ICS 65.120 CCS B 20 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2816—2022 玉米皮固态发酵菌体蛋白饲料技术规程 Technical specification of protein feed from corn husk by solid state fermentation 2022-09-09 发布 2022-10-09 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 2816—2022 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。 本文件起草单位： 内蒙古工业大学、 内蒙古阜丰生物科技有限公司、内蒙古优然牧业有限责任公司。 本文件主要起草人：刘占英、燕亚平、高俊杰、高星、崔金娜、李永丽、刘再、伏广好、兰儒冰、 李学朋、刘敏、郜晋楠、胡建华、陈晓妮、王典、朱明达。 I DB15/T 2816—2022 玉米皮固态发酵菌体蛋白饲料技术规程 1 范围 本文件规定了玉米皮固态发酵菌体蛋白饲料的术语和定义、要求、操作步骤、质量评定、标签、包 装、保存及保质期。 本文件适用于玉米皮固态发酵菌体蛋白饲料的生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6432 饲料中粗蛋白的测定 凯氏定氮法 GB/T 6434 饲料中粗纤维的含量测定 过滤法 GB/T 6435 饲料中水分的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 10648 《饲料标签》国家标准第1号修改单 GB 13078 饲料卫生标准 GB/T 14699.1 饲料采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 玉米皮 corn husk 玉米经过浸泡、破碎后分离出来的玉米表皮，经烘干、挤水、烘干等工序加工而成。 菌体蛋白 single cell protein 以工农业下脚料、废料为基质，通过接种菌种发酵培养获得的微生物菌体。 玉米皮菌体蛋白饲料 single cell protein feed from corn husk 以玉米皮为原料，通过纤维降解菌种，将其中纤维素和半纤维素降解为可溶性糖，再经过高产菌体 蛋白菌种将可溶性糖和无机氮源转化为菌体蛋白，获得菌体蛋白饲料。 1 DB15/T 2816—2022 4 要求 原料要求 应无发霉变质无杂物。粗玉米皮为5～10目；细玉米皮过20目筛通过率85%以上，以3：1的比例混合。 发酵菌种 应符合中华人民共和国农业部公告第2045号的规定。 添加剂 所用添加剂硫酸铵、磷酸二氢钾、氯化钠应符合饲料级，发酵所用的添加剂种类和剂量应符合中华 人民共和国农业部公告第2625号的规定。 培养基 枯草芽孢杆菌培养基：蛋白胨 10 g，酵母提取粉 5 g，氯化钠 10 g，蒸馏水 1 L，pH 为 7.0～7.4， 121 ℃灭菌 20 min。 酵母菌培养基：蛋白胨20 g，酵母提取粉10 g，葡萄糖 20 g，蒸馏水1 L，pH为7.0～7.4，115 ℃ 灭菌30 min。 菌液细胞数 9 9 9 枯草芽孢杆菌细胞数均培养至1×10 cfu/mL～2×10 cfu/mL时使用；酵母菌细胞数培养至1×10 ～ 9 2×10 个/mL时使用。 发酵设施 可选择发酵盘和发酵池等。 发酵底物 发酵底物为原料、水及添加剂的混合物，成分为粗玉米皮75 kg、细玉米皮25 kg、自来水150 L、 饲料级硫酸铵5 kg、糖蜜（10°Brix）5 L、饲料级磷酸二氢钾0.5 kg、饲料级氯化钠0.25 kg。 5 操作步骤 生产工艺流程 生产工艺流程包括6个阶段，如图1所示。 2 DB15/T 2816—2022 图1 生产工艺流程 菌种培养 5.2.1 菌种 菌种选用中国微生物普通菌种保藏中心的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CGMCC1.7417、产朊假 丝酵母 Candida utilis CGMCC2.2878以及中国工业微生物菌种保藏中心的枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis CICC10090和酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae CICC32236。 5.2.2 发酵菌剂制备 5.2.2.1 以 1%接种量将枯草芽孢杆菌 B. subtilis CGMCC1.7417 和枯草芽孢杆菌 B. subtilis 9 9 CICC10090 种子液接种至 LB 培养基中，37 ℃培养至种子液细胞数达到 1×10 ～2×10 CFU/ml。 5.2.2.2 以 1%接种量将产朊假丝酵母 C. utilis CGMCC2.2878 和酿酒酵母 S. cerevisiae CICC32236 9 9 种子液接种至 YPD 培养基中 30 ℃培养至种子液细胞数达到 1×10 ～2×10 个/ml。 5.2.2.3 将菌种（枯草芽孢杆菌 B. subtilis CGMCC1.7417：枯草芽孢杆菌 B. subtilis CICC10090： 酿酒酵母 S. cerevisiae CICC32236：产朊假丝酵母 C. utilis CGMCC2.2878）按 1：1：2：2 的比例混 合均匀作为发酵菌剂备用。 接种 发酵底物与发酵菌剂充分混合均匀后置于发酵设施，菌剂接种总量为15%，接种量为菌剂体积与发 酵底物质量的比。 发酵 5.4.1 发酵条件 发酵应在好氧条件下进行，料层厚度保持在发酵设施高度的2/3处，发酵室温度在25 ℃～30 ℃， 相对湿度不低于95%，发酵品温控制在30 ℃～35 ℃，发酵72 h±2 h。 5.4.2 发酵过程控制 5.4.2.1 发酵过程中每 12 h 翻拌一次。 5.4.2.2 冬季发酵应采取增温、保温措施，夏季发酵应采取降温措施，避免阳光直射。 5.4.2.3 在发酵过程中，采用间歇通风调节品温在 30 ℃～35 ℃；当品温高于 35 ℃且连续通风仍不 能降至 35 ℃以下时，则应翻拌一次。 取样及检测 3 DB15/T 2816—2022 5.5.1 取样方法 应执行GB/T 14699.1。 5.5.2 检测指标 5.5.2.1 水分 应执行GB/T 6435。 5.5.2.2 粗蛋白 应执行GB/T 6432。 5.5.2.3 真蛋白 参照附录A中的方法执行。 5.5.2.4 粗纤维 应执行GB/T 6434。 6 质量评价 感官指标 感官指标按照表1执行。 表1 玉米皮菌体蛋白饲料感官评定 等级 项目 一级 二级 颜色 色泽均匀 色泽稍不均匀 气味 芳香酸味，略带酒香，无异味 酒味较浓，无异味 质地 质地柔软，易分离 质地稍硬 理化指标 理化指标按照表2执行。 表2 玉米皮菌体蛋白饲料质量基准 (干基，%) 等级 项目 一级 水分 4 二级 ≤60 粗蛋白质 SCP≥25.0 22.0≤SCP＜25 真蛋白质 CP≥12.0 9.0≤CP＜12 粗纤维 CF≤15.0 15.0＜CF≤18.0 DB15/T 2816—2022 卫生指标 应符合GB 13078的规定。 质量分级判定规则 6.4.1 符合感官要求及卫生指标后,再根据品质指标定级。 6.4.2 根据品质定级时，当样品的各项品质指标同时符合某一等级时，则判定所代表的该批次产品为 该等级；当有任意一项指标低于该等级标准时，则按单项指标最低值所在等级定级。任意一项指标低于 二级标准，则判定所代表的该批次产品为等级外产品。 7 标签、包装、保存 标签 产品标签应符合GB 10648的规定。 包装 产品质量检验合格后，装入带有单向阀的呼吸袋进行密封保存。 保存 应在阴凉避光条件下保存，避免雨淋。 保质期 夏季应为90 d；冬季应为150 d。保存期间密切注意温度变化。 5 DB15/T 2816—2022 A A 附 录 A （资料性） 真蛋白含量的测定方法 A.1 原理 硫酸铜在碱性溶液中，可将蛋白质沉淀，且不溶于热水，过滤和洗涤后，可将纯蛋白质和非蛋白质 含氮物分离，再用凯氏定氮法测定沉淀中的蛋白质含量。 A.2 试剂或材料 A.2.1 水GB/T 6682，三级。 A.2.2 硫酸铵，化学纯。 A.2.3 氢氧化钠，化学纯。 A.2.4 五水硫酸铜，化学纯。 A.2.5 硼酸，化学纯。 A.2.6 混合催化剂。称取0.4 g五水硫酸铜、6.0 g硫酸钾或硫酸钠，研磨均匀；或购买商品化的凯式 定氮催化剂片。 A.2.7 硼酸吸收液Ⅰ。称取20 g硼酸，用水溶解并稀释1000 mL。 A.2.8 硼酸吸收液Ⅱ。1%硼酸水溶液1000 mL，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10 mL，0.1%甲基红乙醇溶 液7mL，4%氢氧化钠水溶液0.5 mL，混匀，室温保存期为1个月（全自动程序用）。 A.2.9 氢氧化钠溶液Ⅰ。称取40.0 g氢氧化钠，用水溶解，冷却至室温稀释至1000 mL。 A.2.10 氢氧化钠溶液Ⅱ。称取25.0 g氢氧化钠，用水溶解，冷却至室温稀释至1000 mL。 A.2.11 硫酸铜溶液。称取100.0 g五水硫酸铜，用水溶解，冷却至室温稀释至1000 mL。 A.3 仪器设备 A.3.1 分析天平：感量0.0001 g。 A.3.2 消煮炉、电炉。 A.3.3 凯式烧瓶：250 mL。 A.3.4 消煮管：250 mL。 A.3.5 凯式蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。 A.3.6 定氮仪：以凯式原理制造的各类型半自动、全自动定氮仪。 A.4 样品 按照GB/T 14699.1抽取具有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样。按照GB/T 20195制备试样，粉 碎，全部通过0.42 mm试验筛，混匀，装入密闭容器中备用。 A.5 样品处理 A.5.1 硫酸铜沉淀蛋白 6 DB15/T 2816—2022 准确称取玉米皮0.5 g～1 g，加入75 mL蒸馏水，记录刻度线，加热煮沸30 min，期间维持液面约 75 mL处，加入2.5%氢氧化钠溶液20 mL，10%硫酸铜溶液20 mL，微沸10 min，静置至室温。 A.5.2 过滤 待试样静置至室温时，使用65 ℃～75 ℃热水冲洗，冲洗至滤液使用5%氯化钡溶液5滴和数滴盐酸 直至不生成白色硫酸钡沉淀。 A.5.3 烘干 将沉淀和滤纸放在65 ℃烘箱