ICS 65.020.01 B 16 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 28076—2011 三叶斑潜蝇检疫鉴定方法 Detection and identification of Liriomyza trifolii(Burgess) 2011-12-30发布 2012-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 28076—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学院、中华人民共和国广东出人境检验检疫局、中华人民共和国 山东出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫 局、中华人民共和国湖南出人境检验检疫局、中华人民共和国江西出人境检验检疫局、中华人民共和国 广西出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：陈乃中、吴佳教、魏晓棠、刘海军、刘忠善、张俊华、江丽辉、卢建、姜金林、 黄丽莉、冯贤。 I GB/T 28076—2011 三叶斑潜蝇检疫鉴定方法 1范围 本标准明确了三叶斑潜蝇的检测、饲养、标本制作和室内鉴定等方法。 鉴定。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 内顶票 innerverticals 单眼三角区后侧面2对鬃靠内的1对繁。 2.2 外顶繁 outerverticals 单眼三角区后侧面2对鬃靠外的1对累。 2. 3 后顶 postverticals 位于单眼三角区后方的1对 5C 2.4 vibrissae 位于口器上面颊下角部位最粗的1对繁 2. 5 上眶 upperorbitals 位于眼眶上半部的鬃。 2. 6 下眶繁 lower orbitals 位于眼眶下半部的繁。 2.7 眶毛 orbitalsetulae 着生于眼眶部位的细毛。 2.8 scutum 盾片 双翅目昆虫中胸节背板位于盾间沟和小盾沟之间的骨片。 2. 9 中侧片 anepisternum 中胸节的上前方侧片。是位于背侧片与腹侧片之间、翅侧片之前的大型骨片 2. 10 腹侧片 katepisternum 中胸节的下前方侧片。是位于中侧片下方的一近似三角形的骨片。 1 GB/T28076—2011 2. 11 端阳体distiphallus 雄成虫阳茎的端部构造，又称阳茎端。 3三叶斑潜蝇基本信息 学名：Liriomyza trifolii(Burgess,1880)。 异名:L.alliovoraFrick,1925。 俗名：American serpentine leafminer,serpentine leaf miner 和 chrysanthemum leaf miner。 属于双翅目Diptera，潜蝇科Agromyzidae，植潜蝇亚科Phytomyzinae，斑潜蝇属LiriomyzaMik。 斑潜蝇属在全世界已知共370余种，属内形态上与三叶斑潜蝇近似的重要多食性种类还有美洲斑 潜蝇L.satiuaeBlanchard、南美斑潜蝇L.huidobrensis（Blanchard）和番茄斑潜蝇L.bryoniaeKalten- bach. 三叶斑潜蝇的其他信息参见附录A 4方法原理 根据三叶斑潜蝇的危害状，在检疫现场或发生疑似三叶斑潜蝇的田地，肉眼观察寄主叶片，取得幼 虫或虫样，饲养获得成虫，解部制作雄外生殖器标本，用显微镜观察，根据形态特征对种类进行判定。 5器材和试剂 5.1器材 可封口塑料袋、标签、培养皿、吸水纸、镊子、生物培养箱、小毛笔、指形管、纱布、冰箱、三角纸剪刀、 昆虫针、滴管、培养皿、载玻片、盖玻片、体视显微镜。 5.2试剂 荷燕尔胶（用阿拉伯树胶30g：蒸馏水50mL：水合氯醛200g：甘油20mL配方配制而成）、树脂 胶、无水乙醇、氢氧化钠或氢氧化钾、蒸馏水 6检测与饲养 6.1检测 在检疫现场或发生疑似三叶斑潜蝇的田地，观察有关寄主植物叶片（参见附录A），如发现上表发 白、由细变粗、弯曲甚至缠绕的疑似虫道，观察虫道末尾有无半透明的幼虫，并进一步查找附近有无长椭 圆形长约2.0mm的黄褐色蛹粒。如发现疑似蛹粒，用指形管盛装；如发现上述幼虫，摘取叶片，用可封 口塑料袋装。上述管、袋均加标签，或编号，记录时间、地点、寄主、采集人等，带回实验室。 6.2饲养 带虫叶片置于血底铺有吸水纸的培养皿中，盛于指形管中，用纱布扎口，防止羽化成虫逃逸，放人 生物培养箱中25℃30℃下培养。成虫羽化24h后可将指形管置于冰箱一1℃下不短于1h将成虫 冷冻杀死。 2 SAC GB/T 28076—2011 7标本的制作准备 7.1成虫标本 7.1.1针插标本 成虫标本可制作为针插标本。其中，粘虫用的三角纸应用三角纸剪刀制作；可用荷燕尔胶或其他快 干的树脂胶作为粘虫胶；成虫翅向外方、头部露出、侧身粘在三角纸尖上；要有注明地点、寄主、羽化时间 等信息的标签。 7.1.2浸泡标本 也可以用无水乙醇浸泡保存成虫标本。但如果要备分子试验用，则可用无水乙醇浸泡，并冷冻 保存。 7.2雄外生殖器玻片标本 用昆虫针取下雄虫腹部（见附录B）投人5%氢氧化钠或氢氧化钾溶液中煮沸3min～5min（体视显 微镜下观察，以骨质部分保留深色、肌肉脂肪等溶解为佳）；用滴管吸移至培养血装薄层蒸馏水中浸洗； 在体视显微镜下（载物台为白色背景）用细针解剖，除去背腹板等物，仅剩第9背板及其附属构造（雄外 生殖器；用针尖粘取第9背板及其附属构造至载玻片上荷燕尔胶滴中，体视显微镜下整姿，尽量使雄外 生殖器构造在视野中为正面图像；封片；自然干燥或用烘箱45℃24h烘干。 8实验室鉴定 将成虫标本置于体视显微镜下，雄外生殖器玻片标本置于显微镜下，观察是否符合以下鉴定特征 (见附录B和附录C)。 8.1潜蝇科成虫的鉴别特征 体小或微小，长1.5mm～4.0mm。有，后顶鬃分歧，上鬃分歧，下眶鬃内向。翅C脉仅在Sc 脉端处折断，Sc脉端部退化为一褶痕或与R脉合并，R脉3分支直达翅缘。腹部扁平，雌第7节长而骨 化，不能伸缩。 8.2植潜蝇亚科Phytomyzinae成虫的鉴别特征 Sc脉端部退化为一褶痕，独立于R脉之基伸达前缘脉。 8.3包括三叶斑潜蝇在内的具经济意义Liriomyz.aspp.成虫鉴别特征 上额眶鬃2对，眶毛后倾；小盾片通常为黄色；翅C脉伸达Mi+2脉端，它们终止于翅端附近，有第2 横脉。 8.4三叶斑潜蝇的鉴别特征 8.4.1成虫 8.4.1.1头部 3