ICS 65.020 B 16 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 22101.1—2008 棉花抗病虫性评价技术规范 第1部分：棉铃虫 Technical specification for evaluating resistance of cotton to disease and insect pests-Part 1:Cotton bollworm 2008-06-18发布 2008-12-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 22101.1—2008 前言 GB/T22101《棉花抗病虫性评价技术规范》分为以下五部分： 第1部分：棉铃虫； 第2部分：棉蚜； 第3部分：红铃虫； 一第4部分：枯萎病； —第5部分：黄菱病。 本部分是GB/T22101的第1部分。 本部分的附录A、附录B为资料性附录。 本部分由中华人民共和国农业部提出并归口。 本部分主要起草人：王武刚、张永军、吴孔明、郭荣， 1 GB/T 22101.1—2008 棉花抗病虫性评价技术规范 第1部分：棉铃虫 1范围 GB/T22101的本部分规定了转基因棉花、杂交棉花和常规棉花抗棉铃虫性鉴定方法和抗虫性评 价标准。 本部分适用于棉花育种、棉花生产和植保单位对转基因棉花、杂交棉花和常规棉花抗棉铃虫性鉴定 和抗虫性评价。 2术语和定义 下列术语和定义适用于GB/T22101的本部分。 2. 1 幼虫死亡率 larval mortality 棉铃虫幼虫取食棉花后死亡幼虫数占供试幼虫总数的百分率。 2. 2 蕾铃受害率damagedratesofsquareandboll 棉铃虫幼虫危害棉花蕾铃数占棉花植株蕾铃总数的百分率。 2.3 初孵幼虫 neonate 刚从卵中孵化出的棉铃虫幼虫。 2. 4 双重皿petri dish 大小一致的培养皿相对扣在一起。 2.5 标准感虫棉花品种 cottoncultivalfor susceptibility to cottonbollworm 棉铃虫幼虫取食供试棉叶状况达到4级的非转基因相同棉种的棉花品种。 3供试棉铃虫的饲养 3.1饲养棉铃虫的基本设施和条件 具有调温和光照设备的养虫室，温度保持在25℃～28℃之间和保证≥14h光照时间。培养皿（直 径9cm）、养虫管（直径2.5cm，高8cm）、养虫架、饲喂幼虫的人工饲料（人工饲料配制参见附录A和附 录B）。饲养成虫用铁纱笼、纱布、剪子、镊子、毛笔等养虫用具和存放饲料的冰箱及操作台。 3.2棉铃虫成虫饲养 将羽化后的雌、雄成虫混合放入铁纱笼内，饲喂以5%蔗糖水或蜂蜜水，由其自由交配，在铁纱笼上 覆盖纱布，使雌蛾产卵于纱布上。 3.3卵的处理 将同日产卵的纱布放在同一培养皿内，然后放在养虫室的养虫架上，等待卵的孵化。 1 GB/T22101.1—2008 3.4幼虫饲养 孵化后幼虫接在人工饲料上，刚孵化幼虫用培养皿集体饲养，2龄～3龄后分管单虫饲养。 3.5供鉴定用棉铃虫 室内鉴定用孵化后在人工饲料上饲养2d的1龄幼虫。网室鉴定用棉铃虫成虫和卵或初孵 幼虫。 3.6对照材料 3.6.1转基因棉花鉴定以对应的非转基因棉花受体亲本为对照。 3.6.2转基因杂交棉花鉴定以对应的非转基因亲本为对照 3.6.3常规杂交棉花鉴定以标准感虫棉花为对照。 3.6.4常规棉花鉴定以标准感虫棉花为对照 4转基因棉花植株抗棉铃虫性室内鉴定 4.1供试棉叶 供试转基因棉株的叶片为从植株顶部展开的第3片棉叶。 4.2供试棉铃虫 1龄幼虫，即从卵孵化后在人工饲料上饲养2d的幼虫 4.3鉴定方法 4.3.1双重血集体饲虫 将棉叶放在双重血内（天叶放1片，小叶放2片），每血接1龄幼虫8头，重复3次，皿底放置1张湿 正幼虫逃逸和保持血内湿度。放入25℃～28℃C的养虫室或培养箱中饲养。 4.3.2分管单头饲养 中饲养。 521C 4.4鉴定结果调查 调查2次，第1次调查在接虫后第3天，第2次调查在第6天，调查记录内容如下。 4.4.1幼虫死亡状况 统计幼虫死亡数和活虫数，计算幼虫死亡率。需继续观察时将死亡虫挑出累计。 4.4.2幼虫取食状况 以自测分4个等级：叶片未取食或取食很少（叶片被食的小孔或痕迹很少）记为“十”，即为1级；叶 片上有一些被食孔但不多，记为“十十”，即为2级；叶片上有许多被食孔但未出现大片叶片被食缺口，记 为“十十十”，即为3级；叶片大部被食或所剩无几为大量取食，记为“十十十十”，即为4级。 4.4.3幼虫生长状况 以目测法观察幼虫生长情况，幼虫没有生长发育记为“一”，生长发育比正常个体小记为“十/一”，正 常生长记为“十”。另外，可用分析天平（精确度1mg）称幼虫体重并计算各处理平均单头幼虫体重，以 幼虫体重比较幼虫生长情况。 4.5鉴定结果计算与分析 每次鉴定均须设置非转基因棉株为对照。若对照组幼虫死亡率在5%以上，处理组的幼虫死亡率 需要进行校正。若对照组死亡率超过20%，则需要分析原因，重新进行试验。幼虫校正死亡率m，数值 以%表示，按式（1)计算： m=m×100 m= .(1) 1-me 2 GB/T 22101.1—2008 式中： mt 处理组幼虫死亡率； me—对照组幼虫死亡率。 计算结果精确到小数点后一位 以幼虫校正死亡率、取食量（棉花被害程度）和幼虫生长发育情况综合评价转基因棉株对棉铃虫有 无抗虫性和抗虫性程度。 5棉花品种抗棉铃虫性田间网室鉴定 5.1鉴定方法 采用罩笼接虫法，通过对棉株受害调查，以蕾铃受害率与对照品种相比较评价鉴定材料的抗虫性 级别。 5.2田间罩笼设计 罩笼高1.8m，面积在50m²以上，每品种25株，不设重复，以HG-BR-8为对照品种，罩笼四周设 有保护行。罩笼内棉花栽培方式同大田，苗期可以防治棉蚜，防治棉蚜药剂不可影响后期棉铃虫的存 活，后期不防治棉铃虫。 5.3供试虫源和接虫量 供试昆虫为采自田间并经室内饲养的棉铃虫成虫，在养虫笼内任其自由交配，并喂以5%的蜂蜜 水。3d后选择活动力强的成虫释放于种植鉴定材料的罩笼内。接虫量为每10m²4对（雌雄比1：1） 接虫后分别在第3天、第7天分两次调查卵量，第7天如果每100株累计卵量不足500粒，要进行补接 卵，每株补足5粒卵，补接的卵粒用稀浆糊粘接在棉株顶部。接卵时期与棉田2代棉铃虫的发生期一 致，棉花生育期为现蕾或开花结铃期。 5.4调查方法 接虫后第7天至第10天和第15天至第20天分两次调查各材料的被害蕾铃数、健蕾铃数和顶尖受 害株数（以生长点受害为准），分别计算蕾铃受害百分率和顶尖受害率，并计算两次调查的均值。 5.5调查结果计算 5.5.1蕾铃（顶尖）受害率d，数值以%表示，按式（2）计算： ..(2) nt 式中： nd——调查棉株蕾铃(顶尖)被害数； n.——调查棉株蕾铃(顶尖)总数。 计算结果精确到小数点后两位 5.5.2蕾铃（顶尖）受害减退率X，数值以%表示，按式（3）计算： X= )X100 :(3) 式中： d对照品种蕾铃（顶尖)受害率； d.一一鉴定材料蕾铃（顶尖）受害率。 计算结果精确到小数点后两位。 6抗虫性评价和分级 根据田间网室和室内抗虫性鉴定结果进行鉴定材料抗虫性综合评定，并按照表1评价棉花材料抗 棉铃虫的级别。 3