书 书 书犐犆犛 ０７ ． ０８０ 犆犆犛犃 ４０ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A 犌犅 ／ 犜 ４０２６５ — ２０２１ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G24 /G25 /G28 /G29 犌犲狀犲狉犪犾狉狌犾犲狊犳狅狉犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犲狀狕狔犿犲犻犿犿狌狀狅犪狊狊犪狔犪狀狋犻犫狅犱犻犲狊 ２０２１  ０５  ２１ /G2A /G2B ２０２１  １２  ０１ /G2C /G2D /G27 /G28 /G2B /G2C /G2D /G2E /G2F /G30 /G31 /G32 /G27 /G28 /G29 /G2A /G33 /G2F /G30 /G34 /G35 /G36 /G2A /G2B书 书 书前 　　 言 　　 本文件按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２０２０ 《 标准化工作导则 　 第 １ 部分 ： 标准化文件的结构和起草规则 》 的规定起草 。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由全国生化检测标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ３８７ ） 提出并归口 。 本文件起草单位 ： 中国计量大学 、 北京工商大学 、 中国测试技术研究院生物研究所 、 华南农业大学 。 本文件主要起草人 ： 叶子弘 、 夏文强 、 马爱进 、 张雅芬 、 冯德建 、 雷洪涛 、 崔海峰 、 吴微 、 马丽侠 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ４０２６５ — ２０２１ 酶免疫检测抗体检测通则 １ 　 范围 本文件规定了酶免疫检测抗体检测的一般要求 、 检测过程和结果表述 。 本文件适用于酶免疫检测用抗体的检测控制 。 本文件不适用于具有标记物的酶免疫检测用抗体的检测控制 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。 其中 ， 注日期的引用文件 ， 仅该日期对应的版本适用于本文件 ； 不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ＧＢ１９４８９ 　 实验室 　 生物安全通用要求 ＧＢ ／ Ｔ２５９１５．１ 　 洁净室及相关受控环境 　 第 １ 部分 ： 空气洁净度等级 ３ 　 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 ３ ． １ 抗体 　 犪狀狋犻犫狅犱狔 免疫球蛋白 　 ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ 机体免疫系统在抗原刺激下 ， 由 Ｂ 细胞增殖分化为浆细胞后产生的一类能与相应抗原特异性结合并介导产生体液免疫效应的球蛋白 。 ３ ． ２ 抗原 　 犪狀狋犻犵犲狀 可以诱导生物体产生抗体的物质 ， 能够被相应抗体识别并与之结合 。 ３ ． ３ 种属来源 　 犺狅狊狋 用于免疫制备抗体的动物物种或抗体恒定区的氨基酸序列与待分析抗体最相近的动物物种 。 ３ ． ４ 抗体类型 　 犪狀狋犻犫狅犱狔犻狊狅狋狔狆犲 根据抗体的结构和免疫原性不同 ， 对抗体的分类 。 注 ： 抗体重链可分为 μ 、 γ 、 α 、 δ 、 ε 五类 。 抗体轻链可分为 κ 和 λ 两类 。 抗体重链的种类决定了抗体类型 ， 哺乳动物体 内的抗体包括 ＩｇＭ 、 ＩｇＧ 、 ＩｇＡ 、 ＩｇＤ 和 ＩｇＥ 五种类型 ， 分别对应抗体重链 μ 、 γ 、 α 、 δ 、 ε 。 ３ ． ５ 效价 　 狋犻狋犲狉 某种抗体识别特异性抗原所需的最低浓度 。 注 ： 抗体效价通常使用检测结果呈阳性时抗体的最高稀释度表示 。 １ 犌犅 ／ 犜 ４０２６５ — ２０２１ ３ ． ６ 纯度 　 狆狌狉犻狋狔 样品中目标抗体含量占总蛋白含量的百分率 。 ３ ． ７ 亲和力 　 犪犳犳犻狀犻狋狔 抗体与抗原间的结合强度的综合评价指标 。 注 ： 包括单克隆抗体亲和力与多克隆抗体亲和力 。 通常用解离常数 犓 Ｄ 表示 。 犓 Ｄ 数值越低表示抗体亲和力越好 。 ３ ． ８ 交叉反应 　 犮狉狅狊狊狉犲犪犮狋犻狅狀 抗体与目标分析物的结构类似物也能产生反应的现象 。 ４ 　 缩略语 下列缩略语适用于本文件 。 ＤＭＳＯ ： 二甲基亚砜 （ Ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ ） ＨＲＰ ： 辣根过氧化物酶 （ Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ） ＩｇＡ ： 免疫球蛋白 Ａ （ ＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＡ ） ＩｇＤ ： 免疫球蛋白 Ｄ （ ＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＤ ） ＩｇＥ ： 免疫球蛋白 Ｅ （ ＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＥ ） ＩｇＧ ： 免疫球蛋白 Ｇ （ ＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＧ ） ＩｇＭ ： 免疫球蛋白 Ｍ （ ＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＭ ） ＩｇＹ ： 免疫球蛋白 Ｙ （ ＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＹ ） ＴＭＢ ： ３ ， ３′ ， ５ ， ５′ 四甲基联苯胺 （ ３ ， ３′ ， ５ ， ５′Ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉｄｉｎｅ ） ５ 　 一般要求 ５ ． １ 　 检测样品 ５ ． １ ． １ 　 检测样品宜具备说明书或同功能资料 。 ５ ． １ ． ２ 　 应在洁净环境下 ， 使用洁净 、 干燥器具取样 。 样品应具有代表性 。 蛋白抗原 、 抗体等不稳定的样 品 ， 宜在低于 ８℃ 的低温下尽快完成取样 ， 并于低温保存待用 。 ５ ． ２ 　 实验室 ５ ． ２ ． １ 　 生物安全部分应符合 ＧＢ１９４８９ 中的相应要求 。 ５ ． ２ ． ２ 　 洁净区的悬浮粒子浓度应符合 ＧＢ ／ Ｔ２５９１５．１ 规定的 ＩＳＯ６ 级的要求 。 ５ ． ２ ． ３ 　 在处理废弃样品 、 试剂和容器之前 ， 应保证试验操作人员和周围环境的安全 。 为了降低污染物 的毒性 ， 防止有毒物质的泄漏 ， 应根据废弃物的性质 ， 对其进行无害化处理 。 ５ ． ３ 　 试剂材料 ５ ． ３ ． １ 　 除非另有说明 ， 在检测中使用的试剂均为生化试剂或更高级别试剂 ， 水为 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 规定的一 级水 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ４０２６５ — ２０２１ ５ ． ３ ． ２ 　 使用的玻璃器具应为一级硬玻璃或经过钝化处理 。 ５ ． ３ ． ３ 　 使用的合成树脂器具应为聚丙烯或其他低吸附材料制作 ， 不添加染料 、 填充物 。 ５ ． ３ ． ４ 　 使用的酶标板底部应具有亲水表面 。 ５ ． ４ 　 检测指标 ５ ． ４ ． １ 　 酶免疫检测用单克隆抗体的检测指标应包括种属来源 、 抗体类型 、 纯度 、 浓度 、 效价 、 亲和力 、 交 叉反应 。 ５ ． ４ ． ２ 　 酶免疫检测用多克隆抗体的检测指标应包括种属来源 、 浓度 、 效价 、 亲和力 、 交叉反应 。 ６ 　 检测过程 ６ ． １ 　 抗体种属来源 宜使用间接酶联免疫吸附法 、 免疫扩散法 、 蛋白质免疫印迹法 、 化学发光免疫测定法或蛋白质质量 肽谱法等方法检测抗体的种属来源 。 若使用间接酶联免疫吸附法见附录 Ａ 。 ６ ． ２ 　 抗体类型 宜使用间接酶联免疫吸附法 、 免疫扩散法 、 蛋白质免疫印迹法 、 化学发光免疫测定法或蛋白质质量 肽谱法等方法检测抗体类型 。 若使用间接酶联免疫吸附法见附录 Ａ 。 ６ ． ３ 　 抗体纯度 宜使用液相色谱法 、 聚丙烯酰胺凝胶电泳法或毛细管电泳法等方法检测抗体的纯度 。 若使用高效 液相色谱法见附录 Ｂ 。 ６ ． ４ 　 抗体浓度 宜使用比色法 、 紫外分光光度法 、 液相色谱法 、 酶联免疫吸附法 、 蛋白质免疫印迹法或化学发光免疫 测定法等方法检测抗体的浓度 。 若使用高效液相色谱法见附录 Ｃ 。 ６ ． ５ 　 抗体效价 宜使用间接酶联免疫吸附法或试管凝集试验等方法检测抗体的效价 。 若使用间接酶联免疫吸附法 见附录 Ｄ 。 ６ ． ６ 　 抗体亲和力 宜使用竞争酶联免疫吸附法 、 表面等离子体共振法 、 生物膜层干涉法或等温滴定量热法等方法检测 抗体与目标分析物的亲和力 。 若使用竞争酶联免疫吸附法见附录 Ｅ 。 ６ ． ７ 　 抗体交叉反应 宜使用竞争酶联免疫吸附法 、 表面等离子体共振法 、 生物膜层干涉法或等温滴定量热法等方法检测 抗体与目标分析物结构类似物的交叉反应 。 若使用竞争酶联免疫吸附法见附录 Ｆ 。 ３ 犌犅 ／ 犜 ４０２６５ — ２０２１ ７ 　 结果表述 ７ ． １ 　 检测结果应包含样品的检测项目 、 试验样品信息 、 抽样信息及检测结论 。 ７ ． ２ 　 单克隆抗体的检测结论应包括种属来源 、 抗体类型 、 纯度 、 浓度 、 效价 、 亲和力 、 交叉反应 ， 并注明采 用的检测方法 。 ７ ． ３ 　 多克隆抗体的检测结论应包括种属来源 、 浓度 、 效价 、 亲和力 、 交叉反应 ， 并注明采用的检测方法 。 ４ 犌犅 ／ 犜 ４０２６５ — ２０２１ 附 　 录 　 犃 （ 资料性 ） 抗体种属来源和抗体类型检测 　 间接酶联免疫吸附法 犃 ． １ 　 原理 该方法使用可以识别不同种属来源和抗体类型的特异性抗体检测待测抗体的种类 。 根据待检测抗体的种属来源和抗体类型选择合适的 ＨＲＰ 标记的特异性抗体若干 ， 用于鉴定的抗体宜至少包括 ： 抗小鼠 ＩｇＧ 抗体 、 抗小鼠 ＩｇＭ 抗体 、 抗兔 ＩｇＧ 抗体 、 抗大鼠 ＩｇＧ 抗体 、 抗山羊 ＩｇＧ 抗体 、 抗仓鼠 ＩｇＧ 抗体 、 抗绵羊 ＩｇＧ 抗体 、 抗鸡 ＩｇＹ 抗体 。 抗原包被浓度可根据