中华人民共和国国家标准 GB5009.83—2016 食品安全国家标准 食品中胡萝卜素的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.83—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB5413.35—2010《食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中β-胡萝卜素的测定》、 GB/T5009.83—2003《食品中胡萝卜素的测定》和NY/T82.15—1988《果汁测定方法 β-胡萝卜素的 测定》。 本标准与GB5413.35—2010相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中胡萝卜素的测定”; ———增加了普通食品的前处理方法; ———增加了需要区分α-胡萝卜素、β-胡萝卜素的色谱条件; ———修改了胡萝卜素的结果表达。GB5009.83—2016 1 食品安全国家标准 食品中胡萝卜素的测定 1 范围 本标准规定了食品中胡萝卜素的测定方法。 本标准色谱条件一适用于食品中α-胡萝卜素、β-胡萝卜素及总胡萝卜素的测定,色谱条件二适用于 食品中β-胡萝卜素的测定。 2 原理 试样经皂化使胡萝卜素释放为游离态,用石油醚萃取二氯甲烷定容后,采用反相色谱法分离,外标 法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 α-淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。 3.1.2 木瓜蛋白酶:酶活力≥5U/mg。 3.1.3 氢氧化钾(KOH)。 3.1.4 无水硫酸钠(Na2SO4)。 3.1.5 抗坏血酸(C6H8O6)。 3.1.6 石油醚:沸程30℃~60℃。 3.1.7 甲醇(CH4O):色谱纯。 3.1.8 乙腈(C2H3N):色谱纯。 3.1.9 三氯甲烷(CHCl3):色谱纯。 3.1.10 甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3]:色谱纯。 3.1.11 二氯甲烷(CH2Cl2):色谱纯。 3.1.12 无水乙醇(C2H6O):优级纯。 3.1.13 正己烷(C6H14):色谱纯。 3.1.14 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(C15H24O,BHT)。 3.2 试剂配制 氢氧化钾溶液:称固体氢氧化钾500g,加入500mL水溶解。临用前配制。 3.3 标准品 3.3.1 α-胡萝卜素(C40H56,CAS号:7488-99-5):纯度≥95%,或经国家认证并授予标准物质证书的标GB5009.83—2016 2 准物质。 3.3.2 β-胡萝卜素(C40H56,CAS号:7235-40-7):纯度≥95%,或经国家认证并授予标准物质证书的标 准物质。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 α-胡萝卜素标准储备液(500μg/mL):准确称取α-胡萝卜素标准品50mg(精确到0.1mg),加入 0.25gBHT,用二氯甲烷溶解,转移至100mL棕色容量瓶中定容至刻度。于-20℃以下避光储存,使 用期限不超过3个月。标准储备液用前需进行标定,具体操作见附录A。 3.4.2 α-胡萝卜素标准中间液(100μg/mL):由α-胡萝卜素标准储备液中准确移取10.0mL溶液于 50mL棕色容量瓶中,用二氯甲烷定容至刻度。 3.4.3 β-胡萝卜素标准储备液(500μg/mL):准确称取β-胡萝卜素标准品50mg(精确到0.1mg),加入 0.25gBHT,用二氯甲烷溶解,转移至100mL棕色容量瓶中定容至刻度。于-20℃以下避光储存,使 用期限不超过3个月。标准储备液用前需进行标定,具体操作见附录A。 注:β-胡萝卜素标准品主要为全反式(all-E)β-胡萝卜素,在储存过程中受到温度、氧化等因素的影响,会出现部分 全反式β-胡萝卜素异构化为顺式β-胡萝卜素的现象,如9-顺式(9Z)-β-胡萝卜素、13-顺式(13Z)-β-胡萝卜素、 15-顺式(15Z)-β-胡萝卜素等。如果采用色谱条件一进行β-胡萝卜素的测定,应按照附录B确认β-胡萝卜素异 构体保留时间,并计算全反式β-胡萝卜素标准溶液色谱纯度。 3.4.4 β-胡萝卜素标准中间液(100μg/mL):从β-胡萝卜素标准储备液中准确移取10.0mL溶液于 50mL棕色容量瓶中,用二氯甲烷定容至刻度。 3.4.5 α-胡萝卜素、β-胡萝卜素混合标准工作液(色谱条件一用):准确移取α-胡萝卜素标准中间液 0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、10.00mL溶液至6个100mL棕色容量瓶,分别加入 3.00mLβ-胡萝卜素中间液,用二氯甲烷定容至刻度,得到α-胡萝卜素浓度分别为0.5μg/mL、 1.0μg/mL、2.0μg/mL、3.0μg/mL、4.0μg/mL、10.00μg/mL,β-胡萝卜素浓度均为3.0μg/mL的系列 混合标准工作液。 3.4.6 β-胡萝卜素标准工作液(色谱条件二用):从β-胡萝卜素标准中间液中分别准确移取0.50mL、 1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、10.00mL溶液至6个100mL棕色容量瓶。用二氯甲烷定容至 刻度,得到浓度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、3.0μg/mL、4.0μg/mL、10μg/mL的系列标准 工作液。 4 仪器和设备 4.1 匀浆机。 4.2 高速粉碎机。 4.3 恒温振荡水浴箱:控温精度±1℃。 4.4 旋转蒸发器。 4.5 氮吹仪。 4.6 紫外-可见光分光光度计。 4.7 高效液相色谱仪(HPLC仪):带紫外检测器。 5 分析步骤 注:整个实验操作过程应注意避光。