书 书 书犐犆犛 ０７ ． ０８０ 犃 ２１ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ３８０９５ — ２０１９ 犇犎犃 、 犈犘犃 含量测定 　 气相色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犱狅犮狅狊犪犺犲狓犪犲狀狅犻犮犪犮犻犱犪狀犱犲犻犮狅狊犪狆犲狀狋犪犲狀狅犻犮犪犮犻犱犮狅狀狋犲狀狋 — 犌犪狊犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔 ２０１９  １０  １８ 发布 ２０１９  １０  １８ 实施 国家市场监督管理总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２００９ 给出的规则起草 。 本标准由中国标准化研究院提出并归口 。 本标准起草单位 ： 中国水产科学研究院 、 中国水产科学研究院南海水产研究所 、 中国标准化研究院 、 浙江省海洋水产研究所 、 北京萨姆伯科技有限公司 、 河北养元智汇饮品股份有限公司 、 中国农村技术开发中心 、 华测检测认证集团北京有限公司 、 中国科学院过程工程研究所 。 本标准主要起草人 ： 杨贤庆 、 荣辉 、 李乐 、 张小军 、 邓建朝 、 马爱进 、 岑剑伟 、 李来好 、 马海霞 、 宋金龙 、 郝帅 、 姚奎章 、 戴炳业 、 董立雅 、 黄永东 、 夏君霞 、 赵慧博 、 齐兵 、 崔岩 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ３８０９５ — ２０１９ 犇犎犃 、 犈犘犃 含量测定 　 气相色谱法 １ 　 范围 本标准规定了用气相色谱法测定二十二碳六烯酸 （ ＤＨＡ ）、 二十碳五烯酸 （ ＥＰＡ ） 含量的方法 。 本标准适用于鱼油 、 微藻中 ＤＨＡ 、 ＥＰＡ 含量的测定 。 本标准不适用于乙酯化的鱼油测定 。 本方法检出限为 １０ｍｇ ／ ｋｇ ， 定量限为 ３３ｍｇ ／ ｋｇ 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ３ 　 原理 试样经三氯甲烷  甲醇法提取油脂 ， 然后经甲酯化后 ， 气相色谱毛细管柱分离 ， 氢火焰离子化检测器检测 ， 内标法定量 。 ４ 　 试剂或材料 除非另有规定 ， 仅使用分析纯试剂 。 ４ ． １ 　 水 ： ＧＢ ／ Ｔ６６８２ ， 一级 。 ４ ． ２ 　 甲醇 ： 色谱纯 。 ４ ． ３ 　 正己烷 ： 色谱纯 。 ４ ． ４ 　 犇犎犃 ： 纯度 ≥ ９８％ 。 ４ ． ５ 　 犈犘犃 ： 纯度 ≥ ９８％ 。 ４ ． ６ 　 十七碳烷酸 ： 纯度 ≥ ９８％ 。 ４ ． ７ 　 ０ ． ８ 犿狅犾 ／ 犔 氢氧化钾  甲醇溶液 ： 称取 ５．２４ｇ 氢氧化钾溶于 １００ｍＬ 无水甲醇中 ， 充分混匀 。 ４ ． ８ 　 ２ ． ０ 犿犵 ／ 犿犔 十七碳烷酸内标储备液 ： 称取 ０．０５００ｇ 十七碳烷酸于 ２５ｍＬ 容量瓶中 ， 加入适量正己烷使溶解 ， 并稀释至刻度 ， 摇匀 。 ４ ． ９ 　 犇犎犃 和 犈犘犃 标准工作溶液 ： 分别称取 ０．０１００ｇ 的 ＤＨＡ 和 ＥＰＡ 标准品于 ５ｍＬ 容量瓶中 ， 加入适量正己烷使溶解 ， 并稀释至刻度 ， 摇匀 。 然后分别取 ０．１ｍＬ 、 ０．２ｍＬ 、 ０．４ｍＬ 、 ０．８ｍＬ 、 １．５ｍＬ 于 ５ 个 １０ｍＬ 容量瓶中 ， 分别移入十七碳烷酸内标储备液 ２．０ｍＬ ， 加入正己烷使溶解 ， 并稀释至刻度 ， 摇匀 。 ５ 　 仪器设备 ５ ． １ 　 气相色谱仪 ： 配有氢火焰离子化检测器 （ ＦＩＤ ）。 １ 犌犅 ／ 犜 ３８０９５ — ２０１９ ５ ． ２ 　 天平 ： 感量 ０．０１ｇ 、 ０．０００１ｇ 。 ５ ． ３ 　 研磨仪 。 ５ ． ４ 　 旋涡式振荡混合器 。 ５ ． ５ 　 超声波破碎仪 。 ５ ． ６ 　 真空干燥箱 。 ５ ． ７ 　 恒温水浴锅 。 ６ 　 测定步骤 ６ ． １ 　 取样 微藻 ： 称取 １０．００ｇ 微藻 ， 研碎后称取 １．００ｇ 均匀样品 ， 待提取油脂所用 。 鱼油 ： 取 ０．１０００ｇ 。 ６ ． ２ 　 提取 取 １．００ｇ 微藻干粉试样 ， 放入 ５０ｍＬ 聚四氟乙烯试管中 ， 加入 ６．０ｍＬ 蒸馏水 ， 加入三氯甲烷  甲醇 （ １∶２ ， 体积比 ） 混合液 ２２．５ｍＬ ， 振荡混匀后用超声波破碎仪破碎 ２ｍｉｎ ， 加入 ７．５ｍＬ 三氯甲烷振荡混匀 ３０ｓ ， 再加入 ７．５ｍＬ 蒸馏水振荡混匀 ３０ｓ ， 分液漏斗静置分层 ， 分离油层 ， 真空干燥 ， 称重并计算油脂含量 。 ６ ． ３ 　 脂肪酸甲酯化 称取 ０．１０ｇ 油脂样品置于 １０ｍＬ 带盖离心管中 ， 加入 ２ｍＬ 乙醚  正己烷 （ ２∶１ ， 体积比 ） 混合液 ， 摇匀后 １５ｍｉｎ ， 加入 ０．８ｍｏｌ ／ Ｌ 的氢氧化钾  甲醇溶液 ２ｍＬ ， 摇匀后在 ６０℃ 恒温水浴下反应 １５ｍｉｎ ， 沿壁加水到 １０ｍＬ 刻度处 ， 静置分层 ， 将上清液全部转移至量器内 ， 用正己烷定容至 １ｍＬ ， 稀释一定倍数后待进样分析 。 ６ ． ４ 　 测定 ６ ． ４ ． １ 　 气相色谱参考条件 气相色谱参考条件如下 ： ａ ） 　 色谱柱 ： 聚二氰丙基硅氧烷毛细管柱 （ ０．３２ｍｍ×０．２５ μ ｍ×３０ｍ ）， 或相当者 ； ｂ ） 　 载气及流速 ： 载气为氮气 ， 流速为 １．５ｍＬ ／ ｍｉｎ ； ｃ ） 　 柱温程序 ： 初始温度 １６０℃ （ 保持 ３ｍｉｎ ）， 以 ６℃ ／ ｍｉｎ 速率升到 ２３０℃ ， 保持 １５ｍｉｎ ； ｄ ） 　 进样口温度 ： ２５０℃ ； ｅ ） 　 检测器温度 ： ２８０℃ ； ｆ ） 　 进样量 ： １ μ Ｌ ； ｇ ） 　 进样方式 ： 分流进样 ， 分流比 ５０∶１ 。 ６ ． ４ ． ２ 　 标准曲线绘制 分别取不同浓度的标准工作溶液和空白溶液 （ 正己烷 ） 各 １ｍＬ 按 ６．３ 甲酯化后 ， 依次进样 ， 扣除空白值 ， 分别测定 ＤＨＡ 甲酯 、 ＥＰＡ 甲酯和十七碳烷酸甲酯的峰面积 。 分别以标准工作溶液 ＤＨＡ 和 ＥＰＡ 的质量浓度与内标物质量浓度的比为横坐标 ， 以 ＤＨＡ 甲酯和 ＥＰＡ 甲酯分别与十七碳烷酸甲酯的峰面积比为纵坐标 ， 绘制标准曲线 。 色谱图参见附录 Ａ 中图 Ａ．１ 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ３８０９５ — ２０１９ ７ 　 结果分析 试样中 ＤＨＡ 或 ＥＰＡ 的含量按式 （ １ ） 计算 ： 狑 ＝ 犞狀 （ 狔 － 犫 ） ρ 犳 × １００ 犪犿 ……………………（ １ ） 　　 式中 ： 狑 ——— 试样中 ＤＨＡ 或 ＥＰＡ 的含量 ， 单位为克每百克 （ ｇ ／ １００ｇ ）； 犞 ——— 试液最终定容体积 ， 单位为毫升 （ ｍＬ ）； 狀 ——— 试液稀释倍数 ； 狔 ——— 试样中 ＤＨＡ 甲酯或 ＥＰＡ 甲酯与十七碳烷酸甲酯的峰面积比 ； 犫 ——— 标准曲线的截距 ； ρ ——— 试液最终内标物的质量浓度 ， 单位为毫克每毫升 （ ｍｇ ／ ｍＬ ）； 犳 ——— ＤＨＡ 甲酯转换为 ＤＨＡ 的转换系数 （ 取值 ０．９５９０ ）， 或 ＥＰＡ 甲酯转换为 ＥＰＡ 的转换系数 （ 取值 ０．９５５７ ）； 犪 ——— 标准曲线的斜率 ； 犿 ——— 试样的质量 ， 单位为毫克 （ ｍｇ ）。 计算结果以平行测定值的算术平均值表示 ， 保留三位有效数字 。 ８ 　 重复性 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 １０％ 。 犌犅 ／ 犜 ３８０９５ — ２０１９ 书 书 书 犌犅 ／ 犜 ３８０９５ — ２０１９ 附 　 录 　 犃 （ 资料性附录 ） 犇犎犃 、 犈犘犃 、 十七碳烷酸标准品色谱图 ＤＨＡ 、 ＥＰＡ 、 十七碳烷酸标准品色谱图见图 Ａ．１ 。 图 犃 ． １ 　 犇犎犃 、 犈犘犃 、 十七碳烷酸标准品色谱图 ９１０２ — ５９０８３ 犜 ／ 犅犌 版权专有 　 侵权必究  书号 ： １５５０６６ · １６３６５０ 定价 ： 　　 １４ ． ００ 元