书 书 书犐犆犛 ６７ ． ０４０ 犡 ０４ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ３７４９２ — ２０１９ 粮油检验 　 谷物及其制品水溶性膳食纤维的测定 　 酶重量法 犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀狅犳犵狉犪犻狀犪狀犱狅犻犾狊 — 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狊狅犾狌犫犾犲犱犻犲狋犪狉狔犳犻犫狉犲犻狀犮犲狉犲犪犾狊犪狀犱犮犲狉犲犪犾狊狆狉狅犱狌犮狋狊 — 犈狀狕狔犿犲犵狉犪狏犻犿犲狋狉犻犮犿犲狋犺狅犱 ２０１９  ０５  １０ 发布 ２０１９  １２  ０１ 实施 国家市场监督管理总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２００９ 给出的规则起草 。 本标准由国家粮食和物资储备局提出 。 本标准由全国粮油标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ２７０ ） 归口 。 本标准起草单位 ： 农业农村部谷物及制品质量监督检验测试中心 （ 哈尔滨 ）。 本标准主要起草人 ： 单宏 、 苏萍 、 杜英秋 、 马永华 、 陈国友 、 程爱华 、 王乐凯 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ３７４９２ — ２０１９ 粮油检验 　 谷物及其制品水溶性膳食纤维的测定 　 酶重量法 １ 　 范围 本标准规定了酶重量法测定谷物及其制品水溶性膳食纤维的原理 、 试剂和材料 、 仪器和设备 、 分析步骤 、 结果计算和精密度要求 。 本标准适用于谷物及其制品中水溶性膳食纤维的测定 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢ ／ Ｔ５４９０ 　 粮油检验 　 一般规则 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ３ 　 原理 谷物及制品试样在缓冲溶液及高温高压作用下水解 ， 通过用热稳定的 α  淀粉酶使样品凝胶 ， 过滤 ， 再通过蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶对样品进行消化 ， 去除蛋白质和淀粉 ， 以不能消化的残渣计重 ， 除去灰分为水溶性膳食纤维 。 ４ 　 试剂和材料 除另有说明外 ， 所用试剂应为分析纯 ， 试验用水应符合 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 中二级水的规定 。 ４ ． １ 　 无水乙酸钠 （ ＣＨ ３ ＣＯ ２ Ｎａ ）。 ４ ． ２ 　 无水磷酸氢二钠 （ Ｎａ ２ ＨＰＯ ４ ）。 ４ ． ３ 　 磷酸二氢钠 （ ＮａＨ ２ ＰＯ ４ · Ｈ ２ Ｏ ）。 ４ ． ４ 　 乙酸 （ ＣＨ ３ ＣＯ ２ Ｈ ２ ）。 ４ ． ５ 　 无水乙醇 （ ＣＨ ３ ＣＨ ２ ＯＨ ）。 ４ ． ６ 　 丙酮 （ ＣＨ ３ ＣＯＣＨ ３ ）。 ４ ． ７ 　 氢氧化钠 （ ＮａＯＨ ）。 ４ ． ８ 　 盐酸 （ ＨＣｌ ）。 ４ ． ９ 　 蛋白酶 。 ４ ． １０ 　 α  淀粉酶 （ 从猪胰脏提取的 ＶＩＢ 型 ）。 ４ ． １１ 　 淀粉葡萄糖苷酶 。 ４ ． １２ 　 玻璃棉 。 ４ ． １３ 　 ２．０ｍｏｌ ／ Ｌ 缓冲液 。 ４ ． １３ ． １ 　 乙酸溶液 （ ２．０ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 取 １１５ｍＬ 乙酸 （ ４．４ ）， 加入 ７００ｍＬ 水 ， 混匀后用水定容至 １Ｌ 。 ４ ． １３ ． ２ 　 乙酸钠溶液 （ ２．０ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 称取 １６４．００ｇ 无水乙酸钠 （ ４．１ ）， 溶于水 ， 移入 １Ｌ 容量瓶中 ， 稀释至 １ 犌犅 ／ 犜 ３７４９２ — ２０１９ 刻度 。 ４ ． １３ ． ３ 　 乙酸  乙酸钠缓冲溶液 （ ｐＨ ≈ ４．５ ）： 将 ４０ｍＬ２．０ｍｏｌ ／ Ｌ 乙酸溶液 （ ４．１３．１ ） 与 ４０ｍＬ２．０ｍｏｌ ／ Ｌ 乙酸钠溶液 （ ４．１３．２ ） 混合均匀 。 ４ ． １４ 　 磷酸盐缓冲液 。 ４ ． １４ ． １ 　 磷酸氢二钠溶液 （ ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 称取 １４．２０ｇ 无水磷酸氢二钠 （ ４．２ ）， 溶于水 ， 移入 １０００ｍＬ 容量瓶中 ， 稀释至刻度 。 ４ ． １４ ． ２ 　 磷酸二氢钠溶液 （ ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 称取 １３．８０ｇ 磷酸二氢钠 （ ４．３ ）， 溶于水 ， 移入 １０００ｍＬ 容量瓶中 ， 稀释至刻度 。 ４ ． １４ ． ３ 　 ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸盐缓冲液 （ ｐＨ ≈ ７ ）： 将 ６１ｍＬ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸氢二钠溶液 （ ４．１４．１ ） 与 ３９ｍＬ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸二氢钠溶液 （ ４．１４．２ ） 混合均匀 。 ４ ． １５ 　 蛋白酶溶液 ： 称取 ５．００ｇ 蛋白酶 （ ４．９ ）， 溶解于 １００ｍＬ 磷酸盐缓冲液 （ ４．１４．３ ） 中 ， 混合 １５ｍｉｎ 。 在 １５００× 犵 离心 １０ｍｉｎ ， 然后用含有玻璃棉 （ ４．１２ ） 的玻璃坩埚过滤 。 每日制备并冷藏 ， 于 ０℃ ～ ５℃ 冰箱保存 。 酶的活性及判定标准见附录 Ａ 。 ４ ． １６ 　 α  淀粉酶溶液 ： 称取 ５．００ｇ α  淀粉酶 （ ４．１０ ） 溶解于 １００ｍＬ 磷酸盐缓冲液 （ ４．１４．３ ） 中 ， 混合 １５ｍｉｎ 。 １５００× 犵 离心 １０ｍｉｎ ， 然后用含有玻璃棉 （ ４．１２ ） 的玻璃坩埚过滤 。 每日制备并冷藏 ， 于 ０℃ ～ ５℃ 冰箱保存 。 酶的活性及判定标准见附录 Ａ 。 ４ ． １７ 　 淀粉葡萄糖苷酶 ： 称取 ５．００ｇ 淀粉葡萄糖苷酶 （ ４．１１ ）， 溶解于 １００ｍＬ 磷酸盐缓冲液 （ ４．１４．３ ） 中 ， 混合 １５ｍｉｎ 。 在 １５００× 犵 离心 １０ｍｉｎ ， 然后用含有玻璃棉 （ ４．１２ ） 的玻璃坩埚过滤 。 每日制备并冷藏 ， 于 ０℃ ～ ５℃ 冰箱保存 。 酶的活性及判定标准见附录 Ａ 。 ４ ． １８ 　 ８０％ 乙醇溶液 ： 取 ８００ｍＬ 无水乙醇 （ ４．５ ）， 置 １Ｌ 容量瓶中 ， 用水稀释至刻度 ， 混匀 。 ４ ． １９ 　 氢氧化钠溶液 （ １ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 称取 ４．００ｇ 氢氧化钠 （ ４．７ ）， 溶于水 ， 移入 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 稀释至刻度 。 ４ ． ２０ 　 盐酸溶液 （ １ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 取 ８．３ｍＬ 盐酸 （ ４．８ ）， 置于 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 用水稀释至刻度 ， 混匀 。 ５ 　 仪器和设备 ５ ． １ 　 试验用粉碎机 ： 可保证将样品粉碎至全部通过 ２０ 目筛 。 ５ ． ２ 　 分析天平 ： 感量 ０．０１ｇ 、 ０．０００１ｇ 。 ５ ． ３ 　 烘箱 ： １０５℃±２℃ 。 ５ ． ４ 　 马弗炉 ： ５２５℃±５℃ 。 ５ ． ５ 　 水浴锅 ： １００℃±１℃ 。 ５ ． ６ 　 高压灭菌器 。 ５ ． ７ 　 酸度计 。 ５ ． ８ 　 具塞三角瓶 ： ２５０ｍＬ 。 ５ ． ９ 　 具塞磨口试管 ： ５０ｍＬ 。 ５ ． １０ 　 坩埚式耐热玻璃滤器 ： 容量 ６０ｍＬ ， 孔径 ４０ μ ｍ 。 坩埚预处理 ： 于耐热玻璃滤器中 ， 铺 １ｇ ～ ３ｇ 玻璃棉 （ ４．１２ ）， 移至烘箱内 ， １０５℃ 烘 ４ｈ ， 取出置干燥器中冷却至室温 ， 备用 。 ５ ． １１ 　 回流冷凝装置 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ３７４９２ — ２０１９ ５ ． １２ 　 抽滤装置 ： 由抽滤瓶 、 抽滤垫及水泵组成 。 ６ 　 分析步骤 ６ ． １ 　 试样制备 取适量试样磨粉 ， 全部过孔径为 １ｍｍ （ ２０ 目 ） 的筛 ， 混匀 。 置于样品盒中室温保存 。 ６ ． ２ 　 试样测定 ６ ． ２ ． １ 　 称样 准确称取试样 ０．５ｇ （ 精确至 ０．０００１ｇ ）， 置 ５０ｍＬ 具塞磨口试管中 。 如果试样的脂肪含量超过 １０％ ， 则需要先脱脂再进行测定 。 ６ ． ２ ． ２ 　 水解 加入 ２ｍＬ 缓冲溶液 （ ４．１３．３ ）， 混匀 ， 置于 １２０℃１．３×１０ ５ Ｐａ 高压灭菌器中水解 ６０ｍｉｎ 。 ６ ． ２ ． ３ 　 淀粉酶酶解 加入 １００ μ Ｌ α  淀粉酶溶液 （ ４．１６ ）， 加塞 ， 置于 ６０℃±１℃ 水浴锅中酶解消化 ３０ｍｉｎ 。 然后将经过酶处理的试样倒入玻璃滤器中 ， 抽滤 ， 用 ５０ｍＬ 试管收集滤液 ， 用 １０ｍＬ 热水冲洗滤器 ， 将所有残留颗粒无损失地转移至滤器中 ， 再用 ５ｍＬ 热水冲洗坩埚 ， 洗液并入上述滤液 。 ６ ． ２ ． ４ 　 调整 狆犎 在滤液中加入 ４ｍＬ 乙酸  乙酸钠缓冲溶液 （ ４．１３．３ ）， 用氢氧化钠溶液 （ ４．１９ ） 或盐酸溶液 （ ４．２０ ）， 调滤液 ｐＨ 至 ５．２ 。 ６ ． ２ ． ５ 　 淀粉葡萄糖苷酶酶解 加入 ５０ μ Ｌ 淀粉葡萄糖苷酶 （ ４．１７ ）， 搅拌均匀 ， 加塞 ， 置于 ６０℃±１℃ 水浴锅中酶解消化 ３０ｍｉｎ 。 ６ ． ２ ． ６ 　 蛋白酶解 加入 ２０ μ Ｌ 蛋白酶溶液 （ ４．１５ ）， 搅拌均匀 ， 加塞 ， 置于 ６０℃±１℃ 水浴锅中酶解消化 ３０ｍｉｎ 。 ６ ． ２ ． ７ 　 沉淀 将滤液转移至 ２５０ｍＬ 三角瓶中 ， 加入无水乙醇 （ ４．５ ）， 使乙醇与试样液的体积比为 ４∶１ 。 混匀 ， 加塞 ， 静置 ６０ｍｉｎ ， 促使沉淀生成 。 ６ ． ２ ． ８ 　 洗涤 将经过沉淀处理的试液倒入处理后玻璃滤器中 ， 抽滤 ， 用 ８