐缓冲液和乙腈的混合液溶解 。 ７ ． ２ 　 色谱条件 色谱仪为高效液相色谱仪 ， 色谱柱为高效凝胶色谱柱 ， 等度洗脱 ， 流动相为体积比为 ９０∶１０ 的 ５ｍｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸盐缓冲液与乙腈的混合液 ， 流速为 ０．８ｍＬ ／ ｍｉｎ ， 进样体积为 １０ μ Ｌ ， 柱温为 ２５℃ ， 检测波长为 ２５４ｎｍ 。 ７ ． ３ 　 标准曲线的制作 将抗生素标准品按梯度溶解 、 稀释后 ， 配制成 ５ 个以上浓度梯度的标准品溶液 。 将配好的标准品溶液由低浓度到高浓度依次进样 ， 以浓度为横坐标 ， 以抗生素标准品主成分对应的峰面积为纵坐标 ， 进行线性回归分析 ， 选择线性回归拟合程度 犚 ２ 值在 ０．９５ 以上的 ５ 个连续浓度梯度 ， 建立标准曲线 。 青霉素 Ｖ 钾的线性浓度范围为 ０．０４ｍｇ ／ ｍＬ ～ ５ｍｇ ／ ｍＬ ； 头孢曲松的线性浓度范围为 ０．００５ｍｇ ／ ｍＬ ～ ５ｍｇ ／ ｍＬ ； 头孢噻吩的线性浓度范围为 ０．００８ｍｇ ／ ｍＬ ～ ５ｍｇ ／ ｍＬ ； 头孢拉定的线性浓度范围为 ０．０４ｍｇ ／ ｍＬ ～ ５ｍｇ ／ ｍＬ ； 头孢呋辛的线性浓度范围为 ０．００１６ｍｇ ／ ｍＬ ～ ５ｍｇ ／ ｍＬ ； 头孢哌酮的线性浓度范围为 ０．００１６ｍｇ ／ ｍＬ ～ ５ｍｇ ／ ｍＬ ； 头孢唑林的线性浓度范围为 ０．０６５ｍｇ ／ ｍＬ ～ ２．５ｍｇ ／ ｍＬ ； 头孢替唑的线性浓度范围为 ０．００１６ｍｇ ／ ｍＬ ～ ５ｍｇ ／ ｍＬ ； 苯唑西林的线性浓度范围为 ０．００１６ｍｇ ／ ｍＬ ～ ５ｍｇ ／ ｍＬ ； 盐酸普鲁卡因的线性浓度范围为 ０．０４ｍｇ ／ ｍＬ ～ ５ｍｇ ／ ｍＬ 。 ７ ． ４ 　 试样溶液测定 根据标准曲线 ， 将试样按 ７．１ 进行溶解 ， 使得其浓度落在标准曲线的浓度范围内进行测定 。 ８ 　 结果分析 按式 （ １ ） 计算 ： 犃 １ ＝ １００ － 犛 Ａ１ × ρ Ａ０ 犛 Ａ０ × 犞 Ａ１ × １００ 犿 …………………………（ １ ） 　　 式中 ： 犃 １ ——— 抗生素试样中高分子聚合物含量 ， ％ ； 犛 Ａ１ ——— 抗生素试样中主成分的峰面积 ； ρ Ａ０ ——— 抗生素标准品中主成分峰面积所对应的质量浓度 ， 单位为毫克每毫升 （ ｍｇ ／ ｍＬ ）； ２ 犌犅 ／ 犜 ３８０９３ — ２０１９ 犛 Ａ０ ——— 抗生素标准品中主成分的峰面积 ； 犞 Ａ１ ——— 抗生素试样溶液体积 ， 单位为毫升 （ ｍＬ ）； 犿 ——— 抗生素试样总量 ， 单位为克 （ ｇ ）。 以平行样的平均值为最终的含量值 ， 计算结果保留到小数点后两位 。 ９ 　 重复性 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 １０％ 。 犌犅 ／ 犜 ３８０９３ — ２０１９