ICS 65.100.01 CCS B 17 团 体 标 准 T / N A I A 0 2 6 —2 0 2 1T/ NAIA 0118-2022 枸杞中呋虫胺及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱联用法 Determination of dinotefuran and its metabolites residues in wolfberry Liquid chromatography-tandem mass spectrometry method 2022-04-27发布 2022-05-01实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 发布TB 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏农产品质量标准与检测技术研究所，宁夏农林科学院农业生物技 术研究中心，宁夏回族自治区食品检测研究院，宁夏回族自治区药品检验研究院。 本文件主要起草人 ：赵子丹、王晓静、刘霞、牛艳、王晓菁、石磊、吴燕、杨静、苟春 林、张艳、开建荣、张锋锋、吴明、马桂娟、马玲。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 枸杞中呋虫胺及其代谢物残留量的测定 液相色谱 -质谱联用法 1 范围 本文件规定了枸杞中呋虫胺及其代谢物残留量的液相色谱 -质谱 /质谱测定方法。 本文件适用于枸杞中呋虫胺及其代谢物的液相色谱 -质谱 /质谱法测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期 的引用文件， 仅该日期对应的版本适用本文件 ；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所 有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 呋虫胺及其代谢物 spinosyn and its metabolites 呋虫胺是一种新型烟碱类杀虫剂，它的代谢物主要有两种，分别是 1-甲基 -3-[(3-四氢呋 喃)甲基 ]二氢胍盐（ DN）和 1-甲基 -3-[(3-四氢呋喃 )甲基 ]脲（ UF）。 4 原理 试样用酸化甲醇溶液提取，提取液经十八烷基键合硅胶吸附剂（ C18）和N-丙基乙二胺 固相萃取（ PSA）分散净化，液相色谱 -质谱联用仪检测 ，外标法定量。 5 试剂与材料 除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水符合 GB/T 6682中规定的一级水。 5.1 甲醇（ CH 4O）：色谱纯。乙腈（ CH 3CN）：色谱纯。 5.2 甲酸（ CH 2O2）：色谱纯。 5.3 乙酸（ C2H4O2）：色谱纯。 5.4 乙酸 -甲醇溶液（ 2+98，体积比）： 量取 2 mL乙酸加入 98 mL甲醇中，混匀。 5.5 0.1%甲酸溶液（体积分数）。 5.6 N-丙基 -乙二胺吸附剂（ PSA）： 40 µm～63 µm。 5.7 十八烷基键合硅胶吸附剂（ C18）： 40 µm～63 µm。 5.8 农药标准品：呋虫胺标准品（ CAS号165252-70-0 ，纯度 99.4%）、呋虫胺代谢物 UF 全国团体标准信息平台 标准品（ CAS号457614-34-5 ，纯度 93.2%）、呋虫胺代谢物 DN标准品（ CAS号 457614-32-3 ，纯度 98.5%）。 5.9 标准溶液配制 5.9.1 呋虫胺及其代谢物标准储备溶液：分别准确称取适量的呋虫胺及其代谢物标准品（精 确至 0.1 mg），用乙腈溶解， 分别配制成 1000 mg/L的标准储备溶液， -18 ℃下保存。 5.9.2 呋虫胺及其代谢物混合标准中间溶液：根据需要分别取适量呋虫胺及其代谢物的标准 储备液， 用乙腈稀释成 10 mg/L标准中间溶液， -18 ℃下保存。 6 仪器与设备 6.1 高效液相色谱 -质谱 /质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）。 6.2 分析天平： 感量 0.01 g和0.0001 g。 6.3 组织捣碎机。 6.4 高速万能粉碎机： 10000 r/min。 6.5 高速分散机。 6.6 离心机： 4000 r/min。 6.7 涡旋混合器。 6.8 离心管： 50 mL，塑料。 6.9 滤膜： 0.22 μm，有机相。 7 分析步骤 7.1 试样的制备 鲜、干枸杞样品于 -18℃冷冻冰箱中保存。试验时将鲜、干枸杞样品取出，鲜样用高速 组织捣碎机打浆 ，干样用高速万能粉碎机 （可加少量的液氮 ）粉碎，分别置于样品袋中 ，-18 ℃冷冻备用。 7.2 样品提取与净化 7.2.1 鲜果 称取试样 10.00 g（精确至 0.01 g）于50 mL离心管， 加入 20.0 mL乙酸 -甲醇溶液 (5.4)， 经高速分散机 匀浆 2 min后， 4000 r/min离心 5 min，吸取 2.00 mL上清液于 15 mL离心管 中（提前称好 100 mg PSA和100 mg C18）涡旋净化后过 0.22 μm滤膜，待测定。 7.2.2 干果 称取试样 5.00 g（精确至 0.01 g）于50 mL离心管， 加水 10.0 mL复溶 30 min，加入 20.0 mL乙酸 -甲醇溶液 (5.4)，经高速分散机 匀浆 2 min后，4000 r/min离心 5 min，吸取 2.00 mL上清液于 15 mL离心管中（ 提前称好 100mg PSA和100mg C18）涡旋净化后过 0.22 μm 滤膜，待测定。 7.3 测定 全国团体标准信息平台 7.3.1 液相色谱参考条件 a）色谱柱： C18柱， 2.1 mm（内径） ×100 mm，粒径 3.5 μm，或相当者； b）流动相： A相为甲酸 -水溶液（ 5.5）， B相为甲醇溶液 ，流动相 梯度条件见表 1； c）流速： 0.3 mL/min； d）柱温： 40 ℃； e）进样量： 2 μL。 表1 流动相及其梯度条件（ VA+VB） 时间 min VA % VB % 0.00 80 20 0.5 80 20 3.00 10 90 4.00 10 90 5.00 80 20 7.3.2 质谱参考条件 a）离子源类型：电喷雾离子源； b）扫描方式： 正离子扫描； c）电喷雾电压： 5500 V； d）离子源温度： 500 ℃； e）喷雾气流速： 50 L/h； f）气帘气流速： 50 L/h； g）多反应监测：三种农药的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数见表 2。 表2 呋虫胺及其代谢物的多反应离子监测质谱参数 名称 保留时间 min 定性离子对 m/z 定量离子对 m/z 去簇电压 V 碰撞能 V 呋虫胺 1.79 203.3/87.1 203.3/129 203.3/87.1 54 22 16 呋虫胺代谢物 UF 1.47 159.1/102 159.1/67.1 159.1/102 70 20 29 呋虫胺代谢物 DN 0.78 158.0/102.1 158.0/57.0 158.0/102.1 65 20 30 7.3.3 色谱测定与确证 根据试样中被测物的含量情况 ，选取响应值适宜的标准工作液进行色谱分析 。标准工作 液和试样中被测物的响应值均应在仪器线性响应范围内 。在上述仪器条件下 ，呋虫胺及其代 谢物 UF、DN的保留时间分别约为 1.79、1.47、0.78 min，多反应离子监测色谱图参见附录 A。按照上述条件进行样品测定 ，若检测样品的色谱峰保留时间与标准品一致 ，且与浓度相 全国团体标准信息平台 当标准工作溶液的相对丰度一致 ，相对丰度允许偏差不超过表 3规定的范围 ，则可判断样品 中存在对应的被测物。 表3 定性确证相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% 20%至50% 10%至20% ≤10% 允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 7.4 空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。 8 结果计算和表达 用色谱数据处理或按式（ 1）计算试样中各农药的含量，计算结果需将空白值扣除。 …………………………………… （1） 式中： X —— 试样中被测物残留量的数值 ，单位为 毫克每千克（mg /kg）； A —— 试样溶液中被测物的质量色谱图峰面积 ； V —— 提取液体积 的数值，单位为毫升 （mL）； CS —— 标准工作液中 被测物的质量浓度的数值 ，单位为毫克每升（ mg/L）； AS —— 标准工作溶液中 被测物的质量色谱图峰面积 ； m —— 试样质量的数值 ，单位为克（ g）。 注：测定结果用平行测定的算术平均值表示， 保留两位有效数字 。 9 精密度