ICS 65.020 CCS B 47 云 53 南 省 地 方 标 准 DB53/T 1129—2022 半闭弯尾姬蜂室内饲养技术规程 2022-08-12 发布 2022-11-12 实施 云南省市场监督管理局  发 布 DB53/T 1129—2022 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由云南省农业科学院提出。 本文件由云南省农业标准化技术委员会(YNTC07)归口。 本文件起草单位：云南省农业科学院农业环境资源研究所。 本文件主要起草人：张红梅、陈福寿、王燕、谌爱东，李向永、尹艳琼、赵雪晴、刘莹，徐兴才。 I DB53/T 1129—2022 半闭弯尾姬蜂室内饲养技术规程 1 范围 本文件规定了采用小菜蛾幼虫室内饲养半闭弯尾姬蜂的术语和定义、试剂和材料、设备与设施、饲 养前准备、饲养、质量评价等内容。 本文件适用于以小菜蛾幼虫为寄主繁殖半闭弯尾姬蜂的室内饲养。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 半闭弯尾姬蜂 Diadegma semiclausum Hellen 属膜翅目(Hymenoptera)，姬蜂总科(Ichneumonoidea)姬蜂科(Ichneumonidae)内寄生昆虫，是小菜蛾 幼虫期一种重要的内寄生蜂。 3.2 接蜂 The process of wasps to host larvae environment 将半闭弯尾姬蜂引入到小菜蛾幼虫的过程。 3.3 接蜂比 Proportion of female wasps of DBM larvae 半闭弯尾姬蜂雌蜂与寄主昆虫小菜蛾幼虫的数量比例。 4 试剂、材料与设备与设施 4.1 试剂、材料 福尔马林消毒液、寄主植物种子（甘蓝）、吸虫管、蜂蜜水、产卵锡箔。 4.2 设备 冷藏箱（可控温 2 ℃～6 ℃）、加湿器、加热器、光照培养箱、温湿度记录仪、计数器、温度计、 高压灭菌锅、紫外灯、养虫笼、羽化透气盒等。 4.3 设施 4.3.1 小菜蛾饲养室 小菜蛾饲养室应满足以下条件： 1 DB53/T 1129—2022 ——温度 25 ℃±2 ℃，湿度 60%～75%，光周期 L：D=14：10； ——内置养虫笼、养虫架； ——养虫笼，以长 25 cm、宽 30 cm、高 25 cm 为宜，纱网 80 目以上； ——养虫架，以长 125 cm，宽 60 cm、高 160 cm 为宜的角钢架，用阳光板分成 3 层，每层高 50cm， 每层放置 10 片～12 片甘蓝或十字花科植株。 4.3.2 半闭弯尾姬蜂饲养室 半闭弯尾姬蜂饲养室应符合以下要求： ——温度 22 ℃±2 ℃，湿度 60%～75%,光周期 L:D=14:10； ——饲养室内置养虫笼、养虫架； ——养虫笼，以长 125 cm、宽 60 cm、高 50 cm 为宜，纱网 80 目以上，四角固定在养虫架的四角； ——养虫架同 4.3.1。 5 饲养前准备 5.1 寄主植物准备 5.1.1 寄主植物 甘蓝类或十字花科蔬菜。 5.1.2 选苗 选择5 叶龄～6 叶龄苗，叶片肥厚，根系发达，无病虫害。 5.1.3 水肥管理 5.1.3.1 5.1.3.2 5.1.4 每盆栽 1 株苗，浇足水分，保持土壤湿润。 追肥应遵循少量多次的原则，宜浇肥水 2 次～3 次。 病虫害管理 及时清除带病虫残叶或选择高效低毒的杀虫剂进行防治，使用的方法参照药剂说明书。在植株使用 前15 d不使用任何杀虫剂。 5.1.5 供饲植株准备 宜盆栽，待甘蓝等长至10片～12片叶时作为供饲植株。 5.2 小菜蛾和半闭弯尾姬蜂准备 5.2.1 采集 田间采集小菜蛾幼虫、蛹及被半闭弯尾姬蜂寄生的小菜蛾幼虫和蛹。 5.2.2 2 提纯复壮 DB53/T 1129—2022 5.2.2.1 将采集回来的小菜蛾幼虫接到甘蓝植株上，置于养虫笼中，待发育至蛹中后期可识别小菜蛾 蛹还是半闭弯尾姬蜂蛹时，分拣出小菜蛾蛹和半闭弯尾姬蜂蛹。 5.2.2.2 小菜蛾蛹羽化，成虫产卵，经过 2 代～3 代，续代繁殖提纯复壮，筛选出健康的小菜蛾。 5.2.2.3 半闭弯尾姬蜂蛹羽化后让成虫寄生小菜蛾幼虫，经过 2 代～3 代，续代繁殖提纯复壮，筛选 出健康的半闭弯尾姬蜂。 5.2.3 产卵锡箔准备 5.2.3.1 5.2.3.2 5.2.3.3 5.3 将新鲜甘蓝菜叶洗净，兑水制成甘蓝汁液匀浆，甘蓝汁液浓度 10%～20%。 在高压灭菌锅灭菌 30 min，压力 0.1 MPa，冷却后用过滤的甘蓝汁液浸泡产卵锡箔 2 h 以上。 取出锡箔晾干集中保存在 0 ℃以下冰箱备用。 寄主昆虫饲养 5.3.1 产卵 5.3.1.1 根据小菜蛾幼虫扩繁计划，定量放入小菜蛾蛹，以 100 头小菜蛾蛹为例，可扩繁获得 2 000 头～3 000 头小菜蛾幼虫。 5.3.1.2 当小菜蛾的蛹羽化为成虫后，提供 15%的蜂蜜水作为成虫的营养补充液。 5.3.1.3 在养虫笼内悬挂 4 条～5 条准备好的并带有皱褶的产卵锡箔诱集小菜蛾成虫产卵，养虫笼用 黑布遮盖，每天更换养虫笼内产卵锡箔和蜂蜜水。 5.3.2 孵化 5.3.2.1 取带有小菜蛾卵的锡箔放入福尔马林消毒液中浸泡 5 min，然后用蒸馏水漂洗 3 次，晾干后 在冷箱内保存备用。 5.3.2.2 在备用的甘蓝等植株叶片上接卵，每株接小菜蛾卵粒 400 粒～500 粒进行发育孵化。 5.3.3 饲养 将接卵甘蓝植株放在小菜蛾饲养室饲养，小菜蛾幼虫发育到2 龄～3 龄时，1/2幼虫进行小菜蛾续代 繁殖，1/2用于半闭弯尾姬蜂雌蜂接蜂。 5.3.4 蛹的收集 每天观察室内小菜蛾幼虫的发育情况，待90%以上幼虫化蛹后开时收集小菜蛾蛹，直至全部化蛹完 毕。收集的蛹一部分用于新一轮的繁殖，另一部分放入冷藏箱内贮存。 5.3.5 寄主昆虫的贮存 贮存温度4 ℃±1 ℃，贮存不超过10 d。不与有毒、有害物品混合贮存。 6 半闭弯尾姬蜂的饲养 6.1 采集 从田间采集小菜蛾幼虫、蛹，饲养发育到蛹中后期识别半闭弯尾姬蜂蛹，或采集半闭弯尾姬蜂蛹。 6.2 提纯复壮 3 DB53/T 1129—2022 见5.2.2。 6.3 羽化 识别为半闭弯尾姬蜂的蛹放入羽化盒中羽化成蜂，羽化盒内盖上涂抹适量蜂蜜。 6.4 寄生 6.4.1 6.4.2 6.4.3 6.4.4 6.4.5 6.4.6 6.5 在半闭弯尾姬蜂饲养室，将的带有 2 龄～3 龄小菜蛾幼虫的盆栽甘蓝移至养虫笼内。 将羽化的半闭弯尾姬蜂放入养虫笼内，接蜂比宜为 1:40～1:50，半闭弯尾姬蜂雌雄数量比为 1:1。 接蜂 3 d 后，取出带有被寄生过的小菜蛾幼虫的甘蓝植株放在养虫架发育生长。 重复 6.4.2 至 6.4.3，接蜂 2 批～3 批次。 在养虫笼放置浓度为 15%蜂蜜水喂养半闭弯尾姬蜂。 根据取食情况适时替换甘蓝寄主植物。 蛹的收集 从养虫笼内取出被寄生的小菜蛾幼虫，发育 8 d～10 d 可根据外观形态明显区分小菜蛾和半闭弯尾 姬蜂蛹时，把小菜蛾蛹和半闭弯尾姬蜂蛹分拣收集到不同的培养皿中，小菜蛾和半闭弯尾姬蜂蛹的外观 形态见附录 A。 6.6 蛹贮存 半闭弯尾姬蜂蛹贮存，温度4℃±1℃，贮存不超过10 d，不与有毒、有害物品混合贮存，并适时检 查蛹。 7 羽化率检验 7.1 抽样 从每批次半闭弯尾姬蜂蛹中随机抽取5个点的样品，每个点抽取不低于100头半闭弯尾姬蜂蛹，记录 接蜂日期、抽样日期。 7.2 羽化率计算 抽样的半闭弯尾姬蜂蛹羽化结束后1 d～2 d，清点半闭弯尾姬蜂蛹的羽化头数，按式（1）计算羽 化率。 ER = N1 N2 × 100 式中： ER—羽化率，单位为百分率（%）； N1 —羽化的半闭弯尾姬蜂蛹数量，单位为头； N2 —抽检半闭弯尾姬蜂蛹的总数量，单位为头。 8 寄生率检验 8.1 4 抽样 ··················································· (1) DB53/T 1129—2022 各批次均应抽取样本，以株为单位，随机抽取5个点的样品，每个点抽取不得低于5 株，并记录批 次、接蜂日期、抽样日期。 8.2 寄生率计算 幼虫被寄生发育为半闭弯尾姬蜂蛹，未被寄生发育为小菜蛾蛹，以株为单位，统计半闭弯尾姬蜂蛹 头数和未被寄生小菜蛾蛹数量，按式（2）计算寄生率。 PR＝M1 /（M1 ＋M2 ） × 100············································ (1) 式中： PR—寄生率，单位为百分率（%）； M1 —半闭弯尾姬蜂蛹数量，单位为头； M2 —小菜蛾蛹的数量，单位为头。 9 质量评价 按表1评价半闭弯尾姬蜂的寄生率与羽化率质量。 表1 指 标 半闭弯尾姬蜂的寄生率与羽化率质量评价 合 格 不合格 寄生率/% ≥60 <60 羽化率/% ≥70 <70 5 DB53/T 1129—2022 附 录 A （资料性） 小菜蛾蛹半闭弯尾姬蜂蛹观形态 A.1 小菜蛾蛹 蛹长0.5 cm～0.8 cm，颜色变化较大，刚化蛹时为深绿色，后变为绿色至灰褐色，蛹被稀疏网状的 茧包裹，呈灰白色，两端通透。蛹将羽化时复眼变黑，翅芽上三度曲波线明显可见，触角、足、胸部颜 色变深，整蛹呈褐色或黑色。有些蛹背面两侧各有1 条黑褐色条纹，有些无此条纹。无臀棘，肛门附近 有钩刺3对，腹末有钩状臀刺4对。成稀疏的网状，灰白色。见图1。 图 A.1 小菜蛾蛹外观形态 A.2 半闭弯尾姬蜂蛹 半闭弯尾姬蜂蛹为圆柱形，体长0.4 cm～0.6 cm，结茧后为灰白色，颜色渐变深，羽化前呈褐色； 茧之中间具一黑色环带，尾端为黑色。进入前蛹期后，虫体缩短成囊状，呈淡黄色，见图2。 图 A.2 半闭弯尾姬蜂蛹外观形态 6 DB53/T 1129－2022