ICS31-030 L90 中华人民共和国国家标准 GB/T11446.10—2013 代替GB/T11446.10—1997 电 子级水中细菌总数的 滤膜培养测试方法 Testmethodfortotalbacterialcountin electronicgradewaterbymembranefilters 2013-12-31发布 2014-08-15实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 GB/T11446预计结构如下: ———GB/T11446.1 电子级水; ———GB/T11446.2 (待定); ———GB/T11446.3 电子级水测试方法通则; ———GB/T11446.4 电子级水电阻率的测试方法; ———GB/T11446.5 电子级水中痕量金属的原子吸收分光光度测试方法; ———GB/T11446.6 电子级水中二氧化硅的分光光度测试方法; ———GB/T11446.7 电子级水中痕量阴离子的离子色谱测试方法; ———GB/T11446.8 电子级水中总有机碳的测试方法; ———GB/T11446.9 电子级水中微粒的仪器测试方法; ———GB/T11446.10 电子级水中细菌总数的滤膜培养测试方法。 本部分为GB/T11446的第10部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本部分代替GB/T11446.10—1997《电子级水中细菌总数的滤膜培养测试方法》。 本部分与GB/T11446.10—1997相比,主要有下列变化: ———“3术语和定义”中去掉了“无菌操作”定义,增加了“细菌总数”和“培养基”定义(见第3章); ———增加了“5干扰因素”(见第5章); ———删除了“10注意事项”(见1997年版的第10章)。 本部分由中华人民共和国工业和信息化部提出。 本部分由中国电子技术标准化研究院归口。 本部分起草单位:信息产业部专用材料质量监督检验中心、中国科学院半导体研究所、中国电子技 术标准化研究院、中国电子科技集团公司第四十六研究所。 本部分主要起草人:王奕、褚连青、何秀坤、段曙光、提刘旺、刘筠。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为: ———GB/T11446.10—1989、GB/T11446.10—1997。 ⅠGB/T11446.10—2013 电子级水中细菌总数的 滤膜培养测试方法 1 范围 GB/T11446的本部分规定了电子级水中细菌总数(活菌)的滤膜培养测试方法。 本部分适用于EW-Ⅰ~EW-Ⅳ级电子级水中细菌总数的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T11446.1—2013 电子级水 GB/T11446.3—2013 电子级水测试方法通则 3 术语和定义 GB/T11446.3—2013界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 菌落 bacteriumcolony 将单个菌体或孢子在固体培养基上培养一定时间后,使其生长繁殖形成肉眼可见的微生物团,即为 菌落。 3.2 细菌培养法 bacteriumculturemethod 将一定量水样经超滤膜过滤,再用适当的培养基将留在超滤膜表面的细菌培养以形成菌落,然后计 数以测量水中活细菌的数量。 3.3 细菌总数 totalbacterialcount 单位体积样品中存在的有生存能力的微生物总数,不包括厌氧有机体。 3.4 培养基 medium 是提供食用菌等生物生长发育所需的营养与特定环境条件的基质,一般都含有碳水化合物、含氮物 质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。 4 方法原理 水中的细菌经过0.45μm微孔膜过滤截留于滤膜上,将滤膜贴在衬底(吸透了TGY培养基的滤 纸)上,在适宜的条件下进行培养,细菌繁殖成肉眼可见的菌落。细菌体内存在的脱氢酶,与2,3,5-三 苯基氯化四氮唑(简称T.T.C)在胞内反应使菌体呈红色,反差增大,借此观测及计数。 1GB/T11446.10—2013 5 干扰因素 5.1 外来微生物的污染影响分析结果,细菌分析时应特别注意。 5.2 将载菌膜置于培养基上时,中间如有间隙或气泡影响分析结果的现象应严格避免。 6 试剂 6.1 空白用水:GB/T11446.1—2013规定的EW-Ⅰ级电子级水于高压灭菌器内在1.4×105Pa压力 下,灭菌15min。 6.2 TGY培养基:1L空白用水中加入10.0g胰蛋白胨(B.R)、6.0g牛肉膏(B.R)和2.0g葡萄糖 (A.R),加热溶解,冷却至室温,以1mol/L氢氧化钠调节pH至7.4~7.6,再加15.0g琼脂,加热溶解并 趁热过滤(以四层纱布、一层脱脂棉为介质),装于300mL三角瓶中,灭菌后备用。 注:在制备培养基的加热过程中,需补充所损失的水分。 6.3 1mol/L氢氧化钠溶液:20g氢氧化钠(A.R)溶于500mL空白用水并储于聚乙烯瓶中。 6.4 T.T.C溶液1.0g/L灭菌备用。 7 测量仪器和设备 7.1 无菌室(或无菌工作台):备有功率大于或等于2W/m2的紫外灯,置于工作台上距离工作台面1.5m处。 7.2 电热恒温培养箱:(20℃~60℃)±1℃。 7.3 高压蒸汽灭菌器。 7.4 恒温箱:0℃~300℃。 7.5 体视显微镜。 7.6 微孔有机滤膜:ϕ50mm,孔径0.45μm格栅膜。 7.7 过滤器:ϕ50mm杯式不锈钢过滤器。 7.8 各种玻璃器皿:广口瓶、三角瓶、培养皿、量筒等。 7.9 酒精灯、平头镊子、纱布、棉花、定性滤纸等。 7.10 抽滤系统:如图1所示。 说明: 1———滤杯; 2———滤膜; 3———载膜网; 4———抽滤瓶; 5———缓冲瓶; 6———真空泵。 图1 抽滤系统示意图 2GB/T11446.10—2013 8 操作步骤 8.1 检测前的准备 8.1.1 开启无菌室或无菌工作台1h~2h后,使之进入稳定工作状态。 8.1.2 器皿的灭菌:将培养皿、取样瓶等玻璃器皿,先用电子级水EW-Ⅰ级水洗净、烘干,用纸包严后置 于铝制专用容器中放入恒温箱(160℃~165℃)内,干热灭菌2h。 8.1.3 有机滤膜的灭菌:于电子级水中煮沸15min,弃去沸水后,再加新的水煮沸,反复进行3次即可。 或在紫外灯下照1h~2h灭菌。 注:灭菌时注意安全。 8.2 水样测定 取2.0mLT.T.C溶液滴于100mL温度为46℃±1℃的培养基中,在培养皿中混匀(约3mm~ 4mm厚),冷却备用。取摇匀后的适量水样:EW-Ⅰ~EW-Ⅲ级水取20mL~100mL,EW-Ⅳ级水取 1mL,经过过滤装置过滤,用50mL空白用水冲洗,抽干。用镊子将滤膜置于备好的培养基上,膜面朝 上,盖好皿盖;待凝固后,将平皿翻转置于培养箱中,于37℃±1℃下恒温培养48h后取出,在体视显 微镜下观察菌落并计数。按同样步骤进行空白试验。每个样品平行进行3次测定,取其平均值。 9 测量结果计算 水中的细菌总数按式(1)计算: A=n-n0 V……………………(1) 式中: A———每毫升水样中细菌总数,单位为个每毫升(个/mL); n———滤膜上的菌落数,单位为个; n0———空白试验的菌落数,单位为个; V———被测水样的体积,单位为毫升(mL)。 10 报告 测试报告应按GB/T11446.3—2013给定格式进行编制。GB/T11446.10—2013 3102—01. 64411T/BG 中华人民共和国 国家标准 电子级水中细菌总数的 滤膜培养测试方法 GB/T11446.10—2013 * 中国标准出版社出版发行 北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013) 北京市西城区三里河北街16号(100045) 网址:www.gb168.cn 服务热线:400-168-0010 010-68522006 2014年4月第一版 * 书号:155066·1-48658 版权专有 侵权必究