中华人民共和国国家标准 GB5009.120—2016 食品安全国家标准 食品中丙酸钠、丙酸钙的测定 2016-08-31发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.120—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.120—2003《食品中丙酸钠、丙酸钙的测定》、GB/T23382—2009《食品中丙 酸钠、丙酸钙的测定 高效液相色谱法》。 本标准与GB/T5009.120—2003相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中丙酸钠、丙酸钙的测定”; ———增加了液相色谱法; ———气相色谱柱由填充柱改为毛细管柱,色谱条件也相应变动。GB5009.120—2016 1 食品安全国家标准 食品中丙酸钠、丙酸钙的测定 1 范围 本标准规定了豆类制品、生湿面制品、面包、糕点、醋、酱油中丙酸钠、丙酸钙的测定方法。 本标准适用于豆类制品、生湿面制品、面包、糕点、醋、酱油中丙酸钠、丙酸钙的测定。 第一法 液相色谱法 2 原理 试样中的丙酸盐通过酸化转化为丙酸,经超声波水浴提取或水蒸汽蒸馏,收集后调pH,经高效液 相色谱测定,外标法定量其中丙酸的含量。样品中的丙酸钠和丙酸钙以丙酸计,需要时可根据相应参数 分别计算丙酸钠和丙酸钙的含量。 3 试剂与材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 磷酸(H3PO4)。 3.1.2 磷酸氢二铵[(NH4)2HPO4]。 3.1.3 硅油。 3.2 试剂配制 3.2.1 磷酸溶液(1mol/L):在50mL水中加入53.5mL磷酸,混匀后,加水定容至1000mL。 3.2.2 磷酸氢二铵溶液(1.5g/L):称取磷酸氢二铵1.5g,加水溶解定容至1000mL。 3.3 标准品 3.3.1 丙酸标准品(C3H6O2),CAS:79-09-4,纯度≥97.0%。 3.3.2 丙酸标准贮备液(10mg/mL):精确称取250.0mg丙酸标准品于25mL容量瓶中,加水至刻度, 4℃冰箱中保存,有效期为6个月。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱(HPLC)仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 4.2 天平:感量0.0001g和0.01g。 4.3 超声波水浴。GB5009.120—2016 2 4.4 离心机:转速不低于4000r/min。 4.5 组织捣碎机。 4.6 具塞塑料离心管:50mL。 4.7 水蒸汽蒸馏装置:500mL。 4.8 鼓风干燥箱。 4.9 pH计。 5 分析步骤 5.1 样品制备 固体样品经组织捣碎机捣碎混匀后备用(面包样品需运用鼓风干燥箱,37℃下干燥2h~3h进行 风干,置于组织捣碎机中磨碎);液体样品摇匀后备用。 5.2 试样处理 5.2.1 蒸馏法(适用于豆类制品、生湿面制品、醋、酱油等样品):样品均质后,准确称取25g(精确至 0.01g),置于500mL蒸馏瓶中,加入100mL水,再用50mL水冲洗容器,转移到蒸馏瓶中,加1mol/L 磷酸溶液20mL,2滴~3滴硅油,进行水蒸气蒸馏,将250mL容量瓶置于冰浴中作为吸收液装置,待 蒸馏至约240mL时取出,在室温下放置30min,用1mol/L磷酸溶液调pH为3左右,加水定容至刻 度,摇匀,经0.45μm微孔滤膜过滤后,待液相色谱测定。 5.2.2 直接浸提法(适用于面包、糕点):准确称取5g(精确至0.01g)试样至100mL烧杯中,加水 20mL,加入1mol/L磷酸溶液0.5mL,混匀,经超声浸提10min后,用1mol/L磷酸溶液调pH为3 左右,转移试样至50mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀。将试样全部转移至50mL具塞塑料离心管 中,以不低于4000r/min离心10min,取上清液,经0.45μm微孔滤膜过滤后,待液相色谱测定。 6 仪器参考条件 6.1 色谱柱:C18柱,4.6mm×250mm,5μm或等效色谱柱。 6.2 流动相:1.5g/L磷酸氢二铵溶液,用1mol/L磷酸溶液调pH为2.7~3.5(使用时配制);经 0.45μm微孔滤膜过滤。 6.3 流速:1.0mL/min。 6.4 柱温:25℃。 6.5 进样量:20μL。 6.6 波长:214nm。 6.7 色谱柱清洗参考条件:实验结束后,用10%甲醇清洗1h,再用100%甲醇清洗1h。 7 标准曲线绘制 7.1 蒸馏法:准确吸取标准储备液0.5mL、1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL、10.0mL、12.5mL置于 500mL蒸馏瓶中,其他操作同5.2.1样品前处理,其丙酸标准溶液的最终浓度分别为0.02mg/mL、 0.04mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL,经0.45μm微孔滤膜过 滤,浓度由低到高进样,以浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。 7.2 直接浸提法:准确吸取5.0mL标准储备液于50mL容量瓶中,用水稀释至刻度,配制成浓度为