书 书 书犐犆犛 ０７ ． ０８０ 犃 ４０ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ３４７７６ — ２０１７ 犜 ４ 犇犖犃 连接酶 　 酶活及杂质检测方法 犜 ４ 犇犖犃犾犻犵犪狊犲 — 犇犲狋犲犮狋犻狅狀犿犲狋犺狅犱狊狅犳犪犮狋犻狏犻狋狔犪狀犱犻犿狆狌狉犻狋犻犲狊狅犳犲狀狕狔犿犲 ２０１７  １１  ０１ 发布 ２０１８  ０５  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书/G21 　　 /G22 　　 /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２００９ /G26 /G27 /G28 /G29 /G2A /G2B /G2C 。 /G21 /G22 /G23 /G2D /G2E /G2F /G30 /G31 /G32 /G30 /G33 /G34 （ ＳＡＣ ／ ＳＷＧ１１ ） /G35 /G36 。 /G21 /G22 /G23 /G2B /G2C /G37 /G38 ： /G39 /G2F /G3A /G3B /G3C /G3D /G3E /G3F /G40 、 /G41 /G42 /G43 /G44 /G45 /G46 /G44 /G47 /G3C /G48 /G49 /G4A /G4B 、 /G4C /G4D /G43 /G4E /G4F /G50 /G48 /G49 /G4A /G4B 。 /G21 /G22 /G23 /G51 /G52 /G2B /G2C /G53 ： /G54 /G55 /G43 、 /G55 /G56 /G57 、 /G58 /G4B /G59 、 /G5A /G5B /G5C 、 /G5D /G5E /G5F 、 /G60 /G61 /G4E 、 /G62 /G63 、 /G64 /G65 /G66 、 /G67 /G68 /G69 、 /G55 /G6A 、 /G6B /G6C 、 /G6D /G6E /G39 、 /G5D /G6F /G57 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ３４７７６ — ２０１７ 犜 ４ 犇犖犃 /G23 /G24 /G25 　 /G25 /G26 /G27 /G28 /G29 /G2A /G2B /G2C /G2D １ 　 /G2E /G2F /G21 /G22 /G23 /G29 /G70 /G71 Ｔ４ＤＮＡ /G72 /G73 /G32 /G28 /G74 /G75 、 /G76 /G77 /G28 /G78 /G3A /G79 /G7A 。 /G21 /G22 /G23 /G7B /G7C /G7D /G33 /G7E /G7F /G80 /G81 /G82 /G83 /G3E /G3F /G7C /G28 Ｔ４ＤＮＡ /G72 /G73 /G32 。 ２ 　 /G30 /G2E /G31 /G32 /G33 /G34 /G35 /G84 /G85 /G86 /G87 /G88 /G7D /G21 /G86 /G87 /G28 /G89 /G7C /G8A /G8B /G8C /G8D /G8E /G28 。 /G8F /G8A /G90 /G91 /G92 /G28 /G93 /G7C /G86 /G87 ， /G94 /G90 /G91 /G92 /G28 /G95 /G21 /G7B /G7C /G7D /G21 /G86 /G87 。 /G8F /G8A /G8C /G90 /G91 /G92 /G28 /G93 /G7C /G86 /G87 ， /G96 /G97 /G98 /G95 /G21 （ /G99 /G9A /G9B /G48 /G28 /G9C /G9D /G37 ） /G7B /G7C /G7D /G21 /G86 /G87 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 /G7F /G9E /G9F /GA0 /GA1 /G7C /GA2 /G29 /GA3 /G6F /G3B /GA0 /G79 /G7A ＹＹ ／ Ｔ００８７ 　 /GA4 /GA5 /GA6 /GA7 ＹＹ ／ Ｔ０６５７ 　 /GA8 /G7C /GA9 /GAA /GAB ＪＪＧ６４６ 　 /GAC /GAD /GAE /G78 /G70 /G29 /GAF ３ 　 /G36 /G37 /G38 /G39 /G3A /G84 /G85 /G3D /GB0 /G6F /G70 /GB1 /G7B /G7C /G7D /G21 /G86 /G87 。 ３ ． １ 犇犖犃 /G23 /G24 /G25 　 犇犖犃犾犻犵犪狊犲 /GB2 /GB3 /GB4 /GB5 ＤＮＡ /GB6 /GB7 /G28 /GB8 /G36 /G32 ， /GB9 /GBA ＡＴＰ /GBB ＮＡＤ /GA2 /GBC /GBD /GBE /G28 /GBF /GC0 /GC1 /GC2 /GC3 /GC4 /G28 /GC5 /GC6 /GC7 /G7F /G80 /GC8 ３′ /GC9 /G46 /G6F ５′ /GCA /GC7 /G46 /GCB /GCC /GCA /GC7 /GCD /GCE /GCF 。 /G3B ： ＤＮＡ /G72 /G73 /G32 /GC1 /GC2 /GD0 /G82 /G8D /GD1 /G8A ＤＮＡ /GBB ＲＮＡ 。 /GD2 /GD3 /G32 /G28 /GD4 /GD5 /G8C /GD6 ， /GD7 /G89 /G39 /GD8 /G81 /GD9 /GBF /G39 /GC8 /GD8 /G82 /G28 /GDA /GBA /G44 /G80 /G8D /GD1 /G8A ＡＴＰ /GBB ＮＡＤ ＋ 。 ３ ． ２ 犜 ４ 犇犖犃 /G23 /G24 /G25 　 犜 ４ 犇犖犃犾犻犵犪狊犲 /GB2 /GB3 Ｔ４ /GDB /GDC /GDD /G46 /G44 ３０ /G28 /GDE /GDF /GD8 /G82 ， /GD1 ＡＴＰ /G33 /G7E /GDA /GBA /G44 /G80 ， /GC1 /GC2 /GE0 /GB6 ＤＮＡ /GBB ＲＮＡ /G28 ５′ /GCA /GC7 /GE1 /GE2 /G6F ３′ /GC9 /G46 /GE1 /GE2 /GCB /GCC /GCA /GC7 /GCD /GCE /GCF 。 /G3B ： /GE3 /G48 ＨｉｓＴａｇ ， /G7F /G80 /G77 /GC0 /GE4 /G7E ７０ｋｕ ， /GE5 /GE6 /G7D /GE7 /GC2 /G48 Ｔ４ＤＮＡ /G72 /G73 /G32 /GE8 /GE9 /GEA /GDD /G28 犈 ． 犆狅犾犻 /GDC /GEB 。 /G51 /G52 /G33 /G7C /G8A /GC1 /GC2 ＤＮＡ /GE1 /GE2 /GEC /GC8 /G28 /G72 /G73 ， /G9C /GED /GE0 /GB6 /GC5 /GC7 /G39 /G28 /G37 /GB6 /GEE /GEF 。 ３ ． ３ /G25 /G26 /G3C /G3D /G3E 　 狌狀犻狋犪犮狋犻狏犻狋狔 /GF0 ２０ μ Ｌ１×Ｔ４ＤＮＡ /G72 /G73 /G32 /GD7 /G89 /GF1 /GF2 /GAD /G39 ， １６℃ /GD7 /G89 /GF3 /G87 /G84 ， ３０ｍｉｎ /GBF /GF4 ５０％ /G28 /GF5 Ｈｉｎｄ Ⅲ /GF6 /GC2 /G28 λ ＤＮＡ /GF7 /GF8 ［ ５′ /GE2 /GF9 /GFA /G7E ０．１２ μ ｍｏｌ ／ Ｌ （ ３００ μ ｇ ／ ｍＬ ）］ /G72 /G73 /G9B /GFB /G28 /G32 /GC0 /GFC /G7E １ /G74 /G75 /G37 /G38 。 ４ 　 /G3F /G40 /G37 /G84 /G85 /GFD /GFE /GB0 /G7B /G7C /G7D /G21 /G86 /G87 。 ＰＣＲ 　 /GFF /G21 /G32 /GB6 /G22 /GD7 /G89 （ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ ）。 ＳＤＳＰＡＧＥ 　 /G23 /GCD /G24 /G46 /G25 /GC7 /G26  /GFF /G27 /G28 /G29 /G2A /G2B /G2C /GA4 /GA5 （ ｓｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌ １ 犌犅 ／ 犜 ３４７７６ — ２０１７ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｒｅｓｉｓ ）。 Ｔｒｉｓ 　 /G2D （ /GC9 /G2E /G46 ） /G2F /G46 /G2E /G24 （ Ｔｒｉｓ （ ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ） ｍｅｔｙｌａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ ）。 ５ 　 /G41 /G42 /G43 /G44 /G45 /G30 /G31 /G32 /G48 /G29 /G70 ， /G21 /G79 /G7A /G9B /G7C /G28 /G3B /G33 /G89 /G7E /G8C /G34 ＤＮＡ /G6F ＤＮａｓｅ /G28 /G7F /G9E /G35 /G3B /G33 ， /G9B /G48 /G3B /G33 /G36 /GAD /G37 /G38 /GDD /G39 /G3A /G4F 、 /G3B /GDD /G39 /G7F /GA6 /G3C /GF5 /GD9 /G3D /G3E