卷丹脱毒种苗繁育技术规程 Technical Regulation of Virus-free Seedling Propagation of Lilium Lancifolium Thunb 发 布 湖南省市场监督管理局2021-07发布-02 2021-09实施-0243 DB43/T209—2021 0湖南省地方标准 ICS CCS 67.080.20 B 31 DB43/T 2090—2021 I 目 次 前言 ································ ································ ································ ························ Ⅲ 1 范围 ································ ································ ································ ····················· 1 2 规范性引用文件 ································ ································ ································ ······ 1 3 术语和定义 ································ ································ ································ ············ 1 4 初代培养 ································ ································ ································ ··············· 1 5 茎尖脱毒 ································ ································ ································ ··············· 2 6 病毒检测 ································ ································ ································ ··············· 2 7 脱毒苗繁殖 ································ ································ ································ ············ 3 8 脱毒苗驯化 ································ ································ ································ ············ 3 9 包装与运输 ································ ································ ································ ············ 4 10 生产档案 ································ ································ ································ ·············· 4 附录A（资料性） 采集记录表 ································ ································ ······················ 5 附录B（资料性） 卷丹苗生产记录表 ································ ································ ············· 6 DB43/T 2090—2021 II DB43/T 2090—2021 III 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构 不承担识别专利的责任。 本文件由湖南省农业农村厅提出。 本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：湖南省农业环境生态研究所，湖南农业大学，龙山县百合产业建设办公室，龙山 县百合协会，湖南龙山绿叶农产品有限公司，益阳市赫山区笔架山乡农业综合服务中心。 本文件主要起草人：龙世平、彭斯文、杨华、朱校奇、黄艳宁、陈山、郑思乡、谢进、戴艳娇、徐 瑞、宁文君 、徐义明、唐泽华、徐资祥。 DB43/T 2090—2021 IV DB43/T 2090—2021 1 卷丹脱毒种苗繁育技术规程 1 范围 本文件规定了卷丹脱毒种苗繁育技术的初代培养、 茎尖脱毒、 病毒检测、 脱毒苗繁殖、脱毒苗驯化、 包装与运输、生产档案。 本文件适用于卷丹脱毒种苗的生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 15569 农业植物调运检疫规程 NY/T 393 绿色食品 农药使用准则 NY/T 394 绿色食品 肥料使用准则 《中药材生产质量管理规范》 2018版 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 卷丹 Lilium lancifolium Thunb. 卷丹，为百 合科(Liliaceae)百合属多年生草本球根植物，中药“百合”基源植物之一。因花 瓣有的向 外翻卷， 故有“卷丹”美名。鳞茎近宽球形，高约 3.5 cm，直径4 cm-8 cm；鳞片宽卵形 ，长2.5 cm-3 cm， 宽1.4 cm-2.5 cm，白色。茎高 0.8 cm-1.5 m，带紫色条纹，具白色绵毛。叶散生，矩圆状披针形或披 针形，两面近无毛，有 5-7条脉。花 3-6朵或更多；苞片叶状，卵状披针形；花下垂，花被片披针形， 反卷，橙红色，有紫黑色斑 点。蒴果狭长卵形，长 3 cm-4 cm。花期7-8月，果期 9-10月。 3.2 脱毒种苗 Virus -free Seedling 利用茎尖脱毒技术与胚性愈伤诱导再生获得的经检测不携带病毒和类病毒的种苗。 4 初代培养 4.1 取材记录 记录采集号、采集地点、生长环境、采集时间、采集人，建立外植体采集信息档案，参见附录 A 中的表A.1。 4.2 外植体选择及清洗 DB43/T 2090—2021 2 选择来源清晰、生长健壮、无病虫危害的卷丹植株，然后选取直径≥ 8 cm的卷丹鳞茎。由外向内 剥去外围 3-4层鳞片， 优选中层鳞片。 用流水冲洗净表面泥垢 ， 然后加2-3滴洗衣液间断摇动清洗 10 min， 再用流水冲洗 30 min备用。 4.3 外植体消毒 在超净工作台上，将清洗好的外植体先用 75％乙醇灭菌 30 s-50 s，然后用无菌水清洗一遍，再用 0.1％升汞溶液浸泡 8 min-10 min，期间间断摇动 3-5次，使鳞片充分与溶液混合，最后用无菌水清洗 5-6次。 4.4 外植体接种 在超净工作台上用无菌滤纸吸干外植体表面水分，然后沿鳞片切除周围 1 mm的外围部分，再切成 0.5 cm-1.0 cm×0.5 cm-1.0 cm的小块，每瓶启动培养基接种 1块鳞片。 将接种好的材料置于培养室 进行暗培养，温度 25 ℃左右。优选的最佳启动培养基配方为 MS+2.0 mg/L 6 -BA+1.0 mg/ L NAA+3 ％蔗 糖+6.5 g/L 琼脂，pH=5.8-6.0。 4.5 胚性愈伤组织诱导 暗培养20 d-35 d后，转接 1 次，继续培养 20 d-35 d后形成胚性愈伤组织。最佳诱导培养基配 方为MS+2.0 mg/L 6 -BA+1.0 mg/ L NAA+3 ％蔗糖+6.5g/L琼脂，pH=5.8-6.0。 5 茎尖脱毒 5.1 胚性愈伤组织分化 将胚性愈伤组织转接到分化 培养基上，培养室温度为 25 ℃左右，每天光照 12 h/d，光照强度为 2000 lx-3000 lx，培养25 d-35 d分化出苗。胚性愈伤组织分化成苗的最佳培养基配方为 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+3 ％蔗糖+6.5 g/L 琼脂，pH=5.8-6.0。 5.2 热处理 当苗长至 0.5 cm高时，在 25 ℃-38 ℃进行热处理。先在 25℃下暗培养 1 d-2 d，然后移入光照 培养箱中，光照强度为 1500 lx -2000 lx，光照时间为 12 h/d-16 h/d