ICS65.080 B13 中华人民共和国国家标准 GB/T30393—2013 制 取沼气秸秆预处理复合菌剂 Multiplemicrobialagentinstrawpretreatmentforbiogasproduction 2013-12-31发布 2014-07-16实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 技术要求 1 ………………………………………………………………………………………………… 5 抽样 2 ……………………………………………………………………………………………………… 6 检验方法 3 ………………………………………………………………………………………………… 7 检验规则 5 ………………………………………………………………………………………………… 8 标识、包装、运输和贮存 6 ………………………………………………………………………………… 附录A(规范性附录) 测定有效活菌数的培养基及其制备方法 7 ……………………………………… ⅠGB/T30393—2013 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由农业部科技教育司提出并归口。 本标准起草单位:北京合百意生态能源科技开发有限公司、中国科学院成都生物研究所。 本标准主要起草人:石卫国、廖银章、张海涛、袁月祥、刘晓风、闫志英、刘克鑫、刘晓飞、常影。 ⅢGB/T30393—2013 制取沼气秸秆预处理复合菌剂 1 范围 本标准规定了制取沼气秸秆预处理复合菌剂的术语和定义、技术要求、抽样、检验方法、检验规则以 及标识、包装、运输和贮存。 本标准适用于制取沼气的农作物秸秆预处理粉状复合菌剂。其他由微生物复合而成并能降解各种 有机固体废物的制剂参照执行。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T5009.15 食品中镉的测定 GB/T13079 饲料中总砷的测定 GB/T13080 饲料中铅的测定 原子吸收光谱法 GB/T13081 饲料中汞的测定 GB/T13088 饲料中铬的测定 GB/T19524.1 肥料中粪大肠菌群的测定 GB/T19524.2 肥料中蛔虫卵死亡率的测定 GB/T23881 饲用纤维素酶活性的测定 滤纸法 NY/T912 饲料添加剂 纤维素酶活力的测定 分光光度法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 制取沼气秸秆预处理复合菌剂 multiplemicrobialagentinstrawpretreatmentforbiogasproduction 由能够对农作物秸秆等有机固体废弃物进行生物预处理并有助于产沼气的多种微生物所组成的生 物制剂。 3.2 有效活菌 effectivelivingmicrobe 能降解有机物的功能菌及其辅助菌。 4 技术要求 4.1 菌种 使用的微生物菌种应安全、有效,有明确来源和种名,采用的生物工程菌应具有获准允许大面积释 放的生物安全性有关批文。菌剂产品应作急性毒理试验,属无毒。 1GB/T30393—2013 4.2 产品技术指标 产品技术指标应符合表1要求。 表1 产品技术指标 项 目 指 标 外观 粉状或不定形颗粒状、松散 有效活菌数(CFU)/(亿/g) ≥0.5 水分/% ≤25.0 纤维素酶活:羧甲基纤维素酶活(CMC)/(U/g) 滤纸酶活(FPA)/(U/g)≥8.0 ≥5.5 pH 5.0~8.5 有效期/月 6 4.3 产品无害化指标 产品无害化指标应符合表2要求。 表2 产品无害化指标 项 目 标准极限 大肠菌群值/(个/g) ≤1000 蛔虫卵死亡率/% ≥95 汞及化合物(以Hg计)/(mg/kg) ≤5 镉及化合物(以Cd计)/(mg/kg) ≤10 铬及化合物(以Cr计)/(mg/kg) ≤150 砷及化合物(以As计)/(mg/kg) ≤75 铅及化合物(以Pb计)/(mg/kg) ≤100 注:菌剂的载体为麦麸或干酒糟渣等,不需测无害化指标。 5 抽样 5.1 抽样工具 抽样前预先备好无菌塑料袋(瓶)、金属勺、剪刀、封样袋、封条等工具。 5.2 抽样方法和数量 每一批次产品采取随机法抽样检验。 抽样以件为单位,小包装(2kg/袋以下)产品以一个包装箱(装入若干袋)为1件,随机抽取3件,每 件中再随机抽取1袋,共计3袋;若每件包装小于500g,应多抽几件;大包装(30kg~50kg以上)产品 以1袋(筒)为1件,随机抽取5件,从每件中再抽样500g。 2GB/T30393—2013 在无菌条件下取样,然后将所有样品混匀,按四分法分装3袋,每袋不少于500g。 6 检验方法 6.1 仪器设备 主要仪器设备有: ———显微镜; ———恒温培养箱; ———恒温干燥箱; ———超净工作台; ———分光光度计; ———电子天平(或精密天平); ———摇床; ———蒸汽灭菌锅; ———酸度计。 6.2 试剂 无离子水、无菌水、蒸馏水、羧甲基纤维素钠盐、乙酸-乙酸钠缓冲液(0.1mol/L,pH5.5)、3.5-二硝 基水杨酸、氢氧化钠、酒石酸钾钠、重蒸酚、无水亚硫酸钠、检测用培养基等。 6.3 外观(感官)的测定 取少量样品放于白色搪瓷盘(或白色塑料调色板)中仔细观察样品的颜色、形状、质地。 6.4 有效活菌数的测定 6.4.1 细菌、真菌、放线菌的培养基组分及配制方法 见附录A。 6.4.2 系列稀释 称取样品10g(精确到0.01g),加入带玻璃珠的100mL无菌水中,在旋转式摇床上(200r/min)充 分振荡30min,即成母液菌悬液(基础液)。 用无菌移液管分别吸取1.0mL上述母液菌悬液加入9mL无菌水中,按10倍法进行系列稀释(每 稀释一次应更换无菌移液管)。 6.4.3 加样及培养 每个样品取3个连续适宜的稀释度,用0.5mL的无菌移液管分别吸取不同稀释度的菌悬液 0.1mL,加至预先制备好的固体培养基平板上,分别用无菌玻璃刮刀将不同稀释度的菌悬液均匀地涂 于固体培养基的表面上。每个稀释度重复3次,同时以无菌水作空白对照。 真菌于28℃~30℃培养4d~5d;中温细菌和高温细菌分别于35℃和50℃培养1d~2d;中温 放线菌于35℃培养3d~4d,高温放线菌于50℃培养2d~3d。 6.4.4 菌落识别 根据所检测菌剂中菌种的技术资料,每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技 3GB/T30393—2013 术方法确认有效菌。当空白对照培养皿出现菌落数时,检测结果无效,应重做。 6.4.5 菌落计数 细菌以出现20个~100个菌落数的稀释度的平板计数为宜;放线菌以出现10个~50个菌落数的 稀释度的平板计数为宜;丝状真菌以出现5个~30个菌落数的稀释度的平板计数为宜。按同一稀释度 三个平皿菌落的平均菌数分别统计有效活菌数目。有效活菌数按式(1)计算。 n=x×k×V1 m0×V2…………………………(1) 式中: n———有效活菌数,单位为个每克(个/g); x———有效菌落平均数; k———稀释倍数; V1———基础液体积,单位为毫升(mL); m0———样品量,单位为克(g); V2———菌悬液加入量,单位为毫升(mL)。 6.5 水分的测定 将空铝盒置于干燥箱中105℃±2℃烘30min,冷却后称量并记录空铝盒的重量。然后称取2份 平行样品(有颗粒的样品应先粉碎过1.0mm实验筛),每份10g(精确到0.01g),分别加入铝盒中后称 量并记录重量。将装好样品的铝盒置于干燥箱中105℃±2℃下烘4h~6h。取出置于干燥器中冷却 20min后进行称量,烘到恒重为止。水分含量按式(2)计算(结果为两次测定的平均值): w=(m1-m0)-(m2-m0)/(m1-m0)×100%…………………(2) 式中: w———样品水分含量,%; m1———未烘时样品和铝盒的重量,单位为克(g); m0———空铝盒的重量,单位为克(g); m2———烘干后样品和铝盒的重量,单位为克(g)。 6.6 纤维素酶活的测定 6.6.1 羧甲基纤维素酶活(CMC)的测定 按NY/T912中的规定。 6.6.2 滤纸酶活(FPA)的测定的测定 按GB/T23881中的规定。 6.7 pH的测定 随机称取样品,将样品放于干净烧杯内,按样品∶无离子水=1∶2(体积比)加入无离子水,浸泡振 荡均匀,用酸度计测定。 6.8 大肠菌群的测定 按GB/T19524.1的规定。 4GB/T30393—2013 6.9 蛔虫卵死亡率的测定 按GB/T19524.2的规定。 6.10 汞、镉、铬、砷和铅的测定 6.10.1 汞的测定 按GB/T13081的规定。 6.10.2 镉的测定 按GB/T5009.15的规定。 6.10.3 铬的测定 按GB/T13088的规定。 6.10.4 砷的测定 按GB/T13079的规定。 6.10.5 铅的测定 按GB/T13080的规定。 7