ICS67.200.20 B33 中华人民共和国国家标准 GB/T30390—2013 油 料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的测定 高效液相色谱法 Determinationofmonosaccharideanddisaccharideinoilseeds— High-performanceliquidchromatography 2013-12-31发布 2014-06-22实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位:中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心。 本标准主要起草人:李培武、胡小风、张文、丁小霞、周海燕。 ⅠGB/T30390—2013 油料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了油料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量测定的高效液相色谱法。 本标准适用于油料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的测定。 本标准方法检出限:果糖、葡萄糖、蔗糖均为2mg/g。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB5491 粮食、油料检验 扦样、分样法 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14489.1 油料 水分及挥发物含量测定 3 原理 试样经沉淀蛋白质和萃取脂肪后过滤,滤液经氨基色谱柱分离,用高效液相色谱(带示差折光检测 器或蒸发光散射检测器)测定,外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明,均使用分析纯试剂,水为GB/T6682规定的二级水。 4.1 乙腈:色谱纯。 4.2 石油醚:沸程30℃~60℃。 4.3 乙酸锌溶液(1mol/L):称取21.9g乙酸锌(C4H6O4Zn·2H2O),加3mL冰乙酸,加水溶解稀释 至100mL。 4.4 亚铁氰化钾溶液(1mol/L):称取10.6g亚铁氰化钾{K4[Fe(CN)6]·3H2O},加水溶解稀释至 100mL。 4.5 果糖、葡萄糖、蔗糖标准品纯度≥99%。 4.6 糖系列标准储备液(20mg/g):分别称取1g(精确至0.1mg)经过96℃±2℃干燥2h后的果 糖、葡萄糖、蔗糖标准品于50mL容量瓶中,加水溶解并定容。溶液放置于4℃下,可保存一个月。 4.7 糖系列标准工作液:分别准确吸取糖系列标准储备液(4.6)0.00mL、0.05mL、0.25mL、0.50mL、 1mL、2.50mL、5.00mL于10mL容量瓶中,加水溶解并定容,分别相当于0.0mg/g、0.1mg/g、 0.5mg/g、1.0mg/g、2.0mg/g、5.0mg/g、10.0mg/g浓度标准溶液。 5 仪器设备 5.1 高效液相色谱仪:带有示差折光检测器或者蒸发光散射检测器。 1GB/T30390—2013 5.2 电子天平:感量0.1mg和1mg。 5.3 恒温烘箱。 5.4 磁力搅拌器。 5.5 粉碎机。 5.6 恒温水浴。 5.7 离心机:2000r/min。 6 样品制备 6.1 按GB/T5491取样品约200g,经粉碎机粉碎,过0.64mm孔径筛,置于密闭容器内。 6.2 花生样品应先切片,再经粉碎机粉碎。 7 分析步骤 7.1 提取 称取试样5g(精确至0.1mg),置于50mL具塞离心管中,加入25mL石油醚(4.2),旋涡振荡 1min,2000r/min离心5min,弃去上层石油醚。重复上述步骤2次。60℃水浴蒸发残留的石油醚, 用玻璃棒将样品转移至150mL恒重的锥形瓶中,用50mL水分两次冲洗离心管,洗液并入锥形瓶,缓 慢加入乙酸锌溶液(4.3)和亚铁氰化钾溶液(4.4)各5mL,再加水至溶液总质量约为100g(m2,精确至 1mg),室温搅拌30min后,用定性滤纸过滤,滤液再用0.45μm微孔滤膜过滤,待测。 7.2 标准曲线绘制 吸取糖标准工作液(4.7)于进样瓶中,液相色谱仪(带示差折光检测器或蒸发光检测器)测定,以浓 度为横坐标、峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。 7.3 样品中糖测定 吸取待测液于进样瓶中,液相色谱仪(带示差折光检测器或蒸发光检测器)测定,根据标准曲线计算 样液中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量,或者利用回归方程式计算样液中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量。色谱图 参见附录A。 7.4 色谱参考条件 7.4.1 色谱柱:氨基柱,4.6mm×250mm,5μm。 7.4.2 柱温:40℃。 7.4.3 流动相:乙腈(4.1)+水=85+15(体积分数)。 7.4.4 流速:1.0mL/min。 7.4.5 进样体积:10μL。 7.4.6 色谱图:参见图A.1。 8 水分含量测定 按GB/T14489.1测定样品中水分含量。 2GB/T30390—2013 9 结果计算 试样中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量以质量分数ω计,数值用mg/g表示,按式(1)计算: ω=c×m2 m1×100% 100%-w……………………(1) 式中: ω———样品中糖(果糖、葡萄糖、蔗糖)含量,单位为毫克每克(mg/g); c———根据标准曲线算出的样液中糖的含量,单位为毫克每克(mg/g); m2———水溶液的总质量,单位为克(g); m1———试样的质量,单位为克(g); w———水分及挥发物(质量分数),%。 测定结果取其两次测定的算术平均值,计算结果保留至小数点后一位。 10 精密度 10.1 重复性 在重复性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。 10.2 再现性 在再现性条件下,获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。GB/T30390—2013 GB/T30390—2013 附 录 A (资料性附录) 果糖、葡萄糖、蔗糖液相色谱图 果糖、葡萄糖、蔗糖的标准溶液液相色谱图见图A.1。 1———果糖; 2———葡萄糖; 3———蔗糖。 图A.1 10mg/g果糖、葡萄糖、蔗糖的标准溶液液相色谱图 3102—09303T / BG