ICS71.100.70 Y42 中华人民共和国国家标准 GB/T27577—2011 化 妆品中维生素B5(泛酸)及维生素原B5 (D-泛醇)的测定 高效液相色谱紫外 检测法和高效液相色谱串联质谱法 DeterminationofvitaminB5(pantothenicacid)andprovitaminB5(D-fantothenol) incosmetics—HPLC/UVandHPLCMS/MS 2011-12-05发布 2012-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口。 本标准起草单位:大连市产品质量监督检验所(国家日化产品质量监督检验中心)、上海市日用化学 工业研究所(国家香料香精化妆品质量监督检验中心)、大连标准检测技术研究中心。 本标准主要起草人:毛希琴、胡侠、潘炜、郑顺利、李鹏、李琼。 ⅠGB/T27577—2011 化妆品中维生素B5(泛酸)及维生素原B5 (D-泛醇)的测定 高效液相色谱紫外 检测法和高效液相色谱串联质谱法 1 范围 本标准规定了化妆品中维生素B5(泛酸)及维生素原B5(D-泛醇)测定的高效液相色谱紫外检测法 和高效液相色谱串联质谱法两种方法。 本标准适用于化妆品中维生素B5(泛酸)及维生素原B5(D-泛醇)的定量测定,高效液相色谱紫外检 测法对泛酸、D-泛醇的检出限为30μg/g,定量限为100μg/g。高效液相色谱串联质谱法对泛酸、D-泛 醇的检出限为30ng/g;定量限为100ng/g。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6379.1 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分:总则与定义 GB/T6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分:确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 在水和与水不互溶的有机溶剂(如三氯甲烷或异辛烷等)形成的双液相体系中,维生素B5(泛酸及 其盐类(如泛酸钠及泛酸钙))和维生素原B5(D-泛醇)均分布于水相,化妆品中油溶性成分易溶于有机 相,而化妆品中的表面活性剂则富集于油水界面处。利用双液相体系可将维生素B5和维生素原B5与 化妆品中油溶性成分及表面活性剂初步分离,亚铁氰化钾-醋酸锌共沉淀剂去除提取液中的大分子基 质。在酸性条件下将泛酸和D-泛醇富集于固相萃取C18固定相上,脱除其他水溶性干扰物后,用40%甲 醇水溶液洗脱,用反相高效液相色谱分离,紫外检测器或串联四级杆质谱检测,标准曲线外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明,所用水为GB/T6682中规定的一级水。 4.1 标准物质英文名称、CAS号、分子式、分子结构式、相对分子质量、纯度见表1。 4.2 甲醇:色谱纯。 4.3 甲醇:分析纯。 4.4 甲酸:分析纯。 4.5 甲酸:色谱纯。 1GB/T27577—2011 表1 标准物质英文名称、CAS号、分子式、分子结构式、相对分子质量、纯度 化合物 名称英文名称 CAS号 分子式 分子结构式相对分子 质量纯度 泛酸pantothenicacid 79-83-4 C9H17NO5 219.23 泛酸钠sodiumpantothenate867-81-2C9H16NNaO5 241.22 泛酸钙calciumpantothenate137-08-6C18H32CaN2O10 476.53 D-泛醇 D-panthenol 81-13-0 C9H19NO4 205.25>99% 4.6 三氯甲烷:分析纯。 4.7 乙酸丁酯:分析纯。 4.8 异辛烷:分析纯。 4.9 0.2mol/L甲酸:移取3.8mL甲酸(4.4),用水稀释定容至500mL。 4.10 0.1mol/L甲酸:移取1.9mL甲酸(4.4),用水稀释定容至500mL。 4.11 醋酸锌溶液:称取21.9gC4H6O4Zn·2H2O(分析纯),用0.2mol/L甲酸(4.9)溶解并定容至 100mL。 4.12 亚铁氰化钾溶液:称取10.6gK4Fe(CN)6·3H2O(分析纯),用水溶解并定容至100mL。 4.13 乙酸丁酯-三氯甲烷混合溶剂:乙酸丁酯(4.7)∶三氯甲烷(4.6)体积比(1+1)。 4.14 40%甲醇水溶液:甲醇(4.3)∶蒸馏水体积比(2+3)。 4.15 C18固相萃取小柱:200mg/3mL,使用前,依次用3mL甲醇(4.3)、3mL蒸馏水进行活化。 4.16 一次性针式样品过滤器:0.2μm,尼龙膜。 4.17 标准储备溶液:分别准确称取标准物质泛酸1.0g(或1.1g泛酸钠或者泛酸钙,折合为泛酸 1.0g)和D-泛醇1.0g(以上质量均精确至0.1mg),用蒸馏水溶解定容至25mL,配置成浓度为 40mg/mL的标准储备液于4℃~6℃条件下保存。 4.18 系列标准溶液A:首先将泛酸和D-泛醇标准储备液(4.17)等体积混合配置成泛酸和D-泛醇浓度 均为20mg/mL的溶液,然后用蒸馏水稀释配置成泛酸和泛醇浓度均分别为1μg/mL、10μg/mL、 50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、800μg/mL、1000μg/mL的系列标准混合溶液于 4℃~6℃条件下保存(适用于高效液相色谱紫外检测法)。 4.19 系列标准溶液B:用蒸馏水稀释泛酸和D-泛醇浓度均为100μg/mL的标准溶液(4.18),配置成 泛酸和D-泛醇浓度均分别为1μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、400μg/L、800μg/L和 1000μg/L的系列标准溶液于4℃~6℃条件下保存(适用于高效液相色谱串联质谱法)。 2GB/T27577—2011 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪紫外检测器(高效液相色谱紫外检测法)。 5.2 高效液相色谱仪串联四级杆质谱(ESI源)(高效液相色谱串联质谱法)。 5.3 分析天平:感量0.1mg,0.01mg。 5.4 氮吹仪。 5.5 漩涡混合器。 5.6 超声波清洗器。 5.7 离心机:转速不小于5000r/min,离心试管容量15mL。 5.8 移液枪或移液器。 6 试样制备 6.1 化妆水、乳液、中性及弱油性膏霜等水易分散的化妆品样品的制备 称取0.2g样品(精确至0.01g)于15mL具塞塑料离心管中,50℃条件下氮吹,尽量除去样品中的 水分。向离心管中加入3.6mL0.1mol/L甲酸(4.10)及200μL醋酸锌溶液(4.11),涡旋混合使样品 均匀分散,然后向溶液中准确添加200μL亚铁氰化钾溶液(4.12),震荡摇匀,向离心管中加入3mL三 氯甲烷(4.6),涡旋混合2min,然后于5000r/min离心5min~20min。 准确移取2mL上层溶液过C18固相萃取小柱(4.15),1mL0.1mol/L甲酸(4.10)淋洗柱床后,在 小柱出口处放置2mL小试剂瓶,准确添加1mL40%甲醇水溶液(4.14)淋洗柱床,收集流出溶液,涡旋 混合,待测。 6.2 油性膏霜、油剂类化妆品等水不易分散的化妆品样品的制备 称取0.2g样品(精确至0.01g)于15mL具塞塑料离心管中,先向离心管中加入2mL三氯甲烷 (4.6),涡旋混合至样品均匀分散后,再向离心管中准确加入3.6mL0.1mol/L甲酸(4.10)及200μL 醋酸锌溶液(4.11),涡旋混合2min后,继续向离心管中准确加入200μL亚铁氰化钾溶液(4.12),涡旋 混合后,于5000r/min离心5min~20min。 余下步骤与6.1相同。 6.3 唇膏、唇彩、发蜡等蜡基化妆品样品的制备 称取0.2g样品(精确至0.01g)于15mL具塞塑料离心管中,向离心管中加入2mL异辛烷 (4.8),涡旋,若样品不能够完全分散,需将离心管置于80℃水浴中5min,待样品完全融化后,向离心 管中准确加入3.6mL0.1mol/L甲酸(4.10)(80℃水浴预热)及200μL醋酸锌溶液(4.11),涡旋 1min后,将离心管重新置于80℃水浴平衡5min,取出再涡旋1min。待冷却后,向溶液中准确添加 200μL亚铁氰化钾溶液(4.12)及2mL三氯甲烷(4.6),震荡摇匀,必要时于5000r/min离心5min~ 20min。若样品能够完全分散,则无需水浴加热,直接向离心管中准确加入3.6mL0.1mol/L甲酸 (4.10)(80℃水浴预热)及200μL醋酸锌溶液(4.11),涡旋2min,然后向溶液中准确添加200μL亚铁 氰化钾溶液(4.12),涡旋混合。必要时于5000r/min离心5min~20min。 余下步骤与6.1相同。 6.4 指甲油样品的制备 称取0.2g样品(精确至0.01g)于15mL具塞塑料离心管中,向离心管中加入2mL乙酸丁酯-三 3GB/T27577—2011 氯甲烷混合溶剂(4.13),涡旋混合至样品完全溶解并均匀分散,再向离心管中准确加入3.6mL 0.1mol/L甲酸(4.10)及200μL醋酸锌溶液(4.11),涡旋混合2min后,再向溶液中准确添加200μL 亚铁氰化钾溶液(4.12),涡旋混合。必要时于5000r/min离心5min~20min。 余下步骤与6.1相同