ICS65.020.20 CCSB16 中华人民共和国国家标准 GB/T28090—2025 代替GB/T28090—2011 假苍耳检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofEuphrosynexanthiifolia(Nutt.)A.Gray 2025-05-30发布 2025-12-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T28090—2011《假苍耳检疫鉴定方法》。与GB/T28090—2011相比,除结构调整 和编辑性改动外,主要技术变化如下: ———更改了“范围”(见第1章,2011年版的第1章); ———删除了术语“头状花序”,更改了术语“总苞”和“瘦果”的定义,增加了术语“总苞片”“总苞”(见 第3章,2011年版的第2章); ———更改了“假苍耳分类信息”(见第4章,2011年版的第3章); ———更改了“器具和试剂”(见第6章,2011年版的第5章); ———删除了“实验室检测鉴定”(见2011年版的第6章); ———增加了“现场取样”和“观察方法与样品制备”(见第7章和第8章); ———更改了“鉴定方法”(见第9章,2011年版的6.3); ———更改了“结果判定”(见第10章,2011年版的第8章); ———更改了“样品保存和处理”(见第11章,2011年版的第9章); ———增加了假银胶菊属及近似属形态特征(见附录B); ———更改了假苍耳形态特征(见附录C,2011年版的附录B和附录C); ———增加了假苍耳ITS序列扩增及测序信息和实时荧光PCR检测(见附录D和附录E)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)归口。 本文件起草单位:中国检验检疫科学研究院、宁夏回族自治区农业技术推广总站、中国海关科学技 术研究中心、二连海关技术中心、阿拉山口海关技术中心。 本文件主要起草人:徐晗、杜伟、赵晓丽、翟俊峰、袁淑珍、李兰、刘芳、田茜、刘梦娣、张婷、李宗泽。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2011年首次发布为GB/T28090—2011; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T28090—2025 假苍耳检疫鉴定方法 1 范围 本文件描述了假苍耳Euphrosynexanthiifolia(Nutt.)A.Gray的形态学和分子生物学检疫鉴定 方法。 本文件适用于假苍耳检疫鉴定。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语、定义和缩略语 3.1 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 总苞片 phyllary 生于花序最外层或下面的苞片。 3.1.2 总苞 involucre 由多枚总苞片组成,形成一轮或多轮包裹在花序外围的结构。 3.1.3 托苞 palea 菊科花序托上的鳞片状的苞片。 注:复数为paleae。 3.1.4 瘦果 achene 小形、干燥、果皮坚硬、不开裂、内含一粒种子的果实。 注:顶部通常有冠毛或其他附属物,基部通常与果梗相连。 3.2 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 Ct:循环阈值(cyclethreshold) DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleicacid) ITS:核糖体DNA内转录间隔区1和内转录间隔区2,以及5.8S核糖体基因(internaltranscribed spacers1and2andtheintervening5.8Sribosomalgene) PCR:聚合酶链式反应(polymerasechainreaction) 4 假苍耳分类信息 学名:Euphrosynexanthiifolia(Nutt.)A.Gray。 1GB/T28090—2025 异名:Cyclachaenaxanthiifolia(Nutt.)Fresen.,IvaxanthiifoliaNutt.。 中文名:假苍耳。 分类地位:木兰纲(Magnoliopsida),菊目(Asterales),菊科(Asteraceae),假银胶菊属(EuphrosyneDC.)。 假苍耳的其他基本信息见附录A。 5 方法原理 植株、花序、花、瘦果等形态特征是鉴定该属种类的主要依据;ITS序列、实时荧光PCR判定方法是 基于形态学准确鉴定的凭证标本和样品基础上,开发的分子生物学检测技术。 当植物体组织完好,且具备花、果等繁殖器官,采用形态学方法检疫鉴定。 当瘦果成熟,且形态完整,采用形态学方法检疫鉴定。 当送检样品是植株幼苗、叶片、不完整的花或果实等植物器官或组织,或含有植物组织的混合样品, 形态特征不完整或缺无,采用ITS序列或实时荧光PCR方法检疫鉴定。 实时荧光PCR方法适用于初筛鉴定,当判定结果存疑时,与ITS序列方法相结合。 6 器具和试剂 6.1 电子天平:感量1g。 6.2 体视显微镜。 6.3 金属浴或水浴锅。 6.4 核酸浓度检测仪。 6.5 PCR仪。 6.6 电泳仪。 6.7 实时荧光PCR仪。 6.8 高压灭菌器。 7 现场取样 7.1 监测现场 在监测现场采集植株鉴定用样品,宜采集具有花、果的植株,且植株完整、形态特征完好。将样品装入 样品袋内,贴上标签。采集样品如果需要长期保存或用于核酸提取,则采集方法见SN/T4715—2016。 7.2 植物产品 将现场检疫抽取的送检样品充分混匀,制成平均样品。采用四分法,视样品多少取平均样品的二分 之一至四分之三(较少样品时)作为试验样品,用电子天平(6.1)称取其重量并记录,每份试验样品不少 于1kg,剩余的平均样品加贴标签作为保留样品保存。送检样品不足1kg的全部检测。 8 观察方法与样品制备 8.1 形态学 8.1.1 全株 刚采集的鲜活植株或已压制的植株标本直接肉眼观察,记录形态特征。 2GB/T28090—2025 观察茎、叶、花、果实局部微观形态时,采用放大镜或体视显微镜(6.2),辅以解剖刀、解剖针、镊子、 培养皿、直尺等工具。 观察果实时,宜选择发育成熟、籽粒饱满、外型完好的样品。 8.1.2 瘦果 混杂于原粮和种子等植物产品中的菊科植物果实,一般在孔径为5mm筛下物中获得。当样品量 少时,将全部样品放入白瓷盘中进行人工挑拣。 8.2 分子生物学 植物基因组DNA使用常见商品化植物基因组提取试剂盒进行提取。 制备核酸时,需加热裂解植物组织的,使用金属浴或水浴锅(6.3)。有需要检测核酸浓度时,采用核 酸浓度检测仪(6.4)。用以提取核酸的植物组织用量参照所采用商品化试剂盒使用说明。 ITS序列扩增时,使用PCR仪(6.5),PCR产物直接测序,或在测序前使用电泳仪(6.6)检测扩增 片段。 实时荧光PCR方法使用实时荧光PCR仪(6.7)检测荧光信号。 9 鉴定方法 9.1 形态特征 9.1.1 假银胶菊属 该属共约5种,原产北美洲。假银胶菊属及近似属形态特征按附录B。 9.1.2 假苍耳 9.1.2.1 植株和茎 一年生草本。茎直立,高30cm~150cm(~200cm),通常不分枝或上部分枝,分枝略直立或平展, 略有条纹,有时带红色或紫色,无毛或仅顶端被毛。 植株形态特征按附录C中C.1。 9.1.2.2 叶 茎生叶,对生,上部有时为互生,叶柄长1cm~7cm(~12+cm);叶片宽卵形或近圆形至倒披针 形,长3cm~16cm(~20+cm),宽1cm~15cm(~18+cm),边缘有时3~5浅裂,具不规则牙齿或 锯齿,先端尖、近尖或渐尖,基部楔形、截形或心形;叶腹面深绿色,背面灰绿色,两面被微糙毛或短糙伏 毛,常具腺点;上部叶片较小且较窄,披针形,卵状披针形或近菱形。 9.1.2.3 花序 小花密生在缩短的花序轴上,由两层总苞片包裹,形成小的头状花序,整体呈盘状且下垂,花序梗长 1mm~6mm(~12+mm);小型头状花序又排列成复合圆锥状花序,长达30cm,多分枝,略被毛。头 状花序形态特征按C.2。 9.1.2.4 花 雌花5枚,白色,花冠管状,长0.1mm~0.5mm,或无花冠;花柱分枝2。 功能性雄花5朵~10(-20+)朵,白色,花冠漏斗形,长1.5mm~2.5mm,无毛或有一些贴生的腺 3GB/T28090—2025 体;上部边缘5裂片长约0.3mm,三角形,直立或开展,雄蕊花丝分离,花柱长度与花冠相近,线形,柱头 略被绒毛,笔状。 每枚小花下有一托苞,线形或近铲形,长2.0mm~2.5mm,无毛。 花形态特征按C.2。 9.1.2.5 总苞 总苞陀螺形至半球形,长1.5mm~3.0mm,宽3.0mm~5.0+mm; 总苞片两层,边缘略呈锯齿状;外层总苞片5~6,长2.0mm~3.0mm,宽2.0mm~2.5mm,宽倒 卵形,草质,绿色,先端近渐尖,背面密被绢毛至刚毛,边缘有时有少量腺毛;内层总苞片5~6,长 2.0mm~2.5mm,宽1.0mm~1.5mm,宽倒卵形或椭圆形,膜质或近膜质,先端截平,无毛或近无毛, 包裹着外部的花。总苞形态特征按C.2。 9.1.2.6 瘦果 瘦果长1.9mm~3.0mm,宽0.9mm~1.9mm,倒卵形或倒三角形,顶端圆形,暗棕色、灰黑色或黑 褐色,近无毛,具细条纹;上半部双凸面,较厚,下半部向腹面稍弯曲;背腹面有明显或不明显的脊,无毛 或被疏散的刚毛,伴有少量的贴生腺体,顶部有花冠残余;无冠毛。 瘦果及与部分近似种形态特征按C.3和C.4。 9.2 分子生