ICS65.020.01 B16 中华人民共和国国家标准 GB/T29587—2013 松 疱锈病菌检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofCronartiumribicolaJ.C.Fisch. 2013-07-19发布 2013-12-06实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国北京出入境检验检疫局、四川省森林病虫防治检疫总站、北京林 业大学、中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共 和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫局。 本标准主要起草人:高文娜、杨佐忠、贺伟、韩晶、吕玉峰、汪万春、周琦、廖芳、邓丛良、江丽辉、边勇、 梁新苗、李建光、程颖慧、王颖、吴兴海、丁元明、李旻。 ⅠGB/T29587—2013 松疱锈病菌检疫鉴定方法 1 范围 本标准规定了松疱锈病菌(CronartiumribicolaJ.C.Fisch.)的检疫鉴定以病原菌的形态特征及在 寄主植物上的症状作为依据,明确了现场检疫、病原菌分离、镜检鉴定、样品保存的方法。 本标准适用于松属Pinusspp.的单维管束松亚属寄主植物中松疱锈病菌的检疫鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 SN/T1126 进出境木材检疫规程 SN/T1157 进出境植物苗木检疫规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 单维管束松亚属 Subgen.Strobus 针叶基部的叶鞘早落,鳞叶不延下生长,针叶内具一条维管束,木材材性较软,结构均匀,强度较小, 早材带至晚材带渐变,木射线管胞内壁上无锯齿,晚材细胞切向壁上具缘纹孔显著,木射线细胞水平壁 纹孔明显、端壁常具节状加厚。 3.2 双维管束松亚属 Subgen.Pinus 针叶基部的叶鞘宿存,鳞叶下延生长,针叶内具两条维管束,球果种鳞的鳞脐均生于鳞盾的中央,木 材材性较硬,结构不均匀,强度较大,松脂较多,早材带至晚材带通常急变,木射线管胞内壁上具有深或 浅的锯齿,晚材管胞切向壁上具缘纹孔或有或无,木射线细胞水平壁纹孔缺如或稀少。 4 松疱锈病菌基本信息 中文名:松疱锈病菌,又称白松疱锈病菌、茶藨生柱锈菌。 学名:CronartiumribicolaJ.CFisch.1872。 异名:PeridermiumstrobeKleb。 病害中文名:松疱锈病,又称白松疱锈病、五针松疱锈病、华山松疱锈病、红松疱锈病。 病害英文名:soft-pinestemblisterrust、white-pineblisterrust、white-pinestemrust、korean-pine stemrust 属于担子菌亚门Basidiomycotina、冬孢菌纲Teliomycetes、锈菌目Uredinales、栅锈菌科Melamp- soraceae、柱锈菌属Cronartium。 该病原菌主要通过苗木引种栽植、带皮原木贸易运输进行远距离传播和蔓延。 1GB/T29587—2013 松疱锈病菌的其他信息参见附录A。 5 方法原理 观察松疱锈病菌在寄主植物上的症状,显微观察病原菌的形态特征,进行检测鉴定。 6 器材和试剂 6.1 器材 生物数码显微镜(带数码成像系统)、目(物)镜测微尺、试剂瓶、刀片、镊子、洗瓶、量筒、量杯、载玻 片、盖玻片、放大镜、枝剪、手套、木工斧(电锯)、照相机、样品袋、标签、采样凭证等。 6.2 试剂 蒸馏水、中性树胶等。 7 检测 7.1 取样 在检疫过程中,根据不同样品类型,分别按照SN/T1157或SN/T1126中的方法进行。 7.2 松属寄主症状检查 重点检查松属植株枝干部是否有流脂、皮层肿大、破裂并从裂缝中生出黄白色至橘黄色的锈孢子器 (疱囊)或散发出大量锈黄色的锈孢子;感病枝、干皮层可见初期呈白色后变橘黄色泪滴状“蜜滴”(即性 孢子液),“蜜滴”消失后皮下可见“血迹”状斑(参见附录A、附录B)。挑取观察到可疑症状的样品,送实 验室作进一步检验鉴定。 8 鉴定 对于有可疑症状的样品,在有症状部位挑取孢子在显微镜下观察测量,并记录特征数据。 9 病原菌孢子形态鉴定特征 9.1 性孢子器和性孢子 性孢子器黄白色或橘黄色,平展于松树皮层中。性孢子无色,鸭梨形,单细胞,大小为(2.4μm~ 4.5μm)×(1.8μm~2.5μm)。 9.2 锈孢子器和锈孢子 锈孢子器由无色梭形细胞组成的疱囊状或圆柱状包膜所包裹,初期为黄白色,后变为橘黄色,生于 枝干皮层外,高4.0μm~6.0mm,短径3.0μm~5.0mm,长径4.0μm~40.0mm。单个锈孢子锈黄 色,成堆时为橘黄色,球形或卵圆形,大小为(22.8μm~33.6μm)×(14.4μm~28.8μm),表面生柱状 疣突,疣上有5层~7层环纹,并有一与疣突顶部共处同一球面的平滑区。 2GB/T29587—2013 10 结果判定 如果松树寄主症状检查结果符合7.2的描述,病原菌孢子形态观察结果符合9.1、9.2的鉴定特征, 且符合柱锈属Cronartium分种检索表(参见附录C)对茶藨生柱锈菌的描述,可判定检测样品携带松疱 锈病菌Cronartiumribicola;反之,则非松疱锈病菌。 11 样品保存与结果记录 保存样品经登记和经手人签字后妥善保存。对检出松疱锈病菌的样品应制备永久玻片并干燥后保 存,以备复核,该类样品保存期满后,需销毁处理。 试验记录应包括:样品来源、种类、时间;检验试验的时间、地点、方法和结果;经手人、试验人员和审 核人员的签字;寄主的症状照片等。上述资料应归档并妥善保存。 3GB/T29587—2013 附 录 A (资料性附录) 松疱锈病菌的其他信息 A.1 形态特征 性孢子器于秋季(8月~9月)生于枝干皮层,成泪滴状,蜜黄色,口感有甜味而有“蜜滴”之称。初 期为白色,2d~3d后渐变成黄色或黄褐色,6d~8d后干枯,留下“血迹”状斑点。3月~5月后在上一 年产生“蜜滴”的松树病部产生具疱膜的黄色囊状锈孢子器,内含大量锈孢子,以后多年可持续产生锈孢 子器。疱囊成熟后呈橘黄色,破裂,散出粉状锈孢子,最后留下膜状白色包被,并逐渐散落消失。 A.2 寄主范围 病原菌的性孢子和锈孢子阶段寄主有红松Pinuskoraiensis、华山松P.armandii、西伯利亚红松 P.sibirica、偃松P.pumila、台湾五针松P.morrisonicola、乔松P.griffithii、海南五针松P. fenzeliana、瑞士石松P.cembra、北美乔松P.strobus、山白松P.monticola、美国白皮松P.albicaulis、 巴尔夫氏松P.balfouriana、柔松P.flexilis、墨西哥白松P.ayacahuite、恰帕松P.chiapensis和糖松 P.lambertiana等松属中单维松树。 A.3 对寄主的危害情况 病害发生在单维松枝干皮部,不危害木质部。该病先在侧枝基部发病,然后向干皮扩展,有时枝干 同时发病。发病部位常在地上150cm以内的枝干上。 A.4 地理分布 日本、韩国、朝鲜、菲律宾、巴基斯坦、尼泊尔、伊朗、印度、比利时、芬兰、俄罗斯、前南斯拉夫、瑞士、 瑞典、西班牙、罗马尼亚、波兰、挪威、荷兰、意大利、爱尔兰、匈牙利、德国、法国、丹麦、斯洛伐克、捷克、英 国、奥地利、美国、加拿大、中国(辽宁省、四川省、云南省和陕西部分地区)。 A.5 生物学特性 锈孢子萌发的最适温度为19℃~21℃,最适湿度为90%以上,在散射光下萌发最好,黑暗条件次 之,直射光下最差。在0.5%琼脂膜上萌发最好。锈孢子具1~4(6)个芽孔,但只有其中之一为优势生 长,先端可有分支。 4GB/T29587—2013 附 录 B (资料性附录) 松疱锈病菌病原形态图 松疱锈病菌病原形态见图B.1~图B.6。 图B.1 红松疱锈病 图B.2 五针松疱锈病 图B.3 五针松疱锈病病状 5GB/T29587—2013 图B.4 华山松疱锈病(锈孢子器脱落后的病斑) 图B.5 蜜滴 图B.6 锈孢子(3000倍) 注:图B.1、图B.4由贺伟提供;图B.2、图B.3、图B.5、图B.6由杨佐忠提供。 6GB/T29587—2013