ICS 65.120 CCS B 20 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2815—2022 玉米皮菌酶协同发酵蛋白饲料技术规程 Technical specification of synergistic fermented protein feed of corn husk by strain and enzyme 2022-09-09 发布 2022-10-09 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 2815—2022 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。 本文件起草单位： 内蒙古工业大学、 内蒙古阜丰生物科技有限公司、内蒙古优然牧业有限责任公司。 本文件主要起草人：刘占英、燕亚平、高星、高俊杰、崔金娜、李永丽、刘再、伏广好、兰儒冰、 李学朋、刘敏、郜晋楠、胡建华、陈晓妮、王典、朱明达。 I DB15/T 2815—2022 玉米皮菌酶协同发酵蛋白饲料技术规程 1 范围 本文件规定了玉米皮菌酶协同发酵蛋白饲料生产的术语和定义、要求、生产工艺流程、质量评定、 标签、包装、保存及保质期。 本文件适用于玉米皮菌酶协同发酵蛋白饲料的生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6432 饲料中粗蛋白的测定 凯氏定氮法 GB/T 6434 饲料中粗纤维的含量测定 过滤法 GB/T 6435 饲料中水分的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 10648 《饲料标签》国家标准第1号修改单 GB 13078 饲料卫生标准 GB/T 14699.1 饲料采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 GB/T 23181 微生物饲料添加剂通用要求 QB/T 2583 纤维素酶制剂 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 玉米皮 corn husk 玉米经过浸泡、破碎后分离出来的玉米表皮，经烘干、挤水、烘干等工序加工而成。 菌酶协同发酵饲料 synergistic fermentation of corn husk by strain and enzyme 原料经酶制剂和微生物协同作用生产的单一饲料或混合饲料。 4 要求 设备要求 1 DB15/T 2815—2022 4.1.1 酶解设备可使用蒸煮罐酶解或者其他具有保温、搅拌功能的酶解设备/设施。 4.1.2 发酵设施可选择发酵池、发酵桶等，应具备保温、通风的功能。 原料要求 4.2.1 原料 应无发霉变质无杂物。粗玉米皮为5～10目；细玉米皮过20目筛通过率85%以上。 4.2.2 发酵菌种 应符合中华人民共和国农业部公告第2045号的规定。 4.2.3 添加剂 所用添加剂硫酸铵、磷酸二氢钾、氯化钠应符合饲料级，其他发酵所用的添加剂的种类和剂量应符 合GB/T 23181和中华人民共和国农业部公告第2625号的规定。 4.2.4 酶制剂 所用纤维素酶的种类应符合中华人民共和国农业部公告第2625号的规定，其质量应符合QB/T 2583 标准，酶活力大于等于10000 U/g。 4.2.5 菌种培养基 枯草芽孢杆菌培养基：蛋白胨10 g，酵母提取粉5 g，氯化钠10 g，蒸馏水1 L，pH为7.0～7.4， 121 ℃灭菌20 min。 酵母菌培养基：蛋白胨20 g，酵母提取粉10 g，葡萄糖 20 g，蒸馏水1 L，pH为7.0～7.4，115 ℃ 灭菌30 min。 4.2.6 菌液细胞数 9 9\ 所用枯草芽孢杆菌细胞数均培养至1×10 CFU/mL～2×10 CFU/mL时使用；酵母菌细胞数培养至1× 9 10 ～2×10 个/mL时使用。 9 4.2.7 发酵底物 发酵底物为原料、水及添加剂的混合物，成分为粗玉米皮75 kg、细玉米皮25 kg、自来水150 L、 饲料级硫酸铵5 kg、糖蜜（10°Brix）5 L、饲料级磷酸二氢钾0.5 kg、饲料级氯化钠0.25 kg。 5 生产工艺流程 生产工艺流程图 生产工艺流程包括6个阶段，如图1所示。 2 DB15/T 2815—2022 图1 生产工艺流程 菌种培养 5.2.1 菌种 菌种选用中国微生物普通菌种保藏中心的产朊假丝酵母Candida utilis CGMCC2.2878以及中国工 业微生物菌种保藏中心的枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis CICC10090和酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae CICC32236。 5.2.2 发酵菌剂制备 5.2.2.1 以 1%接种量将枯草芽孢杆菌 B. subtilis CICC10090 种子液接种至 LB 培养基中，37 ℃培养 9 9 至种子液细胞数达到 1×10 CFU/ml～2×10 CFU/ml。 5.2.2.2 以 1%接种量将产朊假丝酵母 C. utilis CGMCC2.2878 和酿酒酵母 S. cerevisiae CICC32236 9 9 种子液接种至 YPD 培养基中 30 ℃培养至种子液细胞数达到 1×10 ～2×10 个/ml。 5.2.2.3 将菌种枯草芽孢杆菌 B. subtilisCICC10090：酿酒酵母 S. cerevisiae CICC32236：产朊假 丝酵母 C. utilis CGMCC2.2878 按 1：1：10 的比例混合均匀作为发酵菌剂备用。 生产流程 5.3.1 原料 粗玉米皮为5～10目；细玉米皮过20目筛通过率85%以上，以3:1的比例混合。 5.3.2 酶解 在发酵底物中加入纤维素酶0.1%，经设备内部充分搅拌均匀，在依据酶制剂生产说明书中的最适温 度下酶解12 h。 5.3.3 接种 5.3.3.1 酶解后的发酵底物与发酵菌剂充分混合均匀后置于发酵设施，菌剂接种总量为 12%，接种量 为菌剂体积与发酵底物质量的比值。 5.3.3.2 发酵可在发酵桶或发酵池内发酵，料层厚度应保持在发酵设备/设施高度的 2/3 处，发酵室温 度在 25 ℃～30 ℃，相对湿度不低于 95%，发酵品温控制在 30 ℃～35 ℃，发酵 72 h±2 h。 过程控制 5.4.1 酶解的最佳温度依据购买酶制剂使用说明进行，发酵的最佳温度为 30 ℃～35 ℃，发酵时间为 3 DB15/T 2815—2022 72 h±2 h。 5.4.2 冬季发酵应采取增温、保温措施，夏季发酵应采取降温措施，避免阳光直射。 5.4.3 发酵过程中每 24 h 翻拌一次。 5.4.4 在发酵过程中，采用间歇通风调节品温在 30 ℃～35 ℃；当品温高于 35 ℃且连续通风仍不能 降至 35 ℃以下时，则应翻拌一次。 取样及检测 5.5.1 取样方法 应执行GB/T 14699.1。 5.5.2 水分 应执行GB/T 6435。 5.5.3 粗蛋白 应执行GB/T 6432。 5.5.4 真蛋白 参照附录A中的方法执行。 5.5.5 粗纤维 应执行GB/T 6434。 6 质量评价 感官评定 感官指标按照表1执行。 表1 玉米皮菌酶协同发酵蛋白饲料感官评定 项目 一级 二级 颜色 色泽均匀 色泽稍不均匀 气味 芳香酸味，略带酒香，无异味 酒味较浓，无异味 质地 质地柔软，易分离 质地稍硬 理化指标 理化指标依据表2执行。 4 等级 DB15/T 2815—2022 表2 玉米皮菌酶协同发酵蛋白饲料质量基准 （干基，%） 项目 等级 一级 水分 二级 ≤60.0 粗蛋白质 SCP≥25.0 22.0≤SCP＜25 真蛋白质 CP≥12.0 9.0≤CP≤12.0 粗纤维 CF≤15.0 15.0＜CF＜18.0 卫生指标 应符合GB 13078的规定。 质量分级判定规则 6.4.1 符合感官要求、物理指标及卫生指标要求后，再根据品质指标定级。 6.4.2 根据品质定级时，当样品的各项品质指标同时符合某一等级时，则判定所代表的该批次产品为 该等级；当有任意一项指标低于该等级标准时，则按单项指标最低值所在等级定级。任意一项指标低于 二级标准，则判定所代表的该批次产品为等级外产品。 7 标签、包装、保存 标签 产品标签应符合GB 10648的规定。 包装 产品质量检验合格后，装入带有单向阀的呼吸袋进行密封装袋保存。 保存 应在阴凉避光条件下保存，避免雨淋。 8 保质期 在规定的保存条件下夏季应为90 d，冬季应为150 d。保存期间密切注意温度变化。 5 DB15/T 2815—2022 A A 附 录 A （资料性） 真蛋白含量的测定方法 A.1 原理 硫酸铜在碱性溶液中，可将蛋白质沉淀，且不溶于热水，过滤和洗涤后，可将纯蛋白质和非蛋白质 含氮物分离，再用凯氏定氮法测定沉淀中的蛋白质含量。 A.2 试剂或材料 A.2.1 水GB/T 6682，三级。 A.2.2 硫酸铵，化学纯。 A.2.3 氢氧化钠，化学纯。 A.2.4 五水硫酸铜，化学纯。 A.2.5 硼酸，化学纯。 A.2.6 混合催化剂。称取0.4 g五水硫酸铜、6.0 g硫酸钾或硫酸钠，研磨均匀；或购买商品化的凯式 定氮催化剂片。 A.2.7 硼酸吸收液Ⅰ。称取20 g硼酸，用水溶解并稀释1000 mL。 A.2.8 硼酸吸收液Ⅱ。1%硼酸水溶液1000 mL，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10 ml，0.1%甲基红乙醇溶 液7mL，4%氢氧化钠水溶液0.5 mL，混匀，室温保存期为1个月（全自动程序用）。 A.2.9 氢氧化钠溶液Ⅰ。称取40.0 g氢氧化钠，用水溶解，冷却至室温稀释至1000 mL。 A.2.10 氢氧化钠溶液Ⅰ。称取40.0 g氢氧化钠，用水溶解，冷却至室温稀释至1000 mL。 A.2.11 硫酸铜溶液。称取100.0 g五水硫酸铜，用水溶解，冷却至室温稀释至1000 mL。 A.3 仪器设备 A.3.1 分析天平：感量0.0001 g。 A.3.2 消煮炉、电炉。 A.3.3 凯式烧瓶：250 mL。 A.3.4 消煮管：250 mL。 A.3.5 凯式蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。 A.3.6 定氮仪：以凯式原理制造的各类型半自动、全自动定氮仪。 A.4 样品 按照GB/T 14699.1抽取具有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样。按照GB/T 20195制备试样，粉 碎，全部通过