ICS65.020.01 B16 中华人民共和国国家标准 GB/T28079—2011 水 稻稻粒黑粉病菌检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofTilletiahorridaTak. 2011-12-30发布 2012-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位:中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国天津出入境检验检疫局。 本标准主要起草人:吴品珊、罗家凤、杜洪忠、严进。 ⅠGB/T28079—2011 水稻稻粒黑粉病菌检疫鉴定方法 1 范围 本标准规定了水稻稻粒黑粉病菌形态学鉴定的方法。 本标准适用于水稻Oryzasativa、大米、稻壳中水稻稻粒黑粉病菌的检疫和鉴定。 2 水稻稻粒黑粉病菌基本信息 中文名:水稻稻粒黑粒病菌 学名:TilletiahorridaTak.。 异名:Tilletiabarclayana(Bref.)Sacc.&P.Syd.; Neovossiahorrida(Takah.)Padwick&A.Khan; NeovossiabarclayanaBref.。 病害英文名:blacksmutofrice,ricekemelsmut。 属真菌界Fungi,担子菌门Basidiomycota,黑粉菌纲Ustilaginomycetes,外担菌亚纲Exobasidio- mycetidae,腥黑粉菌目Tilletiales,腥黑粉菌科Tilletiaceae,腥黑粉菌属Tilletia。 病菌的形态特征与我国进境植物检疫性有害生物小麦印度腥黑穗病菌Tilletiaindica以及黑麦草 腥黑穗病菌Tilletiawalkeri近似。 水稻稻粒黑粉病菌的其他信息参见附录A。 3 方法原理 根据稻粒黑粉病菌孢子的形态特征和对寄生造成的症状特征为判断稻粒黑粉病菌的依据。 4 仪器 4.1 生物显微镜。 4.2 体视显微镜。 4.3 往复式振荡器。 4.4 低速离心机。 5 试剂 5.1 吐温-20(Tween-20)。 5.2 席尔氏浮载剂(参见附录B)。 6 检测 6.1 肉眼观察 将水稻稻粒、大米或夹杂在其他货物中的水稻稻粒置于灭菌的白色瓷盘中,根据下列特征检查菌瘿 1GB/T28079—2011 和病粒:病粒外表污绿色或污黄色,有时似健粒,饱满或略秕,松软,隐约可见内部的黑色物,破裂后即 可散出;有时病粒开裂,散出黑粉;有的病粒呈暗绿色或焦黄色;也有的病粒局部隐暗,米粒部分破坏,胚 完好。对疑似病粒,挑取黑粉制片。 6.2 洗涤检验 称取50g样品,倒入250mL灭菌的三角瓶内,加灭菌水100mL、吐温-201滴~2滴,铝箔纸封 口,将三角瓶在振荡器上振荡洗涤5min。 将洗涤悬浮液注入10mL~20mL灭菌的刻度离心管内,1000r/min离心3min,倒掉上清液,再 加剩余洗涤悬浮液,重复离心,直至所有洗涤悬浮液离心完毕,留沉淀物。 在沉淀物中加入席尔氏浮载剂,视沉淀物的量,定容至1mL~3mL,吸取5μL~20μL沉淀物悬 浮液制片。 7 鉴定 在油镜(100×)下随机观察测量30个成熟的黑粉菌冬孢子,记录冬孢子大小、表面突起形状、突起 高度。同样条件下观察不孕细胞形态特征,测量相关特征数值。 8 稻粒黑粉病菌形态特征 8.1 冬孢子 冬孢子球形或近球形,浅褐色至深褐色,直径17μm~36μm,平均24μm~28μm。冬孢子侧面观 表面有疣突,顶弯曲、尖锐,成熟的孢子顶端平截或钝,被透明的胶质鞘包围,高1.5μm~4.0μm;正面 观疣突均匀分布,排列紧密,呈多角型。 8.2 不孕细胞 不孕细胞球形,近球形,透明,孢壁光滑,大小(22μm~36μm)×(14μm~24μm),壁厚1.5μm~ 5.0μm。 8.3 水稻稻粒黑粉病菌与近似种的比较 见附录C和参见附录D。 9 结果判定 如样本的形态特征与第8章描述吻合,可判定为水稻稻粒黑粉病菌TilletiahorridaTak.。否则, 不视为水稻稻粒黑粉病菌。 10 样品保存 检疫鉴定后保存样品,以备复验、谈判和仲裁。由鉴定人标识确认、样品管理员登记,置于干燥、防 虫、防鼠处保存,保存期为一年,有特殊需求保存期可适当延长。保存期满,需经灭菌后方可处理。 2GB/T28079—2011 附 录 A (资料性附录) 水稻稻粒黑粉病菌其他信息 A.1 寄主范围 主要寄主水稻(Oryzasativa),次要寄主有臂形草属(BrachiariaGriseb.)、马唐属(DigitariaHal- ler)、黍属(PanicumL.)和狼尾草(Pennisetumglaucum)。 A.2 分布 欧洲:希腊,意大利,俄罗斯。 亚洲:孟加拉,柬埔寨,中国(安徽、甘肃、广东、广西、贵州、河北河南、湖北、湖南、江苏、江西、吉林、 辽宁、四川、台湾、云南、浙江),印度,印度尼西亚,日本,朝鲜,韩国,马来西亚,缅甸,尼泊尔,巴基斯坦, 菲律宾,塔吉克斯坦,泰国,乌兹别克斯坦,越南。 非洲:塞拉利昂。 中美洲加勒比海:洪都拉斯,古巴,尼加拉瓜,巴拿马,特立尼达和多巴哥。 北美洲:墨西哥,美国。 南美洲:阿根廷,巴西,圭亚那,苏里南,委内瑞拉。 大洋洲:澳大利亚,斐济,所罗门群岛。 3GB/T28079—2011 附 录 B (资料性附录) 席尔氏浮载剂的配制方法 B.1 麦克凡氏缓冲液 B.1.1 配制0.1mol/L的柠檬酸溶液 称取19.21g无水柠檬酸溶于1000mL蒸馏水中。 B.1.2 配制0.2mol/L的磷酸氢二钠溶液 称取28.40g无水磷酸氢二钠溶于1000mL蒸馏水中。 B.1.3 配制麦克凡氏缓冲液 取0.1mol/L的柠檬酸溶液5.5mL和0.2mol/L的磷酸氢二钠溶液194.5mL混合,即为pH8.0 的麦克凡氏缓冲液。 B.2 席尔氏浮载剂的配制 称取6g无水乙酸钾溶于300mL麦克凡氏缓冲液中,加甘油120mL和乙醇180mL混匀,即为席 尔氏浮载剂。 4GB/T28079—2011 附 录 C (规范性附录) 水稻稻粒黑粉病菌与近似种的冬孢子形态图 图C.1 水稻稻粒黑粉病菌Tilletiahorrida的冬孢子光学显微镜形态图(引自LoriM.C.等) 图C.2 小麦印度腥黑穗病菌Tilletiaindica的冬孢子光学显微镜形态图(引自LoriM.C.等) 5GB/T28079—2011 附 录 D (资料性附录) 水稻稻粒黑粉病菌与近似种的比较 表D.1 水稻稻粒黑粉病菌与近似种的比较 特征水稻稻粒黑粉病菌 Tilletiahorrida小麦印度腥黑穗病菌 Tilletiaindica黑麦草腥黑穗病菌 Tilletiawalkeri 冬孢子直径/μm范围 17~36 22~47 23~45 平均 24~28 35~41 30~31 冬孢子脊或刺顶弯曲、尖锐,成熟 孢子顶端平截或钝, 高1.5μm~4μm顶部偶尔弯曲,尖或 钝,高1.5μm~5.0μm顶部偶尔弯曲,锥 状、平截或钝,高 3μm~6μm 冬孢子形状 球形或近球形 球形或近球形 球形 冬孢子颜色 浅褐色至深褐色 红褐色、黑褐色至黑色 红褐色至黑褐色 寄主 水稻 小麦 黑麦草 6GB/T28079—2011