书 书 书犐犆犛 ７１ ． １００ ． ７０ 犢 ４２ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ３７６４１ — ２０１９ 化妆品中 ２ ， ３ ， ５ ， ４ ′ 四羟基二苯乙烯  ２  犗 β 犇 葡萄糖苷的测定高效液相色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳 ２ ， ３ ， ５ ， ４ ′狋犲狋狉犪犺狔犱狉狅狓狔狊狋犻犾犫犲狀犲 犗 β 犇犵犾狌犮狅狊犻犱犲犻狀犮狅狊犿犲狋犻犮狊 — 犎犻犵犺狆犲狉犳狅狉犿犪狀犮犲犾犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔 ２０１９  ０６  ０４ 发布 ２０２０  ０１  ０１ 实施 国家市场监督管理总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２００９ 给出的规则起草 。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ２５７ ） 归口 。 本标准起草单位 ： 河北省食品检验研究院 （ 国家果类及农副加工产品质量监督检验中心 ）、 山东省食品药品检验研究院 、 江苏省产品质量监督检验研究院 、 河北省出入境检验检疫局 、 苏州世谱检测技术有限公司 、 上海市日用化学工业研究所 。 本标准主要起草人 ： 张岩 、 祝建华 、 卢剑 、 艾连峰 、 孙磊 、 张冬生 、 王东 、 赵丽敏 、 黄云霞 、 石伟杰 、 张雷雷 、 贾文轩 、 叶竹洪 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ３７６４１ — ２０１９ 化妆品中 ２ ， ３ ， ５ ， ４ ′ 四羟基二苯乙烯  ２  犗 β 犇 葡萄糖苷的测定高效液相色谱法 １ 　 范围 本标准规定了化妆品中 ２ ， ３ ， ５ ， ４′ 四羟基二苯乙烯 ２ 犗 β Ｄ 葡萄糖苷 （ 以下简称二苯乙烯苷 ） 含量的高效液相色谱的定性定量检测方法的原理 、 试剂和材料 、 仪器设备 、 测定步骤 、 结果计算 、 回收率和精密度 、 允许差等内容 。 本标准适用于洗发液 、 护发素中何首乌的主要特征成分 ２ ， ３ ， ５ ， ４′ 四羟基二苯乙烯 ２ 犗 β Ｄ 葡萄糖苷的测定 。 本标准方法检出限为 ２ｍｇ ／ ｋｇ ， 定量限为 ７ｍｇ ／ ｋｇ 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ３ 　 原理 试样经乙腈水溶液超声提取 ， 高效液相色谱仪分离 ， 紫外检测器检测 ， 以保留时间定性 ， 外标法定量 。 ４ 　 试剂和材料 除另有规定外 ， 所用试剂均为色谱纯 ， 水为 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 规定的一级水 。 ４ ． １ 　 二苯乙烯苷 （ 标准物质 ）： 纯度不小于 ９４．５％ 。 二苯乙烯苷的中英文名称 、 化学名称 、 ＣＡＳ 号 、 分子式 、 相对分子质量和结构式参见附录 Ａ 中的表 Ａ．１ 。 ４ ． ２ 　 乙腈 ： 色谱纯 。 ４ ． ３ 　 ２０％ 乙腈水溶液 ： 量取乙腈 （ ４．２ ） ２０ｍＬ 与 ８０ｍＬ 水混合 。 ４ ． ４ 　 二苯乙烯苷标准工作溶液 ： 称取二苯乙烯苷标准品 ０．１０ｇ （ 精确至 ０．０００１ｇ ） 于 １００ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 加入乙腈水溶液 （ ４．３ ） 定容制得二苯乙烯苷标准储备溶液 （ １０００ μ ｇ ／ ｍＬ ）， 于 ４℃ 避光保存 ， 有效期 ２ 个月 。 分别精确移取标准储备溶液 ０．１５ｍＬ 、 ０．４５ｍＬ 、 １．５０ｍＬ 、 ３．００ｍＬ 、 ７．５０ｍＬ 、 １５．０ｍＬ 、 ３０．０ｍＬ 于 １００ｍＬ 棕色容量瓶后 ， 加入乙腈水溶液 （ ４．３ ） 稀释并定容 ， 配制质量浓度分别为 １．５ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ４．５ μ ｇ ／ ｍＬ 、 １５．０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ３０．０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ７５．０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 １５０．０ μ ｇ ／ ｍＬ 和 ３００．０ μ ｇ ／ ｍＬ 的二苯乙烯苷标准工作溶液 ， 于 ４℃ 避光保存 ， 可使用一周 。 ５ 　 仪器设备 ５ ． １ 　 高效液相色谱仪 ： 配紫外检测器 （ 或等效检测器 ）。 １ 犌犅 ／ 犜 ３７６４１ — ２０１９ ５ ． ２ 　 分析天平 ： 感量 ０．００１ｇ 和 ０．０００１ｇ 。 ５ ． ３ 　 超声波清洗器 。 ５ ． ４ 　 涡旋振荡器 。 ６ 　 测定步骤 ６ ． １ 　 样品处理 准确称取试样 ２．０ｇ （ 精确至 ０．００１ｇ ） 于 １０ｍＬ 具塞比色管中 （ 用铝箔纸包裹避光 ）， 加入乙腈水溶液 （ ４．３ ） ６ｍＬ ， 涡旋 ６０ｓ 分散混匀 ， 然后超声提取 １５ｍｉｎ ， 以乙腈水溶液 （ ４．３ ） 定容 ， 混匀 ， 过 ０．４５ μ ｍ 滤膜 ， 待测 。 ６ ． ２ 　 色谱参考条件 色谱参考条件如下 ： ａ ） 　 色谱柱 ： ＯＤＳＣ １８ 柱 ， ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ （ 内径 ）， ５ μ ｍ ； 或相当者 ； ｂ ） 　 流动相 ： ２０％ 乙腈水溶液 （ ４．３ ）； ｃ ） 　 流速 ： ０．４ｍＬ ／ ｍｉｎ ； ｄ ） 　 检测波长 ： ３２０ｎｍ ； ｅ ） 　 柱温 ： ３０℃ ； ｆ ） 　 进样量 ： １０ μ Ｌ 。 ６ ． ３ 　 测定 本方法采用外标校准曲线法定量测定 。 以待测物各标准工作溶液 （ ４．４ ） 浓度为横坐标 ， 峰面积为纵坐标 ， 作标准曲线线性回归方程 。 根据保留时间定性 ， 根据峰面积进行定量 。 二苯乙烯苷标准物质的液相色谱图参见附录 Ｂ 中的图 Ｂ．１ 。 ７ 　 结果计算 化妆品中二苯乙烯苷的含量按式 （ １ ） 计算 ： 狑 ＝ ρ × 犞犿 ……………………（ １ ） 　　 式中 ： 狑 ——— 化妆品中二苯乙烯苷的含量 ， 单位为毫克每千克 （ ｍｇ ／ ｋｇ ）； ρ ——— 测定成分二苯乙烯苷质量浓度 ， 单位为微克每毫升 （ μ ｇ ／ ｍＬ ）； 犞 ——— 样品定容体积 ， 单位为毫升 （ ｍＬ ）； 犿 ——— 样品取样量 ， 单位为克 （ ｇ ）。 ８ 　 回收率和精密度 添加水平在 ７ｍｇ ／ ｋｇ ～ ４５ｍｇ ／ ｋｇ 范围内 ， 回收率在 ９２．０％ ～ ９９．０％ 之间 ， 相对标准偏差小于 １０％ 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ３７６４１ — ２０１９ ９ 　 允许差 本方法在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 １０％ 。 ３ 犌犅 ／ 犜 ３７６４１ — ２０１９ 附 　 录 　 犃 （ 资料性附录 ） 二苯乙烯苷的中英文名称 、 化学名称 、 犆犃犛 号 、 分子式 、 相对分子质量和结构式 二苯乙烯苷的中英文名称 、 化学名称 、 ＣＡＳ 号 、 分子式 、 相对分子质量和结构式参见表 Ａ．１ 。 表 Ａ． １ 　 二苯乙烯苷的中英文名称 、 化学名称 、 犆犃犛 号 、 分子式 、 相对分子质量和结构式 中文 名称化学名称 英文名称 ＣＡＳ 号 分子式相对分子 质量结构式 二苯乙 烯苷 ２ ， ３ ， ５ ， ４′ 四羟 基二苯乙烯  ２ 犗 β Ｄ 葡萄糖苷 ２ ， ３ ， ５ ， ４′ｔｅｔｒａｈｙ ｄｒｏｘｙｓｔｉｌｂｅ ｎｅ 犗 β Ｄｇｌｕｃｏｓｉｄｅ８２３７３９４２Ｃ ２０ Ｈ ２２ Ｏ ９ ４０６．３８ ４ 犌犅 ／ 犜 ３７６４１ — ２０１９ 附 　 录 　 犅 （ 资料性附录 ） 二苯乙烯苷标准物质的液相色谱图 二苯乙烯苷标准物质的液相色谱图参见图 Ｂ．１ 。 注 ： 二苯乙烯苷出峰时间为 ２０．２７５ｍｉｎ 。 图 犅 ． １ 　 二苯乙烯苷 （ ２００ μ 犵 ／ 犿犔 ） 标准物质的液相色谱图 　　 ５ 犌犅 ／ 犜 ３７６４１ — ２０１９