书 书 书犐犆犛 ６５ ． ０２０ ． ２０ 犅 ２５ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ３７０６８ — ２０１８ 牧草抗性鉴定技术规范 　 耐酸性测定 犜犲犮犺狀犻犮犪犾狊狆犲犮犻犳犻犮犪狋犻狅狀犳狅狉犳狅狉犪犵犲狊狋狉犲狊狊狋狅犾犲狉犪狀犮犲狋犲狊狋 — 犃犮犻犱狋狅犾犲狉犪狀犮犲狋犲狊狋 ２０１８  １２  ２８ 发布 ２０１９  ０７  ０１ 实施 国家市场监督管理总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２００９ 给出的规则起草 。 本标准由中华人民共和国农业农村部提出 。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ２７４ ） 归口 。 本标准起草单位 ： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 、 全国畜牧总站 。 本标准主要起草人 ： 李向林 、 赵小丽 、 仝宗永 、 何峰 、 万里强 、 王瑜 、 苗丽宏 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ３７０６８ — ２０１８ 牧草抗性鉴定技术规范 　 耐酸性测定 １ 　 范围 本标准规定了牧草抗性鉴定中耐酸性测定的技术规范 。 本标准适用于不同牧草和同一牧草不同品种间的耐酸性评价 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢ ／ Ｔ２９３０．４ 　 牧草种子检验规程 　 发芽试验 ３ 　 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 ３ ． １ 耐酸性 　 犪犮犻犱狋狅犾犲狉犪狀犮犲 牧草对不同酸性条件的耐受能力 。 ３ ． ２ 种子萌发期 　 狊犲犲犱犵犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狊狋犪犵犲 从播种到幼苗真叶完全展开的时期 。 ３ ． ３ 苗期 　 狊犺狅狅狋狊狋犪犵犲 从幼苗真叶完全展开到出现分枝或分蘖的时期 。 ３ ． ４ 营养生长期 　 狏犲犵犲狋犪狋犻狏犲犵狉狅狑狋犺狊狋犪犵犲 从苗期到禾本科草抽穗期或豆科草现蕾期前的时期 。 ４ 　 耐酸性测定 ４ ． １ 　 种子萌发期 ４ ． １ ． １ 　 样品准备 每份待测牧草 ， 挑选饱满健康种子 １６００ 粒 。 ４ ． １ ． ２ 　 酸胁迫处理 设置 ３ 个酸胁迫梯度 ， 将稀盐酸溶液分别调至 ｐＨ 值为 ４．０ 、 ４．５ 和 ５．０ ， 加入发芽床 ， 每个酸度处理 ４ 次重复 ， 每个重复 １００ 粒种子 ， 其他参数按照 ＧＢ ／ Ｔ２９３０．４ 的方法进行发芽试验 ， 每 ２ 天校正一次 ｐＨ 值 。 １ 犌犅 ／ 犜 ３７０６８ — ２０１８ ４ ． １ ． ３ 　 对照处理 对照处理设 ４ 个重复 ， 每个重复 １００ 粒种子 ， 按照 ＧＢ ／ Ｔ２９３０．４ 的方法进行发芽试验 。 ４ ． １ ． ４ 　 种子发芽率计算 每个酸胁迫梯度处理分别进行计算 。 种子发芽率按式 （ １ ）、 式 （ ２ ）、 式 （ ３ ） 计算 ： 犌 ａ ＝ 犡 Ｇａ 犡 Ｔａ × １００ …………………………（ １ ） 犌 ｃｋ ＝ 犡 Ｇｃｋ 犡 Ｔｃｋ × １００ …………………………（ ２ ） ＲＧ ａ ＝ 犌 ａ 犌 ｃｋ × １００ …………………………（ ３ ） 　　 式中 ： 犌 ａ ——— 酸胁迫培养的发芽率 ， ％ ； 犡 Ｇａ ——— 酸胁迫培养 ４ 次重复萌发种子数的平均值 ； 犡 Ｔａ ——— 酸胁迫培养 ４ 次重复种子总数的平均值 ； 犌 ｃｋ ——— 对照培养的发芽率 ， ％ ； 犡 Ｇｃｋ ——— 对照培养 ４ 次重复萌发种子数的平均值 ； 犡 Ｔｃｋ ——— 对照培养 ４ 次重复种子总数的平均值 ； ＲＧ ａ ——— 相对发芽率 ， 即每个处理的实测发芽率与对照发芽率的百分比 ， ％ 。 ４ ． ２ 　 苗期 ４ ． ２ ． １ 　 育苗 取饱满健康的种子 ， 每个处理 ４ 个重复 ， 每个重复 １００ 粒 ， 按照 ＧＢ ／ Ｔ２９３０．４ 的方法发芽后 ， 用海绵条将幼苗固定在带有小孔的塑料板中 ， 置于含有 Ｈｏａｇｌａｎｄ 营养液的方形培养盆中 ， ｐＨ 调至 ７．０ ， 每盆留苗 ３０ 株 ， 置于人工气候箱中培养 ， 光照强度为 ２５００ｌｘ ， 光照周期为 １６ｈ ／ ８ｈ （ 光照 ／ 黑暗 ）， 温度设置为 ２５℃ ／ ２０℃ （ 光照 ／ 黑暗 ）， 培养盆内安置加氧泵 ， 长出叶片后开始通气 ， 每天保持 ２４ｈ 通气 ， 每 ２ 天校正一次 ｐＨ 值 。 ４ ． ２ ． ２ 　 酸胁迫处理 幼苗长至三叶时 ， 进行苗期酸胁迫处理 。 用 １ｍｏｌ ／ ＬＨＣｌ 和 ＮａＯＨ 调节培养液的酸碱度 ， 使三个胁迫处理的 ｐＨ 值分别稳定在 ４．０ 、 ４．５ 和 ５．０ 。 每个处理 ４ 个重复 。 酸胁迫处理 ２０ｄ 后 ， 将幼苗移到 ｐＨ 为 ７．０ 的正常培养液中培养 ４ｄ ， 调查存活苗数 ， 以叶片转呈鲜绿色者为存活 。 ４ ． ２ ． ３ 　 酸胁迫存活率计算 每个酸胁迫梯度处理分别进行计算 。 酸胁迫存活率按式 （ ４ ） 计算 ： 犛 ａ ＝ 犡 ｓａ 犡 ｓｔ × １００ …………………………（ ４ ） 　　 式中 ： 犛 ａ ——— 酸胁迫存活率 ， ％ ； 犡 ｓａ ——— 酸胁迫后 ４ 次重复存活苗数的平均值 ； 犡 ｓｔ ——— 酸胁迫前 ４ 次重复总苗数的平均值 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ３７０６８ — ２０１８ ４ ． ３ 　 营养生长期 ４ ． ３ ． １ 　 育苗 每盆留苗 ２０ 株 ， 育苗方法同 ４．２．１ 。 ４ ． ３ ． ２ 　 酸胁迫处理 植株分蘖或分枝达到 ３ 个时 ， 进行酸胁迫处理 。 用 １ｍｏｌ ／ ＬＨＣｌ 和 ＮａＯＨ 调节培养液的酸碱度 ， 使其 ｐＨ 值分别稳定在 ４．０ 、 ４．５ 和 ５．０ 。 酸胁迫 ２０ｄ 后 ， 将幼苗移到 ｐＨ 为 ７．０ 的正常培养液中培养 ４ｄ ， 调查存活苗数 ， 以叶片转呈鲜绿色者为存活 。 ４ ． ３ ． ３ 　 酸胁迫存活率计算 同 ４．２．３ 。 ５ 　 耐酸性评价 根据测试结果 ， 将牧草耐酸性分为四级 ， 即极强 （ ＨＲ ， ｈｉｇｈｌｙｒｅｓｉｓｔａｎｔ ）、 强 （ Ｒ ， ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ）、 中 （ ＭＲ ， ｍｏｄｅｒａｔｅｌｙｒｅｓｉｓｔａｎｔ ） 和弱 （ Ｓ ， ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ）。 种子萌发期 、 苗期 、 营养生长期的耐酸性等级分别见表 １ 、 表 ２ 和表 ３ 。 按照 ｐＨ 值由高到低的次序进行评价 ， 以相对发芽率或存活率数值达到要求所对应的最高 ｐＨ 为准 ， 进行耐酸性等级划分 。 表 １ 　 牧草萌发期耐酸性评价 ｐＨ 相对发芽率 ＲＧ ａ ／ ％ 耐酸性等级 ５．０ ＜ ５０ 弱 （ Ｓ ） ４．５ ＜ ５０ 中等 （ ＭＲ ） ４．０ ＜ ５０ 强 （ Ｒ ） ４．０ ≥ ５０ 极强 （ ＨＲ ） 表 ２ 　 牧草苗期耐酸性评价 ｐＨ 存活率 犛 ａ ／ ％ 耐酸性等级 ５．０ ＜ ５０ 弱 （ Ｓ ） ４．５ ＜ ５０ 中等 （ ＭＲ ） ４．０ ＜ ５０ 强 （ Ｒ ） ４．０ ≥ ５０ 极强 （ ＨＲ ） 表 ３ 　 牧草营养生长期耐酸性评价 ｐＨ 存活率 犛 ａ ／ ％ 耐酸性等级 ５．０ ＜ ５０ 弱 （ Ｓ ） ４．５ ＜ ５０ 中等 （ ＭＲ ） ４．０ ＜ ５０ 强 （ Ｒ ） ４．０ ≥ ５０ 极强 （ ＨＲ ） 犌犅 ／ 犜 ３７０６８ — ２０１８