ICS59.140.30 Y46 中华人民共和国国家标准 GB/T30398—2013 皮 革和毛皮 化学试验 致敏性分散染料的测定 Leatherandfur—Chemicaltests— Determinationofallergenicdispersedyestuffs 2013-12-31发布 2014-12-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国皮革工业标准化技术委员会(SAC/TC252)归口。 本标准起草单位:中华人民共和国福建出入境检验检疫局、国家皮革质量监督检验中心(浙江)、中 国皮革和制鞋工业研究院、国家鞋类检测中心。 本标准主要起草人:陈学灿、连小彬、张慧敏、赵立国、王玲霞、王晓霞、李小娅。 ⅠGB/T30398—2013 皮革和毛皮 化学试验 致敏性分散染料的测定 1 范围 本标准规定了染色皮革、毛皮及其产品中20种致敏性分散染料的测定方法。 本标准适用于染色的皮革、毛皮产品。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 QB/T1267 毛皮成品 样块部位和标志 QB/T1272 毛皮成品 化学分析试样的制备及化学分析通则 QB/T2706 皮革 化学、物理、机械和色牢度试验 取样部位 QB/T2716 皮革 化学试验样品的制备 3 原理 样品经甲醇超声波提取后,用具有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪(HPLC/DAD)对萃取液进 行定性、定量测定;或用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)进行定性、定量测定。 4 试剂 除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682规定的二级水。 4.1 甲醇(色谱级)。 4.2 磷酸氢二钠。 4.3 磷酸二氢钠。 4.4 乙酸铵。 4.5 乙酸。 4.6 单组分标准储备溶液(200mg/L):配制有效浓度为200mg/L的附录A所列的单组分分散染料 标样标准储备甲醇溶液。 4.7 用于HPLC/DAD分析的标准工作溶液(5mg/L): A组:从分散蓝1、分散蓝35、分散蓝106、分散蓝124、分散红1、分散红11、分散黄3、分散黄9、分 散橙1、分散橙3、分散橙37/76、分散棕1的单组分标准储备溶液中各取2.5mL置于同一容量瓶中,用 甲醇定容至100mL。 B组:从分散蓝3、分散蓝7、分散蓝26、分散蓝102、分散红17、分散黄1、分散黄39、分散黄49的单 组分标准储备溶液中各取2.5mL置于同一容量瓶中,用甲醇定容至100mL。 4.8 用于HPLC/MS/MS分析的标准溶液(2mg/L):从单组分标准储备溶液中各移取1mL置于同一 容量瓶中,用甲醇定容至100mL。 1GB/T30398—2013 注:单组分的标准储备液见附录A,标准工作溶液可根据需要配成其他合适的浓度。 5 仪器和装置 5.1 带旋盖(有聚四氟乙烯垫片)的管状硬质玻璃提取器(50mL)。 5.2 可控温的超声波浴(输出功率:420W,频率:40kHz),70℃±2℃。 5.3 一次性注射器(2mL)。 5.4 聚四氟乙烯薄膜过滤头(0.45μm)。 5.5 高效液相色谱仪:配有二极管阵列检测器(HPLC/DAD)。 5.6 高效液相色谱仪:配有两级质量分析检测器(HPLC-MS/MS)。 5.7 分析天平:精确至0.001g。 6 分析步骤 6.1 取样 6.1.1 标准部位取样 6.1.1.1 皮革:按QB/T2706的规定进行。 6.1.1.2 毛皮:按QB/T1267的规定进行。 6.1.2 非标准部位取样 如果不能从标准部位取样(如直接从鞋、服装上取样),应在可利用面积内的任意部位取样,样品应 具有代表性,对于毛皮样品,取样过程应避免毛被损失,保持毛被完好,并在试验报告中详细记录取样 情况。 6.2 样品的制备和萃取 称取1g试样,精确至0.01g,置于提取器(5.1)中。往提取器中准确加入10.00mL甲醇(4.1),旋 紧盖子,将提取器置于70℃的超声波浴(5.2)中提取40min,冷却至室温后,用0.45μm聚四氟乙烯薄 膜过滤头(5.4)过滤,用HPLC/DAD或HPLC-MS/MS分析。 6.3 HPLC/DAD方法 6.3.1 HPLC/DAD分析条件 由于测试条件取决于所使用的仪器,因此不可能给出色谱分析的普遍参数。采用下列参数已被证 明对测试是合适的: a) 色谱柱:HC-C18,5μm,4.6mm×250mm或相当者; b) 流动相A:甲醇; c) 流动相B:0.005mol/L磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液(pH=6.6); d) 柱温:50℃; e) 流速:1mL/min; f) 检测器:二极管阵列检测器(DAD); g) 检测波长范围:200nm~700nm; h) 定量波长:360nm,420nm,460nm,570nm,630nm; i) 进样体积:20μL; j) 梯度淋洗程序:见表1。 2GB/T30398—2013 表1 液相梯度淋洗程序 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 递变方式 0 55 45 线性 15 70 30 线性 20 80 20 线性 22 95 5 线性 25 95 5 线性 28 55 45 线性 6.3.2 HPLC/DAD定性、定量分析 分别取20μL测试液、用于HPLC/DAD分析的标准工作溶液(4.7)进行HPLC/DAD分析,通过比 较试样与标样在规定的检测波长下(见附录A)色谱峰的保留时间以及紫外-可见(UV-VIS)光谱进行定 性,外标法定量。 注:采用上述分析条件时分散染料标样的HPLC保留时间、色谱图和紫外可见光谱图参见附录A、附录B和附 录C。 6.4 HPLC-MS/MS方法 6.4.1 HPLC-MS/MS分析条件 由于测试结果与使用的仪器和条件有关,因此不可能给出色谱分析的普遍参数。采用下列参数已 被证明对测试是合适的: a) 色谱柱:EclipsePlusC18,1.8μm,2.1mm×100mm,或相当者; b) 流动相A:0.01mol/L乙酸铵溶液(用乙酸调节pH=3.6);流动相B:甲醇; c) 柱温:40℃; d) 流速:0.2mL/min; e) 进样量:2μL; f) 梯度洗脱程序:见表2; g) 离子化模式:电喷雾电离正负离子模式; h) 质谱扫描方式:多反应监测; i) 分辨率:单位分辨率; j) 其他质谱条件参见附录D。 表2 梯度洗脱程序 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 递变方式 0 70 30 线性 2 70 30 线性 5 10 90 线性 12.0 10 90 线性 13 70 30 线性 20 70 30 线性 3GB/T30398—2013 6.4.2 HPLC-MS/MS测定 分别取2μL测试液和标准工作液进行HPLC-MS/MS分析,通过选择两级质谱的特定离子对,比 较试样和标样色谱峰的保留时间进行定性,以外标法定量。 注:采用上述分析条件,20种致敏染料多反应监测(MRM)光谱图参见附录E。 6.5 空白试验 除不加试样外,均按6.2~6.4测定步骤进行。 7 结果计算 本方法测定结果以各种致敏性分散染料的检测结果分别表示,计算方法如式(1): xi=Ai×cis×V×F Ais×m……………………………(1) 式中: xi———试样中分散染料i的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); Ai———试样萃取液中分散染料i的峰面积(或峰高); cis———标准工作溶液中分散染料i的浓度,单位为毫克每升(mg/L); V———试样萃取液体积,单位为毫升(mL); F———稀释因子; Ais———标准工作溶液中分散染料i的峰面积(或峰高); m———试样量,单位为克(g)。 计算结果保留到小数点后一位。 8 方法的测定低限和精密度 8.1 测定低限 HPLC/DAD方法的测定低限为5.0mg/kg;HPLC/MS/MS方法的测定低限为0.5mg/kg。 8.2 精密度 在同一实验室,由同一操作者使用相同的设备,按相同的测试方法,并在短时间内对同一被测对象 相互独立进行的测试获得的两次独立测试结果的相对标准偏差不大于10%。 9 试验报告 试验报告至少应给出下述内容: a) 样品来源及描述; b) 采用的仪器和标准; c) 试验结果; d) 任何偏离本标准的细节; e) 试验人员、日期。 4GB/T30398—2013 附 录 A (资料性附录) 致敏性分散染料的HPLC/DAD保留时间及最大检测波长 表A.1 致敏性分散染料的HPLC/DAD保留时间及最大检测波长 序号 染料名称 化学文摘编号(CASNo.)保留时间 min检测波长 nm 1 分散蓝1 2475-45-8 3.818 570 2 分散蓝3 2475-46-9 8.409 630 3 分散蓝7 3179-90-6 16.198 630 4 分散蓝26 3860-63-7 8.095 570 5 分散蓝35 12222-75-2 13.758 570 6 分散蓝102 12222-97-8 9.484 360 7 分散蓝106 12223-01-7 8.460 360 8 分散蓝124 61951-51-7 15.471 460 9 分散红1 2872-52