ICS65.020.01 B16 中华人民共和国国家标准 GB/T28069—2011 根螨检疫鉴定方法 Detectionandidentificationofbulbmites(Rhizoglyphusspp.) 2011-12-30发布 2012-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前　　言 　　本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位:福建农林大学、中华人民共和国福建出入境检验检疫局。 本标准主要起草人:范青海、陈艳、林阳武、苏秀霞。 ⅠGB/T28069—2011 根螨检疫鉴定方法 1　范围 本标准规定了根螨属螨类(Rhizoglyphusspp.)的检疫鉴定以雌、雄成螨的形态特征为鉴定依据; 明确了根螨属螨类现场检疫、实验室分离与饲养、标本制作、样品保存的方法。 本标准适用于蔬菜、花卉、中药材等根螨寄主植物球根、球茎、鳞茎及块茎中根螨的检疫鉴定。 2　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 颚体　gnathosoma 位于身体前端或前端腹面,由颚基和两对附肢即螯肢和须肢组成。 2.2 躯体　idiosoma 蜱螨颚体后方的体段,常以围颚沟与颚体分开,占身体的大部分,多呈囊状。 2.3 前足体　propodosoma 第一对和第二对足着生的体段。 2.4 后足体　metapodosoma 第三对和第四对足着生的体段。 2.5 格氏器　Grandjean’sorgan 粉螨前足体前侧缘形成的一环绕颚体基部的薄骨板,为指状或叉状等多种形状。 2.6 生殖吸盘　genitalpapillae 生殖区内小型杯状或盘状结构,偶尔具柄,位于生殖板上、生殖孔或散布于生殖孔两侧的体 壁上。 2.7 肛吸盘　analsuckers 粉螨等螨类的雄螨交配器,位于肛门两侧的一对大型吸盘。 2.8 跗节吸盘　tarsalsuckers 雄成螨特有特征。位于跗节Ⅳ,由跗节毛(d,e)特化而成的构造。 2.9 生殖褶　genitalfold 无气门螨类遮盖生殖孔的分叉形的褶。 1GB/T28069—2011 2.10 克氏器　Claparede’sorgan 仅发现于前幼螨和幼螨期的一种器官,位于前、中两足基节之间,具柄和半球形的端部,或呈凹陷状 结构。 3　根螨基本信息 根螨学名:Rhizoglyphusspp.。 英文名:bulbmites。 属蜱螨亚纲Acari、真螨总目Acariformes、疥螨目Sarcoptiformes、粉螨科Acaridae。 根螨各发育螨态都可随货物、土壤、包装材料以及运输工具远距离传播;近距离传播主要以休眠体 (第二若螨)附在昆虫等动作上或随真菌孢子等扩散。此外根螨本身可做小范围移动。 根螨寄主植物的相关资料参见附录A。 4　方法原理 显微镜观察检测获得的样本卵、幼螨、第一若螨、第二若螨(休眠体)或第三若螨和成螨等,依据形态 特征进行鉴定。 5　仪器、试剂 5.1　仪器与用具 放大镜、体视显微镜、生物显微镜(具油镜)、解剖刀、镊子、挑针、环形针、指形管、小培养皿、吸管、小 号驼毛笔、载玻片、盖玻片、电热板、干燥箱、贝氏漏斗(Berlesefunnel)、标签、铅笔、油漆笔。 5.2　试剂 除另有规定外,所有试剂均为分析纯。 5.2.1　奥氏液(Oudemans’fluid):液浸标本保存液。配方:70%乙醇87mL、冰醋酸8mL、甘油5mL。 5.2.2　内氏液(Nesbitt’sfluid):标本清洗、软化液,经过清洗的标本透明、舒展。配方:水合氯醛40g、 浓盐酸2.5mL、蒸馏水25mL。 5.2.3　霍氏液(Hoyer’smedium):玻片标本封固液。配方:水合氯醛100g、阿拉伯胶15g、甘油 10mL、蒸馏水25mL。 5.2.4　中性树胶(NeutralBalsam):玻片标本封片液。 6　现场检验 检查蔬菜、花卉、中药材等植物鳞茎、球茎、块茎、根茎和块根等表面有无腐烂、裂缝、伤口以及土壤, 肉眼或放大镜下若发现有乳白色囊状物,即有可能是根螨或粉螨科其他属的螨类,需要带回实验室做进 一步检查鉴定。 2GB/T28069—2011 7　实验室检测 7.1　检测方法 7.1.1　表面检测 在放大镜或体视显微镜下检查植物体表面,重点检查有病菌发生的腐烂组织以及有裂缝或伤口的 组织,借助解剖刀和挑针仔细检查,若有乳白色囊状物活动,需要调整显微镜放大倍数检查,确认是螨类 后,用挑针或驼毛笔挑入盛有奥氏液的指形管中,同时放入采集标签,并登记采集地点、时间、输出国家 或地区、寄主、采集人等内容。 7.1.2　贝氏漏斗分离 取待检植物活体、残片、土屑等放置于贝氏漏斗网上,漏斗下放置承接器皿,器皿内放少量清水,以 防螨逃逸或干死。用40W灯泡为热源,烘烤干燥24h,然后将承接器皿放在体视显微镜下检查,发现 螨类后,挑入盛有奥氏液的指形管,并做好标签和记录。 7.2　根螨的饲养 对无法确定种类的卵、幼螨、若螨,可将其放置在盛有酵母片的培养皿或指形管里,然后放于温度为 25℃~30℃、相对湿度90%以上的黑暗培养箱里饲养,同时做好饲养记录。数天至十多天后发育为成 螨,在体视显微镜下进行初步观察,制作成玻片标本,再进行鉴定。 7.3　标本制作 7.3.1　清洗 在体视显微镜下,用环形针将螨移入盛有内氏液的小培养皿中,浸泡24h。 7.3.2　制片 在载玻片上滴1滴~2滴的霍氏液。从内氏液中挑出根螨,触碰滤纸去除多余液体,然后放入霍氏 液,整姿后,盖上盖玻片,放在60W白炽灯或500W电热板上加热至气泡排出,用油漆笔在载玻片下方 标出螨体位置,并写明采集标签(见图1)。在低倍显微镜下检查、调整螨体位置,用40倍以下物镜进行 初步鉴定。 图1　玻片标本标签标注方法图示 7.3.3　玻片标本保藏 将玻片标本放在50℃左右干燥箱中干燥,1周后即可用于油镜(100倍)观察。干燥约3个月后,在 盖玻片周围封中性树胶,继续干燥1d~2d即可在常温下保存,也可置于干燥器中长期保存。 3GB/T28069—2011 7.4　镜检 在生物显微镜下观察玻片标本,种类鉴定需要在100倍油镜下观察、测量,必要时需要对关键特征 照相。 8　鉴定特征 8.1　成螨(参见图B.1~图B.4) 躯体长500μm~900μm,半透明,乳白色至浅褐色,足深褐色。前足体着生4对背毛和1对足Ⅰ基 节上毛,外顶毛(ve)微小,位于内顶毛(vi)后方、背板外缘。内胛毛(sci)显著短于外胛毛(sce)。基节上 毛(scx)光滑。后半体着生12对毛。生殖褶(genitalfolds)发达。跗节Ⅰ和跗节Ⅱ上近基毛(ba)粗壮, 靠近感棒(ω1)。跗节Ⅰ末端具4根长毛和1根长感棒(ω3)。跗节Ⅱ末端具4根长毛,跗节Ⅲ末端具 3根长毛;雌螨跗节Ⅳ末端具2根长毛,雄螨跗节Ⅳ末端具1根长毛。足毛序(Ⅰ~Ⅳ):基节1,0,2,1, 转节1,1,1,0,股节1,1,0,1,膝节2+2σ,2+1σ,1+1σ,0,胫节2+1φ,2+1φ,1+1φ,1+1φ,跗节8c+ 4t+3ω+1ε,8c+4t+1ω,7c+3t,8c+2t。 注:σ:膝节感棒;φ:胫节感棒;ω:跗节感棒;c:锥状毛;t:触毛。 雄螨生殖孔内有阳茎,肛孔后侧有1对肛吸盘,跗节Ⅳ具2个跗节吸盘。异型雄螨一侧或两侧的足 Ⅲ异常膨大,末端钩状[参见图B.4b)]。 根螨属各发育期螨态鉴定可参照附录C。 中国根螨属雌、雄成螨分类鉴定可参照附录D和附录E。 8.2　第三若螨[参见图B.5a)] 躯体囊状,有两对生殖吸盘,足毛序与雌成螨相同。但无生殖褶,肛毛短。 8.3　休眠体(亦称第二若螨)[参见图B.5d),图B.5e)] 躯体扁平,深褐色,强骨化。颚体微小,螯肢完全退化。除vi和h2外,其他背毛均微小。基节上毛scx 位于腹面。无生殖褶,有两对生殖吸盘,肛区有4对吸盘。跗节Ⅰ感棒ω3缺如,近基毛ba棒状。膝节 感棒σ″缺如。足毛序(Ⅰ~Ⅳ):基节1,0,2,1,转节1,1,1,0,股节1,1,0,1,膝节2+1σ,2+1σ,1σ,0,胫节 2+1φ,2+1φ,1+1φ,1+1φ,跗节1c+8t+2ω+1ε,1c+8t+1ω,8t,1c+7t。 8.4　第一若螨[参见图B.5b)] 躯体囊状,乳白色,足褐色。腹毛3a和4a缺如。无生殖褶,有一对生殖吸盘。跗节Ⅰ感棒ω3缺 如,转节Ⅳ和胫节Ⅳ无毛。足毛序(Ⅰ~Ⅳ):基节1,0,1,0,转节0,0,0,0,股节1,1,0,0,膝节2+2σ, 2+1σ,1+1σ,0,胫节2+1φ,2+1φ,1+1φ,1+1φ,跗节8c+4t+2ω+1ε,8c+4t+1ω,7c+3t,7c+1t。 8.5　幼螨[参见图B.5c)] 躯体囊状,乳白色,足颜色随着发育逐渐加深。背毛f2和h3缺如,腹毛3a和4a缺如。基节Ⅰ和 Ⅱ间有克氏器(Claparèdeorgan)。无生殖孔、生殖毛、生殖吸盘、肛毛。只有三对足,跗节Ⅰ感棒ω2和 ω3缺如。足毛序(Ⅰ~Ⅳ):基节0,0,0,转节0,0,0,股节1,1,0,膝节2+2σ,2+1σ,1+1σ,胫节2+1φ, 2+1φ,1+1φ,跗节8c+4t+1ω+1ε,8c+4t+1ω,7c+3t。 9　结果判定 以成螨的形态特征为依据。外顶毛(ve)极小并且位于内顶毛(vi)后方、前足体背板外缘,内胛毛 4GB/T28069—2011 (sci)显著短于外胛毛(sce),后半体着生12对毛,跗节Ⅰ和跗节Ⅱ上近基毛(ba)粗壮,靠