书 书 书犐犆犛 ６５ ． １２０ 犅 ４６ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A 犌犅 ／ 犜 ３９６７０ — ２０２０ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G28 /G29 /G2A /G2B /G2C /G22 /G2D /G2E /G2F /G30 /G31 /G32 　 /G33 /G34 /G35 /G36  /G37 /G38 /G39 /G36 /G3A 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狀犻狋狉狅犳狌狉犪狀犿犲狋犪犫狅犾犻狋犲狊犻狀狆犲狋犳犲犲犱狊 — 犔犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔狋犪狀犱犲犿犿犪狊狊狊狆犲犮狋狉狅犿犲狋狉狔 ２０２０  １２  １４ /G3B /G3C ２０２１  ０７  ０１ /G3D /G3E /G27 /G28 /G2B /G2C /G2D /G2E /G2F /G30 /G31 /G32 /G27 /G28 /G29 /G2A /G33 /G2F /G30 /G34 /G35 /G36 /G3B /G3C书 书 书前 　　 言 　　 本标准按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２００９ 给出的规则起草 。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ７６ ） 提出并归口 。 本标准起草单位 ： 中华人民共和国南京海关 、 中华人民共和国淮安海关 、 江苏海企长城股份有限公司 、 淮阴师范学院 。 本标准主要起草人 ： 蒋原 、 何健 、 魏云计 、 宦海霞 、 朱臻怡 、 冯民 、 王远见 、 柯家法 、 张扬 、 张科 、 张敬友 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ３９６７０ — ２０２０ 宠物饲料中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 　 液相色谱  串联质谱法 １ 　 范围 本标准规定了宠物饲料中硝基呋喃类代谢物 （ ３ 氨基 ２ 唑酮 、 ５ 吗啉甲基 ３ 氨基 ２ 唑烷基酮 、 １ 氨基  乙内酰脲 、 氨基脲 ） 残留量的液相色谱  串联质谱测定方法 。 本标准适用于以动物源性成分为主要原料制成的宠物饲料中硝基呋喃类代谢物 （ ３ 氨基 ２ 唑酮 、 ５ 吗啉甲基 ３ 氨基 ２ 唑烷基酮 、 １ 氨基  乙内酰脲 、 氨基脲 ） 残留量的测定 。 本标准的检出限为 ０．２５ μ ｇ ／ ｋｇ ， 定量限为 ０．５ μ ｇ ／ ｋｇ 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ＧＢ ／ Ｔ２０１９５ 　 动物饲料 　 试样的制备 ３ 　 缩略语 下列缩略语适用于本文件 。 ＡＯＺ ： ３ 氨基 ２ 唑酮 （ ３ａｍｉｎｏ２ｏｘａｌｉｄｉｎｏｎｅ ） ＡＭＯＺ ： ５ 吗啉甲基 ３ 氨基 ２ 唑烷基酮 （ ５ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｍｅｔｈｙｌ３ａｍｉｎｏ２ｏｘａｌｉｄｉｎｏｎｅ ） ＡＨＤ ： １ 氨基  乙内酰脲 （ １ａｍｉｎｏｈｙｄａｎｔｏｉｎ ） ＳＥＭ ： 氨基脲 （ ｓｅｍｉｃａｒｂａｚｉｄｅ ） ４ 　 原理 试样经三氯乙酸沉淀蛋白质 ， 游离出硝基呋喃类代谢物 ， 在避光条件下用邻硝基苯甲醛衍生化 、 乙酸乙酯提取后 ， 用液相色谱  串联质谱仪检测 ， 同位素内标法定量 。 ５ 　 试剂或材料 除非另有规定外 ， 仅使用分析纯试剂 。 ５ ． １ 　 水 ： ＧＢ ／ Ｔ６６８２ ， 一级 。 ５ ． ２ 　 乙腈 ： 色谱纯 。 ５ ． ３ 　 乙酸铵 ： 色谱纯 。 ５ ． ４ 　 甲酸 ： 色谱纯 。 ５ ． ５ 　 甲醇 ： 色谱纯 。 ５ ． ６ 　 二甲基亚砜 。 １ 犌犅 ／ 犜 ３９６７０ — ２０２０ ５ ． ７ 　 正己烷 。 ５ ． ８ 　 乙酸乙酯 。 ５ ． ９ 　 邻硝基苯甲醛 。 ５ ． １０ 　 三氯乙酸溶液 （ ２００ｇ ／ Ｌ ）： 称取 ２０．０ｇ 三氯乙酸溶解于 １００ｍＬ 水中 。 ５ ． １１ 　 邻硝基苯甲醛衍生试剂 （ ５０ｍｍｏｌ ／ Ｌ ）： 称取 ０．０３７８ｇ 邻硝基苯甲醛 （ ５．９ ） 溶于 ５ｍＬ 二甲基亚砜 （ ５．６ ） 中 。 现用现配 。 ５ ． １２ 　 磷酸氢二钾溶液 （ １．０ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 称取 １７．４ｇ 无水磷酸氢二钾溶于 １００ｍＬ 水中 。 ５ ． １３ 　 乙酸铵缓冲液 （ ０．５ｍｍｏｌ ／ Ｌ ）： 称取 ０．０３８５ｇ 乙酸铵 （ ５．３ ） 溶于 ５００ｍＬ 水中 ， 加入 ２００ μ Ｌ 甲酸 （ ５．４ ）， 用水定容至 １０００ｍＬ 。 ５ ． １４ 　 样品溶解液 ： 分别量取 １０ｍＬ 乙腈 （ ５．２ ） 和 ９０ｍＬ 乙酸铵缓冲液 （ ５．１３ ）， 混合均匀 。 ５ ． １５ 　 乙腈饱和正己烷 ： 量取 ８０ｍＬ 正己烷 （ ５．７ ） 于 １００ｍＬ 分液漏斗中 ， 加入适量乙腈后 ， 剧烈振摇 ， 静置分层后 ， 弃去乙腈层 。 ５ ． １６ 　 标准品 ： ＡＯＺ （ ＣＡＳ ： ８０６５９ ）、 ＡＭＯＺ （ ＣＡＳ ： ４３０５６６３９ ）、 ＡＨＤ · ＨＣｌ （ ＣＡＳ ： ２８２７５６７ ）、 ＳＥＭ · ＨＣｌ （ ＣＡＳ ： ５６３４１７ ）。 纯度 ≥ ９９．０％ 。 ５ ． １７ 　 硝基呋喃类代谢物同位素内标 ： Ｄ ４ ＡＯＺ 、 Ｄ ５ ＡＭＯＺ 、 １３ Ｃ ３ ＡＨＤ 、 １３ Ｃ １５ Ｎ ２ ＳＥＭ · ＨＣｌ 。 纯度 ≥ ９９．０％ 。 ５ ． １８ 　 标准储备溶液 ： 分别准确称取适量硝基呋喃类代谢物标准品 （ ５．１６ ）， 用甲醇 （ ５．５ ） 溶解定容 ， 配制成浓度约为 １．０ｍｇ ／ ｍＬ 的标准储备液 。 －１８℃ 以下避光保存 ， 有效期为 ６ 个月 。 ５ ． １９ 　 混合标准中间溶液 ： 分别准确移取标准储备溶液 （ ５．１８ ） 各 １ｍＬ 于 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 用甲醇稀释至刻度 ， 配制成浓度约为 １０ μ ｇ ／ ｍＬ 的混合中间标准溶液 。 －１８℃ 以下避光保存 ， 有效期为 ３ 个月 。 ５ ． ２０ 　 混合标准工作溶液 ： 分别准确移取适量的混合标准中间溶液 （ ５．１９ ） 于 １０ｍＬ 和 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 用甲醇稀释至刻度 ， 配制成浓度分别为 １００ｎｇ ／ ｍＬ 和 １０ｎｇ ／ ｍＬ 的混合标准工作溶液 。 ４℃ 避光保存 ， 有效期为 ７ 天 。 ５ ． ２１ 　 同位素内标储备溶液 ： 分别准确称取适量硝基呋喃类代谢物同位素内标 （ ５．１７ ）， 用甲醇 （ ５．５ ） 溶解定容 ， 配制成浓度约为 １．０ｍｇ ／ ｍＬ 。 －１８℃ 以下避光保存 ， 有效期为 ６ 个月 。 ５ ． ２２ 　 同位素内标混合标准中间溶液 ： 分别准确移取同位素内标储备溶液 （ ５．２１ ） 各 １ｍＬ 于 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 用甲醇稀释至刻度 ， 配制成浓度约为 １０ μ ｇ ／ ｍＬ 的同位素内标混合标准中间溶液 。 －１８℃ 以下避光保存 ， 有效期为 ３ 个月 。 ５ ． ２３ 　 同位素内标混合标准工作溶液 ： 准确移取同位素内标混合标准中间溶液 （ ５．２２ ） ０．１ｍＬ 于 １０ｍＬ 容量瓶中 ， 用甲醇稀释至刻度 ， 配制成浓度约为 １００ｎｇ ／ ｍＬ 的同位素内标混合标准中间溶液 。 ４℃ 避光保存 ， 有效期为 ７ 天 。 ５ ． ２４ 　 微孔滤膜 ： ０．２２ μ ｍ ， 有机系 。 ６ 　 仪器设备 ６ ． １ 　 液相色谱  串联质谱仪 ： 配有电喷雾离子源 （ ＥＳＩ ）。 ６ ． ２ 　 分析天平 ： 感量 ０．０１ｍｇ 和 ０．０１ｇ 。 ６ ． ３ 　 水浴恒温振荡器 ： ３７℃±１℃ 。 ６ ． ４ 　 离心机 ： 转速不低于 ８０００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ６ ． ５ 　 涡旋混匀器 。 ６ ． ６ 　 氮吹仪 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ３９６７０ — ２０２０ ７ 　 样品 固态样品按 ＧＢ ／ Ｔ２０１９５ 进行样品制备 ， 高速研磨仪粉碎 ， 转速 １００００ｒ ／ ｍｉｎ 以上 ， 过 ０．４２ｍｍ 孔径筛 ， 混匀装于密封容器 ， 备用 。 半固态样品按 ＧＢ ／ Ｔ２０１９５ 进行样品制备 ， 用高速均质器均质 ， 转速 １２０００ｒ ／ ｍｉｎ 以上 ， 均质后装于密封容器 ， 备用 。 试样置于 －１８℃ 避光保存 。 ８ 　 试验步骤 ８ ． １ 　 衍生 平行做两份试验 。 称取试样 ２ｇ ， 准确至 ０．０１ｇ ， 置于 ５０ｍＬ 具塞离心管中 ， 准确加入 ０．０５ｍＬ 同位素内标混合标准工作溶液 （ ５．２３ ）， ４ｍＬ 水 （ ５．１ ） 和 ２．０ｍＬ 三氯乙酸溶液 （ ５．１０ ）， 涡旋 １ｍｉｎ 后 ， 加入 １５０ μ Ｌ 邻硝基苯甲醛衍生试剂 （ ５．１１ ）， 在 ３７℃±１℃ 水浴中避光振荡水解 １６ｈ ， 冷却 ， 备用 。 ８ ． ２ 　 提取 备用液 （ ８．１ ） 用磷酸氢二钾溶液 （ ５．１２ ） 调节 ｐＨ 至 ７．０ ～ ７．５ ， 加入