ICS 07.080 G 85 GD 中华人民共和国国家标准 GB/T30986—2014 生化制品中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖 含量的测定 液相色谱示差折光法 Method for the determination of glucose, sucrose,maltose contents in biochemical products-Liquid chromatography with refractiveindex detector 2014-07-24发布 2015-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T30986—2014 目 次 前言 1 范围 规范性引用文件 2 3 方法提要 试剂和溶液 4 仪器与设备 5 6试样的制备 分析步骤 7 结果计算 8 附录A（资料性附录） 葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准物质色谱图 GB/T30986—2014 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由成都大学提出。 本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387)归口。 本标准起草单位：成都大学中药化学实验室、中国测试技术研究院。 本标准主要起草人：苟小军、谭和平、颜军、孙登峰、谢贞建 GB/T30986—2014 生化制品中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖 含量的测定液相色谱示差折光法 1范围 本标准规定了用液相色谱示差折光法测定生化制品中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的方法。 本标准适用于含糖胃蛋白酶、静脉注射用人免疫球蛋白、狂犬病人免疫球蛋白等生化制品中葡萄 糖、蔗糖、麦芽糖的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样经水溶解，加热除蛋白，离心，取上清液用体积分数40%乙睛水溶液定容至一定体积，经 0.45μm滤膜过滤，用液相色谱示差折光检测器测定，保留时间定性、外标法定量。 4试剂和溶液 4.11 除非另有规定，使用的试剂为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 体积分数40%乙睛水溶液：取40mL色谱纯乙睛与60mL水混合。 4.4 葡萄糖（CAS号：50-99-7）标准品：纯度99%。 4.5 燕糖（CAS号：57-50-1）标准品：纯度≥99%。 4.6 麦芽糖（CAS号：69-79-4）标准品：纯度≥99%。 4.7* 糖标准储备液：分别称取5g（准确至0.0001g）经减压干燥至恒重的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准品， 加适量体积分数40%乙睛水溶液溶解，各转移至100mL容量瓶中，用体积分数40%乙睛水溶液定容 至刻度，摇匀。糖标准储备液质量浓度为50.0mg/mL。 4.8糖标准溶液：分别准确吸取糖标准储备溶液0.5mL，1.0mL，2.5mL，5.0mL，7.5mL，10.0mL至 50mL容量瓶中，用体积分数40%乙睛水溶液稀释至刻度。制成质量浓度分别为0.5mg/mL，1.0mg/mL， 2.5mg/mL，5.0mg/mL，7.5mg/mL，10.0mg/mL的葡萄糖，蔗糖及麦芽糖标准溶液。 5仪器与设备 5.1 高效液相色谱仪：配示差折光检测器 5.2分析天平，感量0.1mg。 SAC 5.3高速离心机，10000r/min。 1 GB/T30986—2014 5.4 有机相微孔过滤器，0.45μm。 5.5 常用玻璃量器，A级。 6试样的制备 6.1 蛋白热变性去除 准确称取0.5g（精确至0.0001g）研磨成粉末状的固体试样或准确移取1mL（精确至0.01mL)液 体试样于20mL试管中，用40%乙睛水溶液（4.3）10mL溶解，于沸水浴中加热10min。冷却后以 10000r/min离心10min。 6.2试液制备 将上清液（6.1)转移至50mL容量瓶中，用40%乙睛水溶液（4.3)定容至刻度，摇匀，待测 对于不含蛋白的试样，直接称取0.5g（精确至0.0001g）研磨成粉末状固体试样或量取1mL精确 至0.01mL）液体试样置于50mL容量瓶中，用40%乙睛水溶液（4.3）定容至刻度，待测。 7分析步骤 7.1 液相色谱参考条件 色谱柱：糖分析专用色谱柱，或氨基柱。 流动相：乙腈+水（78+22）。 流量：1.0mL/min。 柱温：30℃。 检测器池温度：35℃。 进样量：20μL 7.2绘制标准曲线 分别吸取葡萄糖、蔗糖、麦芽糖系列标准溶液，用0.45um滤膜过滤，注入高效液相色谱仪，进样 20μL，进行测定，以各标准溶液浓度峰面积为纵坐标，以标准溶液标准浓度值为横坐标，绘制各物质的 标准曲线。用最小二乘法计算标准曲线公式，标准曲线的相关系数应不小于0.999。葡萄糖、蔗糖、麦芽 糖标准物质色谱图参见附录A中图A.1。 7.3样品分析 吸取试料溶液（6.2），用0.45um滤膜过滤，注入高效液相色谱仪，在与7.2相同条件下进行测定。 根据色谱峰面积，利用线性回归方程计算试料溶液中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的含量。每个样品测定3次， 以平均值作为测量结果。 AG 7.4: 空白试验 除不加入样品外，均按上述步骤进行。 8结果计算 固体试样中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的含量（质量分数）按式（1）和式（2）计算： 2