ICS65.020.20 B21 中华人民共和国国家标准 GB/T29371.5—2012 两 系杂交水稻种子生产体系技术规范 第5部分:种子纯度鉴定和不育系 育性监测技术规范 Technicalrulesforseedproductionsystemoftwo-linehybridrice— Part5:Technicalrulesforidentificationofvarietypurity&malesterilityof MSline 2012-12-31发布 2013-07-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 GB/T29371《两系杂交水稻种子生产体系技术规范》分为五个部分: ———第1部分:术语; ———第2部分:不育系原种生产技术规范; ———第3部分:不育系大田用种繁殖技术规范; ———第4部分:杂交制种技术规范; ———第5部分:种子纯度鉴定和不育系育性监测技术规范。 本部分为GB/T29371的第5部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本部分由中华人民共和国农业部提出。 本部分由全国农作物种子标准化技术委员会(SAC/TC37)归口。 本部分起草单位:湖南杂交水稻研究中心、湖南隆平种业有限公司、湖南农业大学、湖南省种子管理 局、安徽省农业科学院、江苏省农业科学院、广东省农业科学院。 本部分主要起草人:周承恕、刘爱民、李稳香、肖层林、王守海、吕川根、王丰、廖翠猛、刘建兵、 欧阳爱辉。 ⅠGB/T29371.5—2012 两系杂交水稻种子生产体系技术规范 第5部分:种子纯度鉴定和不育系 育性监测技术规范 1 范围 GB/T29371的本部分规定了高温不育型水稻光温敏不育系不育起点温度监测、不育系种子和杂 交种种子纯度种植鉴定的方法和程序。 本部分适用于已审定或已鉴定的高温不育型光温敏不育系不育起点温度监测、不育系与杂交种种 子纯度的种植鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的,凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB4404.1—2008 粮食作物种子 第1部分:禾谷类 GB/T3543.2—1995 农作物种子检验规程 扦样 3 不育系育性监测 3.1 人工气候室监测 3.1.1 监测材料与要求 3.1.1.1 监测材料 通过省级或以上农作物品种审定委员会审定或技术鉴定并在生产上使用的水稻光温敏不育系。 3.1.1.2 材料要求 鉴定材料要求种子300g~500g、发芽率≥80%、纯度≥99.5%,并提供该不育系通过审定或鉴定 时的品种标准。 3.1.1.3 扦样要求 执行GB/T3543.2—1995的规定。 3.1.2 监测设施条件 3.1.2.1 人工气候室条件 人工气候室设置温度为15℃~35℃,能保持设定温度恒定,波动幅度和室内温度均匀度 ±0.5℃;可控光照强度0lx~4×104lx。 3.1.2.2 计量器具条件 配备照度计、0.2℃刻度水银温度计和温度自记仪。 1GB/T29371.5—2012 3.1.3 监测方法 3.1.3.1 监测材料准备 根据各监测材料播始历期,按8月10日左右始穗确定播种日期。按常规方法浸种、催芽、育秧,5.5 叶龄时移栽至大田,密度20cm×20cm。进入人工气候室前15d,取农艺性状整齐一致、单株分蘖穗 6个~8个的植株移栽入栽培钵,每钵3株,共20钵。钵径25cm~30cm,钵中泥深15cm,按常规方 法栽培管理。其中15钵用于人工气候室处理,3钵用作室外对照,2钵用于观察幼穗发育进度。 3.1.3.2 处理时期 3.1.3.2.1 籼稻 主茎幼穗分化进入Ⅳ期末时,移入人工气候室进行处理。 3.1.3.2.2 粳稻 主茎幼穗分化进入Ⅲ期末,移入人工气候室进行处理。 3.1.3.3 处理天数 连续处理6d。 3.1.3.4 处理期间温光设置 日照长度12.5h~14.0h,相对湿度75%左右,日均温23.5℃或23.0℃(视鉴定不育系的不育起 点温度值而定),各时间段的温度见表1。 表1 日平均温度23.5℃或23.0℃的人工气候室温光设置 温 度 时 间 日均温23.5℃ 日均温23.0℃光 照 06:01~10:00 23.5℃ 23.0℃ 10:01~18:00 26.5℃ 26.0℃ 18:01~22:00 23.5℃ 23.0℃ 22:01~06:00 20.5℃ 20.0℃光照强度≥1×104lx 20:00~6:00为暗期(14.0h) 19:30~6:00为暗期(13.5h) 18:30~6:00为暗期(12.5h) 3.1.3.5 过渡期温光设置 处理前后2d,如果自然日均温≥30℃或≤25℃,处理材料应在日温28℃、夜温24℃、光照强度 1.0×104lx条件下过渡2d后,再移入人工气候室或放置自然条件下。 3.1.4 育性观察 3.1.4.1 观察对象 人工气候室处理结束时,挂牌标记剑叶与倒2叶的叶枕距为0cm~2cm的稻穗。 3.1.4.2 观察方法 标记穗始穗后每天上午取当天将开花的颖花(花药伸长至颖花长三分之二)进行花粉镜检。每穗随 2GB/T29371.5—2012 机取5朵~6朵颖花的花药制成一个观察片,用I2-KI溶液对其花粉染色、压片,在光学显微镜下放大 100倍镜检,每片选3个有代表性的视野,每个视野的花粉粒应在50粒以上,观察计数3个视野不同类 型花粉(无花粉败育﹑典败、圆败、染败、正常)的数量,计算每片中不同类型花粉的百分率。如果某一观 察片发现染色花粉,则视为育性波动。 3.1.4.3 观察次数 每天镜检1次,镜检至标记穗开花结束止。 3.1.4.4 花粉分类 3.1.4.4.1 无花粉型———在显微镜下只见空花药壁,看不到任何类型的花粉。 3.1.4.4.2 典败花粉———花粉粒形状不规则、粒小,不染色。 3.1.4.4.3 圆败花粉———花粉粒圆形、大小基本正常,不染色。 3.1.4.4.4 染败花粉———花粉粒形状不规则、粒小、染色,或花粉粒形状正常、染色浅。 3.1.4.4.5 正常花粉———花粉粒圆形、大小正常,深染色。 3.1.5 分级标准 3.1.5.1 原种标准 所有单株材料每次镜检染色花粉率均为零。 3.1.5.2 大田用种标准 单株每次镜检染色花粉率小于1%,所有单株平均染色花粉率小于0.1%。 3.2 多点自然生态监测 3.2.1 监测材料与要求 同3.1.1。 3.2.2 播期安排与田间设计 在监测地点的最早播种期至最晚播种期期间,每10d播1期,每个播期移栽100个单株,移栽叶龄 5.5叶左右,密度13.3cm×20cm,田间管理按大田生产要求进行。 3.2.3 生育特性与形态特征记载 3.2.3.1 生育特性记载:播种期、移栽期、始穗期,计算播始历期。 3.2.3.2 主茎叶片数记载:对奇数播期定点10株,记载主茎总叶片数。 3.2.3.3 形态特征:考察不同生长发育时期的形态特征。 3.2.4 育性考查 3.2.4.1 花粉镜检 从最早播期始花至最迟正常抽穗播期终花止,每2d~3d镜检一次。期间若发现有染色花粉,从 该天起至没有染色花粉之日后两天止,每天镜检花粉。 3.2.4.2 自交结实率考查 在镜检发现染色花粉的播期中随机选取10个单株完全隔离栽培,齐穗后20d~25d考查自交结 3GB/T29371.5—2012 实率。 3.2.5 不育系群体整齐度调查 每个不育系选择2个完全不育的播期,调查生育期、株高、株叶穗粒型、颜色等性状。 3.2.6 综合评价 3.2.6.1 农艺性状 根据监测材料田间的生育特性、植株形态特征、穗粒形状、异交特性、抗性等表现,对照品种介绍,对 监测材料群体的稳定性、一致性进行评价。 3.2.6.2 不育起点温度 将各自然生态点的育性波动出现的日期与育性敏感期的日平均气温进行对应分析,判断监测材料 的不育起点温度。 4 种子纯度种植鉴定 4.1 鉴定材料 不育系种子和杂交种子。 4.2 鉴定程序 4.2.1 扦取样品 按GB/T3543.2—1995的有关规定执行。 4.2.2 选择田块 选择田块的基本要求是:田块形状较规则以便于小区布局;土壤肥力均匀、排灌方便;前作不是水 稻,或能确认散落在田间的种子已全部发芽或得到清除。 4.2.3 设立对照 选具有供鉴定品种原有的特征特性的种子和同组合母本种子作对照。 4.2.4 小区设计 4.2.4.1 要求 将同一品种、类似品种的所有样品和对照样品种相邻种植。 4.2.4.2 种植株数 不育系原种≥4000株;不育系大田用种≥1000株;杂交种子≥500株。 4.2.4.3 种植密度 不育系种子10cm×10cm,杂交种子10cm×13.3cm。每行种植10株,不育系原种种植400行, 不育系大田用种种植100行,杂交种子种植50行。样品之间间隔25cm。 4GB/T29371.5—2012 4.2.5 栽培管理 4.2.5.1 播种 采用浸种催芽播种方式。每样品播种面积为0.5m2~1.0m2。秧龄视生长时期的气温高低而定。 海南种植鉴定的播种期根据材料的生育期安排,冬季鉴定宜将抽穗期安排在11月底前,春季鉴定 宜将抽穗期安排在4月10日后。 杂交种子本地种植鉴定按本品种正季播种,不育系种子按当地制种季节播种。 4.2.5.2 移栽 单本栽插。 4.2.5.3 田间管理 选中等土壤肥力的田块作种植鉴定田,较低肥料水平管理;生长期间注意病虫害防治和