中华人民共和国国家标准 GB5009.25—2016 食品安全国家标准 食品中杂色曲霉素的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.25—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.25—2003《植物性食品中杂色曲霉素的测定》和SN/T2483—2010《进出口 粮谷中柄曲霉素含量检测方法 液相色谱法》。 本标准与GB/T5009.25—2003相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中杂色曲霉素的测定”; ———增加了液相色谱-串联质谱法; ———增加了液相色谱法。GB5009.25—2016 1 食品安全国家标准 食品中杂色曲霉素的测定 1 范围 本标准规定了液相色谱-串联质谱法和高效液相色谱法测定杂色曲霉素的测定方法。 本标准适用于大米、玉米、小麦、黄豆及花生中杂色曲霉素的测定。 第一法 液相色谱-串联质谱法 2 原理 试样中的杂色曲霉素乙腈-水溶液提取,经涡旋、超声、离心,取上清液经稀释,通过固相萃取柱或免 疫亲和柱净化、浓缩、甲醇-水溶液定容、微孔滤膜过滤,液相色谱分离,电喷雾离子源离子化,多反应离 子监测检测,同位素内标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法使用的试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 乙腈(CH3CN):色谱纯。 3.1.2 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.1.3 氯化钠(NaCl)。 3.1.4 磷酸氢二钠(Na2HPO4)。 3.1.5 磷酸二氢钾(KH2PO4)。 3.1.6 盐酸。 3.1.7 氯化钾(KCl)。 3.2 试剂配制 3.2.1 乙腈-水溶液(80+20):取800mL乙腈,加200mL水,混匀。 3.2.2 乙腈-水溶液(40+60):取400mL乙腈,加600mL水,混匀。 3.2.3 甲醇-水溶液(40+60):取400mL甲醇,加600mL水,混匀。 3.2.4 甲醇-水溶液(70+30):取700mL甲醇,加300mL水,混匀。 3.2.5 磷酸盐缓冲溶液(以下简称PBS):称取8.0g氯化钠,1.2g磷酸氢二钠(或2.92g十二水磷酸氢 二钠),0.2g磷酸二氢钾,0.2g氯化钾,用900mL水溶解,用盐酸调节pH至7.4,用水定容 至1000mL。GB5009.25—2016 2 3.3 标准品 3.3.1 杂色曲霉素标准品(C18H12O6,CAS号:10048-13-2):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物 质证书的标准物质。 3.3.2 13C18-杂色曲霉素同位素内标:25μg/mL,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备溶液(100μg/mL):准确称取杂色曲霉素标准品1.00mg(准确至0.01mg),用甲醇溶 解并定容至10mL。溶液转移至试剂瓶中后,密封后-20℃下保存,保存期6个月。 3.4.2 标准工作液(1μg/mL):准确移取1.00mL的杂色曲霉素标准储备溶液至100mL容量瓶中,用 甲醇定容。-20℃下保存,保存期3个月。 3.4.3 同位素内标工作液(1.0μg/mL):准确移取杂色曲霉素同位素内标(25μg/mL)0.40mL至 10mL容量瓶中,用甲醇定容。-20℃下保存,保存期3个月。 3.4.4 标准系列工作溶液:准确移取标准工作液适量至5mL容量瓶中,加入50μL1.0μg/mL的同位 素内标工作液,用甲醇-水溶液(70+30)定容至刻度(含杂色曲霉素浓度为1ng/mL、2ng/mL、 5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL、40ng/mL、50ng/mL系列标准溶液),临用前配制。 3.5 材料 3.5.1 免疫亲和柱:柱容量≥600ng(柱容量验证方法参见B.2)。 3.5.2 固相萃取柱:N-乙烯吡咯烷酮和二乙烯基苯共聚物填料柱(200mg/6mL),或相当者。使用前 分别用5mL甲醇和5mL水活化。 3.5.3 微孔滤膜:0.22μm。 4 仪器和设备 4.1 液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源。 4.2 高速粉碎机 4.3 涡旋混合器。 4.4 超声波发生器。 4.5 天平:感量为0.01g和0.00001g。 4.6 离心机:转速≥6000r/min。 4.7 固相萃取装置(带真空泵)。 4.8 氮吹仪。 4.9 试验筛:1mm~2mm孔径。 5 分析步骤 5.1 试样制备 样品用高速粉碎机将其粉碎后过1mm~2mm孔径试验筛,混合均匀后取试样100g用于检测。 5.2 试样提取 称取5g均质试样(精确至0.01g)至50mL离心管中(花生和黄豆样品:称取2g均质试样),加入