书 书 书犐犆犛 ６５ ． ０８０ 犌 ２０ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A 犌犅 ／ 犜 ３７５００ — ２０１９ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G28 /G29 /G2A /G2B /G2C /G2D /G2E /G2F /G30 /G31 /G32 /G33 /G34 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狆犾犪狀狋犵狉狅狑狋犺狉犲犵狌犾犪狋狅狉狊犻狀犳犲狉狋犻犾犻狕犲狉 — 犎犻犵犺狆犲狉犳狅狉犿犪狀犮犲犾犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔 ２０１９  ０６  ０４ /G35 /G36 ２０２０  ０１  ０１ /G37 /G38 /G27 /G28 /G2B /G2C /G2D /G2E /G2F /G30 /G31 /G32 /G21 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A /G33 /G2F /G30 /G34 /G35 /G36 /G35 /G36书 书 书前 　　 言 　　 本标准按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２００９ 给出的规则起草 。 本标准由中国石油和化学工业联合会提出 。 本标准由全国肥料和土壤调理剂标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ１０５ ） 归口 。 本标准起草单位 ： 上海化工研究院有限公司 、 山东省产品质量检验研究院 、 黑龙江省质量监督检测研究院 、 云南省化工产品质量监督检验站 、 四川国光农化股份有限公司 、 山东农大肥业科技有限公司 、 上海化工院检测有限公司 。 本标准主要起草人 ： 苏本玉 、 张娟 、 段路路 、 柳羽丰 、 丁方军 、 吴攀道 、 魏厚道 、 毛红祥 、 朱海荣 、 刘卫 、 吴凡 、 姚莎 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ３７５００ — ２０１９ 肥料中植物生长调节剂的测定高效液相色谱法 警示 ——— 使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验 。 本标准并未指出所有可能的安全问 题 。 使用者有责任采取适当的安全和健康措施 ， 并保证符合国家有关法规规定的条件 。 １ 　 范围 本标准规定了肥料中植物生长调节剂含量的高效液相色谱测定方法 。 本标准适用于水溶性肥料 、 复合肥料 、 复混肥料 、 掺混肥料等肥料中复硝酚钠 、 ２ ， ４ 二氯苯氧乙酸 （ 简称 ２ ， ４Ｄ ）、 脱落酸 、 萘乙酸 、 氯吡脲 、 烯效唑 、 吲哚 ３ 乙酸 、 吲哚丁酸含量的测定 。 本标准中各目标物的方法检出限和定量限分别为 ： 复硝酚钠 ３ｍｇ ／ ｋｇ 和 １０ｍｇ ／ ｋｇ ； ２ ， ４Ｄ５ｍｇ ／ ｋｇ 和 １０ｍｇ ／ ｋｇ ； 脱落酸 、 萘乙酸 、 氯吡脲 、 烯效唑 ３ｍｇ ／ ｋｇ 和 １０ｍｇ ／ ｋｇ ； 吲哚 ３ 乙酸 、 吲哚丁酸 ５ｍｇ ／ ｋｇ 和 １０ｍｇ ／ ｋｇ 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ３ 　 方法提要 试样用甲醇进行超声提取 ， 在选定的工作条件下 ， 用高效液相色谱仪 （ 配有二极管阵列检测器 ） 进行测定 ， 以保留时间定性 ， 外标法定量 。 ４ 　 试剂和材料 ４ ． １ 　 除非另有说明 ， 在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 中的一级水 。 ４ ． ２ 　 甲醇 ： 色谱纯 。 ４ ． ３ 　 乙腈 ： 色谱纯 。 ４ ． ４ 　 甲酸 ： 色谱纯 。 ４ ． ５ 　 乙酸铵 ： 色谱纯 。 ４ ． ６ 　 冰乙酸 ： 优级纯 。 ４ ． ７ 　 甲酸溶液 （ １＋１０００ ）： 移取 １．０ｍＬ 甲酸 （ ４．４ ） 与 １０００ｍＬ 水混匀 。 ４ ． ８ 　 乙酸铵溶液 （ ０．７７ｇ ／ Ｌ ）： 称取 ０．７７ｇ 乙酸铵 （ ４．５ ）， 用水溶解并定容至 １０００ｍＬ 。 ４ ． ９ 　 冰乙酸溶液 （ １＋５０ ）： 移取 ２０．０ｍＬ 冰乙酸 （ ４．６ ） 与 １０００ｍＬ 水混匀 。 ４ ． １０ 　 ２ 硝基苯酚钠 、 ４ 硝基苯酚钠 、 ５ 硝基邻甲氧基苯酚钠 、 ２ ， ４ 二氯苯氧乙酸 （ ２ ， ４Ｄ ）、 脱落酸 、 萘乙酸 、 氯吡脲 、 烯效唑 、 吲哚 ３ 乙酸 、 吲哚丁酸标准品 ： 已知质量分数 ， 狑 ≥ ９８．０％ ， 信息参见附录 Ａ 中表 Ａ．１ 。 ４ ． １１ 　 复硝酚钠标准储备溶液 ： 称取适量的 ２ 硝基苯酚钠 、 ４ 硝基苯酚钠 、 ５ 硝基邻甲氧基苯酚钠标准 １ 犌犅 ／ 犜 ３７５００ — ２０１９ 品 ， 用甲醇配制成各个标准物质浓度为 ２０００ｍｇ ／ Ｌ 的标准储备溶液 。 ４ ． １２ 　 复硝酚钠标准溶液 ： 准确移取适量的复硝酚钠标准储备溶液 （ ４．１１ ）， 用甲醇稀释成 ２００ｍｇ ／ Ｌ 的复硝酚钠标准溶液 。 ４ ． １３ 　 ２ ， ４Ｄ 标准储备溶液 ： 称取适量的 ２ ， ４Ｄ 标准品 ， 用甲醇配制成浓度为 ２０００ｍｇ ／ Ｌ 的标准储备溶液 。 ４ ． １４ 　 ２ ， ４Ｄ 标准溶液 ： 准确移取适量的 ２ ， ４Ｄ 标准储备溶液 （ ４．１３ ）， 用甲醇配制成浓度为 ２００ｍｇ ／ Ｌ 的 ２ ， ４Ｄ 标准溶液 。 现用现配 。 ４ ． １５ 　 脱落酸 、 萘乙酸 、 氯吡脲 、 烯效唑标准储备溶液 ： 称取适量的脱落酸 、 萘乙酸 、 氯吡脲 、 烯效唑标准品 ， 用甲醇配制成浓度为 ４０００ｍｇ ／ Ｌ 的标准储备溶液 。 ４ ． １６ 　 脱落酸 、 萘乙酸 、 氯吡脲 、 烯效唑混合标准溶液 ： 准确移取适量的脱落酸 、 萘乙酸 、 氯吡脲 、 烯效唑标准储备溶液 （ ４．１５ ）， 用甲醇配制成浓度为 ４００ｍｇ ／ Ｌ 的脱落酸 、 萘乙酸 、 氯吡脲 、 烯效唑混合标准溶液 。 现用现配 。 ４ ． １７ 　 吲哚 ３ 乙酸 、 吲哚丁酸标准储备溶液 ： 称取适量的吲哚 ３ 乙酸 、 吲哚丁酸标准品 ， 用甲醇配制成浓度为 ２０００ｍｇ ／ Ｌ 的标准储备溶液 。 ４ ． １８ 　 吲哚 ３ 乙酸 、 吲哚丁酸混合标准溶液 ： 准确移取适量的吲哚 ３ 乙酸 、 吲哚丁酸标准储备溶液 （ ４．１７ ）， 用甲醇配制成浓度为 ２００ｍｇ ／ Ｌ 的吲哚 ３ 乙酸 、 吲哚丁酸混合标准溶液 。 现用现配 。 ５ 　 仪器与设备 ５ ． １ 　 高效液相色谱仪 ： 配有二极管阵列检测器 （ ＰＤＡ ）。 ５ ． ２ 　 色谱数据处理机 。 ５ ． ３ 　 微量注射器 ： ５０ μ Ｌ 。 ５ ． ４ 　 高速离心机 ： 最高转速不低于 ４０００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ５ ． ５ 　 漩涡混合器 。 ５ ． ６ 　 超声波清洗器 。 ５ ． ７ 　 电子天平 ： 精度 ０．１ｍｇ 。 ５ ． ８ 　 金属试验筛 ： ０．５ｍｍ 。 ５ ． ９ 　 有机相微孔滤膜 ： ０．２２ μ ｍ 。 ６ 　 测定步骤 ６ ． １ 　 样品制备 固体样品应粉碎至全部过 ０．５ｍｍ 试验筛 ， 待用 。 液体样品混匀后直接称量 。 ６ ． ２ 　 试液提取 称取 ０．１ｇ ～ １．０ｇ 试样 （ 精确至 ０．０００１ｇ ） 置于 １０ｍＬ 离心管中 ， 加入 １０ｍＬ 甲醇 （ ４．２ ）， 涡旋振荡 １ｍｉｎ ， 超声提取 ３０ｍｉｎ 后冷却至室温 ， 用甲醇定容 ， 高速离心 １０ｍｉｎ ， 取 １ｍＬ 上清液过 ０．２２ μ ｍ 有机相滤膜 ， 待测 。 ６ ． ３ 　 高效液相色谱参考条件 ６ ． ３ ． １ 　 复硝酚钠色谱参考条件如下 ： ａ ） 　 色谱柱 ： ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ （ 内径 ） 不锈钢柱 ， 内装 Ａｔｌａｎｔｉｓ ? Ｔ ３ 、 ５．０ μ ｍ 填充物 （ 或具有同等效果的色谱柱 ）； ２ 犌犅 ／ 犜 ３７５００ — ２０１９ ｂ ） 　 流动相 ： 甲醇 （ ４．２ ） ＋０．１％ 甲酸溶液 （ ４．７ ） ＝５５＋４５ （ 体积比 ）， 经滤膜过滤 ， 并进行脱气 ； ｃ ） 　 流速 ： ０．８ｍＬ ／ ｍｉｎ ； ｄ ） 　 柱温 ： ３５℃ ； ｅ ） 　 检测波长 ： ２５４ｎｍ ； ｆ ） 　 进样量 ： １０ μ Ｌ 。 ６ ． ３ ． ２ 　 ２ ， ４Ｄ 色谱参考条件如下 ： ａ ） 　 色谱柱 ： ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ （ 内径 ） 不锈钢柱 ， 内装 ＲＰ１８ 、 ５．０ μ ｍ 填充物 （ 或具有同等效果的色谱柱 ）； ｂ ） 　 流动相 ： 乙腈 （ ４．３ ） ＋ 乙酸铵溶液 （ ４．８ ） ＝６０＋４０ （ 体积比 ）； ｃ ） 　 流速 ： ０．８ｍＬ ／ ｍｉｎ ； ｄ ） 　 柱箱温度 ： ３５℃ ； ｅ ） 　 检测波长 ： ２８３ｎｍ ； ｆ ） 　 进样量 ： １０ μ Ｌ 。 ６ ． ３ ． ３ 　 脱落酸 、 萘乙酸 、 氯吡脲和烯效唑色谱参考条件如下 ： ａ ） 　 色谱柱 ： ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ （ 内径 ） 不锈钢柱 ， 内装 ＲＰ １８ 、 ５．０ μ ｍ 填充物 （ 或具有同等效果的色谱柱 ）； ｂ ） 　 流动相 ： 流动相及梯度洗脱条件见表 １ ； ｃ ） 　 流速 ： １．０ｍＬ ／ ｍ