ICS13.300;11.100 A80 中华人民共和国国家标准 GB/T29764—2013 化 学品 青鳉鱼早期生命阶段毒性试验 Chemicals—Fish(Oryziaslatipes,d-rRMedaka)earlylifestagetoxicitytest 2013-09-18发布 2014-03-20实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 受试物信息 1 ……………………………………………………………………………………………… 5 方法概述 2 ………………………………………………………………………………………………… 6 仪器设备 2 ………………………………………………………………………………………………… 7 试验准备 2 ………………………………………………………………………………………………… 8 试验程序 3 ………………………………………………………………………………………………… 9 质量保证与质量控制 6 …………………………………………………………………………………… 10 数据与报告 6 ……………………………………………………………………………………………… 附录A(资料性附录) 青鳉(Oryziaslatipes,d-rRMedaka)驯养繁殖和培育的环境参数 8 ………… 附录B(资料性附录) 合格稀释水的化学特征 10 ………………………………………………………… 附录C(资料性附录) 孵化液的配制成分 11 ……………………………………………………………… 参考文献 12 …………………………………………………………………………………………………… ⅠGB/T29764—2013 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准参照了经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则No.210(1992年)《鱼类早期生命阶段 毒性试验》(英文版),并主要增加了以下内容: ———受试生物选用d-rR品系青鳉,增加了d-rR品系青鳉新孵化幼鱼、幼鱼和亲本的投喂次数、投 喂量等资料; ———异常特征中增加了多种胚胎损伤和幼鱼畸形表述; ———在性别比率表述中增加了雌雄形态区别; ———统计参数增加了试验结束时雌雄鱼性别比率。 本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。 本标准起草单位:中国科学院生态环境研究中心、中国检验检疫科学研究院、环境保护部化学品登 记中心、上海市检测中心。 本标准主要起草人:查金苗、王子健、李伟、朱莉飞、李兆利、李晞、程艳、刘纯新。 ⅢGB/T29764—2013 化学品 青鳉鱼早期生命阶段毒性试验 1 范围 本标准规定了青鳉鱼(d-rR品系青鳉,以下简称“鱼”)早期生命阶段化学品毒性试验的方法概述、 仪器设备、试验准备、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。 本标准适用于测试化学品对鱼类早期生命阶段(胚胎发育和幼鱼生长阶段)的毒性。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的,凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T27861 化学品 鱼类急性毒性试验 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 最低可观察效应浓度 lowestobservedeffectconcentration;LOEC 与对照组相比,对受试物产生显著效应(p<0.05)的最低受试物浓度。 3.2 无观察效应浓度 noobservedeffectconcentration;NOEC 试验中直接低于LOEC的受试物浓度。 3.3 半数致死浓度 medianlethalconcentration;LC50 引起50%的受试鱼死亡的受试物浓度,以LC50表示。 4 受试物信息 a) 结构式; b)纯度; c)水中溶解度; d)蒸汽压; e)水解离常数(pKa); f)正辛醇/水的分配系数(Pow); g)在水中和光中的稳定性; h)在试验液中受试物的可靠定量分析方法及其精确度、检测限; i)在试验条件下的稳定性; j)d-rR品系青鳉的LC50值; k)快速生物降解性试验结果。 1GB/T29764—2013 5 方法概述 鱼类早期生命阶段毒性试验优先采用流水式试验系统,可选择半静态(静水更新)试验系统,将胚 胎-幼鱼阶段的受试鱼(d-rR品系青鳉)暴露于一定浓度范围的受试物水溶液中。试验自受精卵放入试 验容器时开始,至幼鱼达到21日龄时结束。通过测定受试鱼的致死和亚致死效应,并与对照组值相比 较来测定受试物的LOEC和NOEC。 6 仪器设备 仪器设备如下: a) 实验室常规仪器设备; b)测定水温、pH值、溶解氧和硬度的仪器; c)温度控制仪; d)试验容器或装置:全玻璃、不锈钢或其他化学惰性材质制成,容器的尺寸符合负荷率标准。流 水式试验方法采用流水式试验装置,具备受试物贮备液连续分配和稀释系统,并具控温、充气、 流量等装置。 7 试验准备 7.1 系统选择 试验期间应尽可能维持条件的恒定,推荐流水式试验系统或半静态试验系统。 7.2 受试生物 7.2.1 受试生物的选择 本试验推荐受试生物为d-rR品系青鳉。 7.2.2 受试生物的驯养 亲鱼驯化所需适宜条件的详细资料可参见附录A。 7.3 试验水质 试验用水符合附录B要求,或参照附录C配制孵化液作为试验用水。实验用水应满足以下要求: 对照组中受试鱼的孵化率应大于或等于80%,孵化后幼鱼的存活率应大于或等于80%。试验期间应保 持水质恒定,并对水样进行定期分析,以保证稀释不会对试验结果和亲鱼繁殖产生不良影响(例如对 受试物的络合作用)。稀释水样的水质分析指标包括:重金属(如Cu2+、Pb2+、Zn2+、Hg2+、Cd2+、 Ni2+),主要阴、阳离子(如Ca2+、Mg2+、Na+、K+、Cl-、SO42-),常见农药,总有机碳和悬浮物等。 7.4 试验溶液 7.4.1 通过稀释受试物的浓缩贮备液(母液)来配制所选择浓度的试验溶液。 7.4.2 贮备液配制:最好选择机械方法(如搅拌或超声),使受试物在稀释水中简单地混合或搅动。根 据受试物溶解度值来确定浓缩贮备液的适宜浓度。某些情况下,配制高浓度贮备液需要添加助溶剂或 分散剂,但应尽可能避免使用。适合本试验的助溶剂有:丙酮、乙醇、甲醇、二甲基亚砜、二甲基替甲酰 2GB/T29764—2013 胺、三甘醇。适合本试验的分散剂有:聚氧乙烯化脂肪酸甘油酯、吐温-80、0.01%的纤维素甲醚、聚氧乙 烯化蓖麻油。在流水试验中,如果使用容易生物降解的试剂(如丙酮)和(或)高挥发性化合物时,应注 意这些物质可能会随着细菌的聚集而产生一些问题,影响试验结果。当使用某种助溶剂或分散剂时, 助溶剂或分散剂浓度不能超过0.1mL/L,且在所有容器中浓度一致。 7.4.3 对于流水式试验,应有连续分配和稀释受试物贮备液的系统(如计量泵、比例稀释器和饱和系 统),将贮备液和稀释水按照一定比例和一定流速输送至试验容器,从而得到一系列浓度的试验溶液。 在试验期间,应定期检查贮备液和稀释水的流速,最好为每天检查,且试验期间的流速变化应不超过 10%。流速大小的选择,应控制试验溶液的更新速率至少为每天5倍试验容器容积。 7.4.4 对于半静态试验中,更换试验溶液有两种可选择的方法: a) 转移受试生物:在清洁容器中配制新的试验溶液,然后将处在极少量体积旧溶液中存活的受精 卵和幼鱼转移至另一容器中,但要避免受精卵和幼鱼暴露于空气中; b)不转移受试生物:将受试生物体仍留在试验容器内,部分更新试验溶液(至少为2/3容器容 积)。 7.4.5 半静态试验的试验溶液更新频率取决于受试物的稳定性,但推荐每天更新。若期间受试物的浓 度不稳定,则应改为使用流水式试验。在试验溶液的更换操作中,应小心避免碰伤幼鱼。 8 试验程序 8.1 准备 8.1.1 胚胎和幼体的处理 8.1.1.1 胚胎:试验开始时,将受试鱼类(d-rR品系青鳉)的胚胎暴露于体积足够大的试验容器(如容 积大于150mL结晶皿或烧杯)中。胚胎阶段暴露采用半静态试验体系,每天更新试验溶液。 8.1.1.2 幼鱼:幼鱼孵出后,如有必要,将幼鱼转移至大型试验容器内(例如烧杯或一次成型鱼缸)。在 幼鱼孵出两天后开始投喂,饵料为刚孵出的丰年虫,每天2次~3次饱食投喂。幼鱼阶段暴露优先选择 流水试验体系,可选择半静态试验体系。 8.1.1.3 半静态试验可使用烧杯或浅容器,如有必要,可在烧杯底部配备可轻轻提起的网筛。如果该 容器的容积足以符合负荷要求,则不必进行胚胎和幼鱼的转移。幼鱼转移时间为孵化后2d。转移幼鱼 时,不应将幼体暴露在空气中,也不应使用网具从容器中捞取(体质较强的鱼种除外)。推荐使用巴德斯 吸液管移动胚胎和幼鱼。 8.1.2 暴露条件 8.1.2.1 持续时间 受试鱼卵受精后应尽可能快地开始试验,在胚胎开始分裂前或胚胎开始分裂后即将胚胎放入试验 溶液,最迟不能晚于卵受精后8h。试验应最短持续到对照组试验鱼可