ICS65.020.01 B16 中华人民共和国国家标准 GB/T28107—2011 枣大球蚧检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofEulecaniumgigantea(Shinji) 2011-12-30发布 2012-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前　　言 　　本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国山西出入境检验检疫局、山西大学、中华人民共和国天津出入境 检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局。 本标准主要起草人:李惠萍、丁三寅、连庚寅、谢映平、黄国明、陈乃中、党海燕、魏春艳、吴海军、 牛春敬、田丽红、赵悠悠。 ⅠGB/T28107—2011 枣大球蚧检疫鉴定方法 1　范围 本标准规定了枣大球蚧[Eulecaniumgigantea(Shinji)]的检疫鉴定以雌成虫的形态学特征作为依 据,明确了现场检查、标本制备、镜检鉴定、样品保存的方法。 本标准适用于枣大球蚧的检疫鉴定。 2　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 尾裂(臀裂)　analcleft 在蚧科中,蚧虫的肛门位置向内凹入,虫体后面出现一条狭缝,被称为尾裂或臀裂。 2.2 肛板　analplate 在尾裂背底,肛门之上盖有两块三角形的硬化板,称为肛板。 2.3 肛环　analring 肛门凹入位于一筒状结构之内,后者叫肛筒(analtube),在肛筒的外端有一硬化环。由两个月牙形 的环组成,是肛门的开口,称为肛环。肛环上有一至几列环孔,并常有肛环毛6根~8根。 2.4 气门路　stigmaticgroove 胸气门到体缘有成列的盘腺,形成气门路。 2.5 气门洼　stigmaticdepression 气门路在体缘一端的体壁有不同程度的凹陷,称为气门洼。 2.6 气门刺　stigmaticspine 在气门路体缘一端即气门洼处的刺称为气门刺。 2.7 盘腺　discalpores 一类孔状的腺体结构,分泌蜡质物覆盖于虫体表面。蚧科中的特征盘腺有五格腺、多格腺和盘状 孔。五格腺(quinquelocularpores)圆形,中心有一格,周围围绕五格。多格腺(multilocularpores)中心 具一格,周围围绕多格(五格以上)。盘状孔(preopercularpores)圆形,不分格,仅为具有颗粒状表面的 膜状结构。 2.8 管腺　tubularducts 一类柱形或近柱形的腺体结构,分泌蜡丝形成虫体覆盖物或卵囊。蚧科中的特征管腺为瓶状腺。 1GB/T28107—2011 瓶状腺(invaginatedtubularduct),呈柱形管筒,管口内端膨大有硬化框,因大小差异又分为大瓶状腺和 小瓶状腺。 3　枣大球蚧基本信息 枣大球蚧(E.gigantea)隶属于同翅目(Homoptera),蚧科(Coccidae),大球蚧属(EulecaniumCock- erell)。 枣大球蚧其他信息参见附录A。 4　方法原理 根据枣大球蚧的寄生危害特点,检查其寄主植物,获取不同发育期的虫体,将若虫饲养至成虫,制成 显微玻片进行观察,依据成虫的显微形态特征对种类进行鉴定。 5　仪器、用具和试剂 5.1　仪器 生物显微镜、体视显微镜、水浴锅。 5.2　用具 放大镜、剪刀、小刀、镊子、昆虫解剖针、小毛笔、养虫瓶、铝盒、纸袋、吸水纸、1.5mL离心管、6cm 表面皿、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、解剖刀、酒精灯、滤纸、标签。 5.3　试剂 70%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、10%氢氧化钠(或10%氢氧化钾)溶液、冰醋酸、酸乙醇溶液(冰醋 酸∶95%乙醇∶蒸馏水体积比为2∶9∶9)、酸性品红(酸性品红95%乙醇饱和溶液)、二甲苯、石炭酸- 二甲苯溶液(石炭酸∶二甲苯体积比为1∶2)、中性树胶、乙醇-甘油保存液(70%乙醇∶甘油的体积比 为50∶1)。 6　现场检查 6.1　叶片检查 用放大镜检查寄主植物叶片正面、反面及叶脉两侧。如有黄色、淡黄色或黄褐色的固着虫体,体被 白色蜡壳、蜡片或蜡块,则将带虫叶片取下,放入养虫瓶。 6.2　枝条检查 检查枝条、分叉、裂缝、芽腋及其附近,重点检查枝的向地一侧: ———如有灰褐色并被龟裂状蜡层的虫体,或被一层污白色毛玻璃状蜡壳虫体,则连寄主采下,放入 养虫瓶或用吸水纸包被,再放入纸袋内,置于铝盒中; ———如有红褐色至紫褐色半球形或近球形的虫体,或体被灰白色薄蜡粉;或为亮褐色至亮黑褐色的 虫体干尸,则均连同寄主采下,用吸水纸包被,再放入纸袋内,置于铝盒中。 6.3　将现场所取虫样标本送实验室鉴定。 2GB/T28107—2011 7　实验室检疫鉴定 7.1　症状检查 检查送检样品(参见6.1和6.2),将虫样轻移入70%乙醇或乙醇-甘油保存液中固定保存。 7.2　标本制备 将现场所取和实验室挑取的虫样标本按固定、加热、解剖清洗、染色、脱色、脱水、封片的步骤制成玻 片标本(参见附录B)。 7.3　镜检鉴定 将玻片标本置于生物显微镜下观察形态特征,先确定是否属于蚧科(参见C.1),然后确定是否属于 大球蚧属(参见C.2),最后核对种的特征,并与近似种相区分(参见C.3)。 8　枣大球蚧鉴定特征 8.1　雌成虫 8.1.1　田间形态特征(参见图D.1) 8.1.1.1　产卵前的雌成虫 虫体长18.8mm,宽18.0mm,高14.0mm,属于大球蚧属中个体最大者;产卵前的年轻雌成虫体 鼓起近半球形,头半部高突,后半部略狭而斜;体黑红褐色至紫褐色,或有些发绿红褐色,体背有暗红色 或红褐色花斑组成的4个纵列,各斑块间不连续。靠近背中央的2列花斑较小,呈明显的3对~4对, 外侧2纵列斑块常由6块组成。体被灰白色绒毛状薄蜡粉,蜡粉覆盖虫体不严,光滑的体壁和花纹闪光 清晰可见。 8.1.1.2　雌成虫虫体干尸 虫体干尸固着树枝很紧,可持续1年甚至更长时间不易脱落,用手捏干尸,可感到体壁薄,易将顶部 捏碎。 8.1.2　显微形态特征(参见图E.1) 8.1.2.1　体腹面 腹面可见触角1对,7节,以第3节最长,第4节突然变细。足3对,均小,腿节小于气门盘直径,胫 节的长为跗节的1.3倍,跗、爪冠毛均细尖。胸气门2对,每条气门路上五格腺20个~25个,呈不规则 1列。多格腺分布于腹面中区,尤以腹部为密集。大瓶状腺在腹面亚缘区成密集带状分布,小瓶状腺见 于胸部中区。 8.1.2.2　体缘 体缘具缘刺,尖锥形。气门洼不显,气门刺与缘刺近似,略小,相互靠近。 8.1.2.3　体背面 肛板三角形2块,合成正方形,其后角外缘有长、短毛各2根。肛周体壁幼时不硬化,老熟期硬化, 3GB/T28107—2011 无网纹。肛环宽,有内、外列孔及环毛8根。腺体在背面盘状孔丰富,有少量小瓶状腺。背刺散布。 8.2　雄成虫(参见图D.2和图F.6) 8.2.1　虫体 体长2.35mm~3.50mm,翅展4.80mm~5.20mm。头部黑褐色,前胸、腹部、触角和足为黄色。 8.2.2　头部 触角丝状,10节,长约1.50mm。单眼5对,背、腹眼各1对,侧眼在头之两侧各3个,呈弧形排列, 环绕于头部触角周缘。 8.2.3　胸部 中胸气门和后胸气门各1对,周围均无腺体分布。前翅1对,半透明。后翅退化为平衡棒,呈叶片 状。胸足3对,胫节末端有1长距。爪稍弯曲,末端有小齿。爪冠毛和跗冠毛各1对,跗冠毛粗,爪冠毛 较细,末端均膨大呈球形。 8.2.4　腹部 腹部8节,具刚毛,在腹面和背面稀疏分布,腹部末端数量最多,约8根,簇生。第8节有一尾突。 阳茎鞘长度约为体长之半,基部上方两侧各有一个尾槽,尾槽内壁具多格腺和粗长刚毛2根,尾槽内各 生出一根白色细长的蜡丝,长度约为体长的3倍。 8.3　卵 长圆形,初产时为白色,渐变粉红色。卵在体下常被白色细蜡丝搅裹成块,不易散开。 8.4　1龄若虫 8.4.1　田间形态特征(参见图D.3) 固定后若虫扁平,草履形,体被白色透明蜡质,成平滑的薄蜡壳,其背中部有一条隆线。透过蜡壳可 见体色淡黄,眼色淡红。 8.4.2　显微形态特征(参见图F.1) 8.4.2.1　虫体椭圆形,体长0.60mm~0.72mm,宽0.30mm~0.50mm。 8.4.2.2　触角6节;足3对,发达,具跗冠毛和爪冠毛各1对,均细长,末端明显膨大。 8.4.2.3　体缘刺细尖,稀疏分布,腹部之缘刺略长于头部的,最末1根最长,约70μm。 8.4.2.4　胸气门2对,直筒状,气门刺各3根,锥状等大;气门路上有五格腺4个~5个,排成1列。 8.4.2.5　肛门位于虫体背面腹部末端,臀裂浅而宽,肛筒伸至臀裂之间且明显外露。肛板表面具网纹。 肛板端毛3根,中央1条极长,约380μm。肛环毛6根,背面2根最长,约300μm。 8.5　2龄若虫 8.5.1　田间形态特征(参见图D.3和图D.4) 8.5.1.1　发育前期虫体体被白色半透明介壳,边缘有长方形白色蜡片12对,头部前端为1块,前、后胸 气门处各有一条白色蜡丝覆盖于长方形蜡片之下,背中隆线加宽,背部有前后两个环状壳点(蜡块),臀 末两根白色蜡丝部分露出介壳。 4GB/T28107—2011 8.5.1.2　发育中期虫体背部有前、中、后3个环状壳点。 8.5.1.3　越冬后,2龄雌若虫体被一层灰白色半透明呈龟裂状的蜡层,蜡层外附少量白色蜡丝,体缘的 缘刺被蜡层覆盖呈白色。 8.5.2　显微形态特征(参见图F.2) 8.5.2.1