ICS13.300 CCSA80 中华人民共和国国家标准 GB/T21827—2025 代替GB/T21827—2008 化学品 皮肤变态反应试验 局部淋巴结方法 Chemicals—Testmethodofskinsensitization—Locallymphnodeassay 2025-10-05发布 2026-02-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T21827—2008《化学品 皮肤变态反应试验 局部淋巴结方法》,与 GB/T21827—2008相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: 增加了术语和定义一章(见第3章),缩略语一章(见第4章)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。 本文件起草单位:中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所、葫芦岛市疾病预防控制中心、 中科标准(宁德)科技有限公司。 本文件主要起草人:郑敏、杨国庆、李斌、程娟、吴智君、张意、鱼涛、陈宵、肖经纬、刘黎、林影。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2008年首次发布为GB/T21827—2008; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T21827—2025 引 言 变态反应试验局部淋巴结方法是检测外源性化学物质致皮肤变态反应常用的试验方法之一。该方 法在机体接触致敏原的诱导阶段,通过测定局部皮肤淋巴结内淋巴细胞的增殖活性,评估化学物质的皮 肤变态反应作用和强度。 2008年国家标准化管理委员会组织发布GB/T21827—2008《化学品 皮肤变态反应试验 局部 淋巴结方法》(简称LLNA试验),规定了LLNA试验范围、试验基本原则、试验方法以及数据、报告的 内容和技术要求,是目前除豚鼠致敏试验以外唯一可用于评估受试物皮肤致敏性的试验方法。LLNA 为体内试验,试验结果以可量化的淋巴细胞增殖数据体现,且增殖程度与受试物剂量大小呈正比,这种 通过毒理学量效关系评估受试物致敏潜能的试验方法较传统致敏试验更加客观和可靠。与传统致敏试 验相比,LLNA试验周期短,无须致敏原二次接触,避免激发阶段对实验动物造成伤害,兼顾了动物福 利,符合动物实验的3R原则。目前GB/T21827—2008发布实施已经十余年,在标准应用和实施过程 中,随着实验动物伦理要求受到越来越广泛的重视,与该方法有关的理论研究、实践和国际规范也在不 断发生变化;同时2023年强制性国家标准GB14925—2023发布,对实验动物的环境与设施提出了更 为精准科学的规定和要求,因此有必要修订GB/T21827—2008,以不断适应国内外相关标准的新变化 和新需求,确保LLNA试验在技术方法层面得到不断更新和完善。 LLNA试验与豚鼠致敏试验均可用于大多数潜在致敏化学物质的识别。LLNA试验开始前,实验 室需要充分了解受试物的化学结构、理化特征以及毒理学相关资料等信息,以确认是否可使用LLNA 试验的检测方法开展受试物皮肤变态反应评估。LLNA试验不是豚鼠皮肤致敏试验的替代试验,虽然 该试验方法具有优势,但也存在一定局限性,例如某些金属、皮肤刺激性或高分子量以及含有农药成分 的外源性化学物质等,其理化特性可能干扰LLNA试验方法的准确度,并存在假阳性结果或不适用情 况,这时需要考虑使用基准测试物质对LLNA试验体系进行确认,并采用传统的豚鼠致敏试验开展进 一步验证。 ⅡGB/T21827—2025 化学品 皮肤变态反应试验 局部淋巴结方法 1 范围 本文件确立了皮肤变态反应试验局部淋巴结方法的试验基本原则,规定了试验数据和报告的内容 要求,描述了试验方法和步骤。 本文件适用于化学品致皮肤变态反应的检测,提供用于评估剂量-反应关系的量化数据。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB14925 实验动物 环境及设施 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 皮肤致敏性 skinsensitization 易感个体局部皮肤暴露于化学致敏原后诱导产生的一种皮肤变态反应。 3.2 受试物 testsubstance 进行致敏性评估的化学物质。 3.3 刺激指数 stimulationindex;SI 剂量组与阴性对照组淋巴细胞增殖率的比值。 3.4 参考化学物质 referencechemicals 用于对测试方法的准确度和可靠性进行评估验证的物质。 注:参考化学物质具有以下特征:(1)作用特点及作用机制已经得到证实;(2)化学种类明确,具有代表性;(3)测试 范围涵盖从强阳性、弱阳性到阴性的全部致敏反应类型;(4)根据试验类型和验证方法选择不同的参考化学 物质。 3.5 基准测试物质 benchmarktestsubstance 用作与试验受试物进行比对的标准致敏或非致敏物质。 注:基准物质具有以下特征:(1)一致可靠的物质来源;(2)与所测试物质种类具有结构和功能相似性;(3)明确的物 理和化学特性;(4)存在毒性效应相关的支持数据;(5)产生预估毒性效应范围内的剂量或浓度已知。 1GB/T21827—2025 3.6 准确度 accuracy 试验结果与可接受参考值之间的接近程度。 注:准确度是评估测试方法性能和相关性的衡量标准,该术语通常与“一致性”互换使用,表示使用该测试方法得到 正确结果的比例。 3.7 可靠性 reliability 实验室内和实验室之间在不同时间使用同一方案进行试验时,试验方法能重复进行的程度。 注:通过实验室内和实验室间的重现性进行评估。 3.8 预估浓度3 estimatedconcentrationthree;EC3 刺激指数等于3时所需的受试物估计浓度值。 3.9 预估浓度阈值 estimatedconcentrationthreshold;ECt 刺激指数指示致敏性为阳性反应时所需的受试物估计浓度值。 3.10 实验室间重现性 inter-laboratoryreproducibility 不同实验室使用同一受试物和试验方案产生类似试验结果的程度。 注:也称为实验室间再现性。 3.11 实验室内重现性 intra-laboratoryreproducibility 同一实验室内的工作人员在不同时间使用同一受试物和试验方案产生类似试验结果的程度。 注:也称为实验室内再现性。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 GHS:全球化学品统一分类和标签制度(GloballyHarmonizedSystemofClassificationandLabel- lingofChemicals) 注:由联合国出版作为指导各国控制化学品危害、保护人类和环境的统一分类制度文件。 rLLNA:LLNA减少试验(reducedLLNA) 5 试验基本原则 本文件的基本原则是致敏化学物质在暴露后,能诱导染毒部位的引流淋巴结内淋巴细胞发生增殖 反应。增殖反应与受试物的剂量(过敏原的致敏潜力)成正比,因此可采用简单的定量方法获得客观、定 量的致敏试验数据。LLNA试验通过对剂量组与阴性对照组的增殖率即刺激指数(SI)进行比较,得到 剂量-反应关系,以此判断受试物致敏性强弱程度。当SI大于等于3时,受试物才需要作为潜在皮肤致 敏物开展进一步评估。LLNA试验使用体内放射性标记方法检测淋巴细胞的增殖程度,如果能完全匹 配LLNA试验关于操作准则的相关要求(见附录A),也可使用其他检测终点评估淋巴细胞的增殖 情况。 2GB/T21827—2025 6 试验方法 6.1 实验动物与饲养环境 6.1.1 动物选择 宜选择未生育、未受孕的8周~12周龄成年CBA品系雌性小鼠,体重变化小于平均体重的20%。 选择其他种属或性别的动物时,应有充足的证据表明在该试验中不存在种属和性别差异。 6.1.2 饲养环境 动物按组别分笼饲养。饲养环境应符合GB14925关于SPF级屏障环境的规定,动物房温度保持 (23±3)℃,相对湿度30%~70%(50%~60%最好)。采用人工照明,保持12h光照和12h黑暗交替 循环。常规饲料喂饲,自由饮水。 6.2 动物分组及数量 受试物至少设立3个剂量组,1个阴性对照组,宜设立1个阳性对照。每组至少4只动物,收集每 只动物的试验数据。 6.3 剂量设计 在充分了解受试物化学结构、理化性质以及现有的急性毒性和皮肤刺激性试验资料基础上,从以下 浓度梯度中选择三个连续浓度作为受试物剂量:100%、50%、25%、10%、5%、2.5%、1%、0.5%等。如 果没有受试物背景信息,可先开展剂量预筛选试验,选择100%作为受试物的最大剂量水平,注意高剂 量不应出现全身毒性反应和严重的皮肤刺激性。对照组除了不给予受试物,其他处理方式均与剂量组 相同。 6.4 对照 6.4.1 阳性对照 设立阳性对照可验证试验过程的可靠性以及实验室具备开展试验的能力。与阴性对照相比,阳性 对照在染毒后,其刺激指数(SI)应增加3倍以上。选择能产生明显的可重复的诱导作用,但不会出现严 重的皮肤刺激(即SI大于20)或全身毒性的浓度作为阳性对照的剂量。首选25%已基肉桂醛(CAS: 101-86-0)或5%巯基苯并噻唑