书 书 书犐犆犛 ６７ ． １２０ 犡 ０４ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２１３１０ — ２００７ 动物源性食品中甲状腺拮抗剂残留量 检测方法 　 高效液相色谱 ／ 串联质谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狉犲狊犻犱狌犲狊狅犳狋犺狔狉犲狅狊狋犪狋狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀 — 犎犘犔犆犕犛 ／ 犕犛犿犲狋犺狅犱 ２００７  １０  ２９ 发布 ２００８  ０４  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 、 附录 Ｂ 、 附录 Ｃ 均为资料性附录 。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出 。 本标准由国家认证认可监督管理委员会归口 。 本标准起草单位 ： 中国检验检疫科学研究院 、 中华人民共和国山东出入境检验检疫局 。 本标准主要起草人 ： 彭涛 、 于静 、 国伟 、 李晓娟 、 孙利 、 凌云 、 代汉慧 、 张鸿伟 、 储晓刚 、 唐英章 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２１３１０ — ２００７ 动物源性食品中甲状腺拮抗剂残留量 检测方法 　 高效液相色谱 ／ 串联质谱法 １ 　 范围 本标准规定了动物源性食品中硫脲嘧啶 （ ２ｔｈｉｏｕｒａｃｉｌ ， ＴＵ ）、 甲巯咪唑 （ ｍｅｔｈｉｍａｚｏｌｅ ， ＴＡＰ ）、 甲基 硫氧嘧啶 （ ｍｅｔｈｙｌｔｈｉｏｕｒａｃｉｌ ， ＭＴＵ ）、 丙硫氧嘧啶 （ ｐｒｏｐｙｌｔｈｉｏｕｒａｃｉｌ ， ＰＴＵ ）、 苯基硫氧嘧啶 （ ｐｈｅｎｙｌｔｈｉ ｏｕｒａｃｉｌ ， ＰｈＴＵ ）、 ２ 巯基苯并咪唑 （ ２ｍｅｒｃａｐｔｏｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｅ ， ＭＢＩ ） 残留量高效液相色谱 ／ 串联质谱测定 方法 。 本标准适用于动物源性食品肌肉 （ 兔肉 、 鸡肉 、 牛肉 、 猪肉 ）、 内脏 （ 兔肝 、 鸡肝 ）、 奶和蛋中硫脲嘧啶 、 甲巯咪唑 、 甲基硫氧嘧啶 、 丙硫氧嘧啶 、 苯基硫氧嘧啶 、 ２ 巯基苯并咪唑残留量的定性确证和定量测定 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 （ ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — １９９２ ， ｎｅｑＩＳＯ３６９６ ： １９８７ ） ３ 　 方法提要 采用乙酸乙酯提取试样中残留的硫脲嘧啶 、 甲巯咪唑 、 甲基硫氧嘧啶 、 丙硫氧嘧啶 、 苯基硫氧嘧啶和 ２ 巯基苯并咪唑 ， 提取液经液液分配和 ＨＬＢ 固相萃取柱净化后 ， 采用高效液相色谱 ／ 串联质谱定性检 测 ， 内标法定量 。 ４ 　 试剂和材料 除非另有说明 ， 所有试剂均为分析纯 ， 水为 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 规定的一级水 。 ４ ． １ 　 甲醇 ： 高效液相色谱级 。 ４ ． ２ 　 甲酸 ： 高效液相色谱级 。 ４ ． ３ 　 乙酸乙酯 ： 高效液相色谱级 。 ４ ． ４ 　 正己烷 ： 高效液相色谱级 。 ４ ． ５ 　 乙腈 ： 高效液相色谱级 。 ４ ． ６ 　 磷酸 。 ４ ． ７ 　 巯基乙醇 。 ４ ． ８ 　 二水乙二胺四乙酸二钠 。 ４ ． ９ 　 无水硫酸钠 ： ６５０℃ 灼烧 ４ｈ ， 置于干燥器中备用 。 ４ ． １０ 　 ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 乙二胺四乙酸二钠溶液 ： 准确称取 ３７．２ｇ 二水乙二胺四乙酸二钠 （ ４．８ ）， 用水溶解并 定容至 １Ｌ 。 ４ ． １１ 　 乙腈饱和的正己烷 ： 量取正己烷 ８０ｍＬ 于 １００ｍＬ 分液漏斗中 ， 加入适量乙腈后 ， 剧烈振摇 ， 待分 配平衡后 ， 弃去乙腈层 。 ４ ． １２ 　 ０．１％ 甲酸水溶液 ： 准确量取 １ｍＬ 甲酸 （ ４．２ ）， 用水定容至 １Ｌ 。 ４ ． １３ 　 ０．００２５ｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸 ： 准确量取 ０．２ｍＬ 磷酸 ， 用水定容至 １Ｌ 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２１３１０ — ２００７ ４ ． １４ 　 溶解液 ： ９０ｍＬ０．１％ 甲酸水溶液 （ ４．１２ ） 中加入 １０ｍＬ 甲醇 。 ４ ． １５ 　 标准物质 ： 硫脲嘧啶 、 甲巯咪唑 、 甲基硫氧嘧啶 、 丙硫氧嘧啶 、 苯基硫氧嘧啶 、 ２ 巯基苯并咪唑 ， 纯 度均 ≥ ９９％ 。 ４ ． １６ 　 内标物质 ： ５ ， ６ 二甲基硫氧嘧啶 （ ５ ， ６ｄｉｍｅｔｈｙｌ２ｔｈｉｏｕｒａｃｉｌ ， ＤＭＴＵ ）， 纯度 ≥ ９９％ 。 ４ ． １７ 　 标准储备溶液 ： 准确称取适量标准品 （ 精确至 ０．０００１ｇ ）， 用甲醇溶解 ， 配制成浓度为 １００ μ ｇ ／ ｍＬ 的标准储备溶液 ， －１８℃ 冷冻避光保存 ， 有效期 ３ 个月 。 ４ ． １８ 　 混合中间标准溶液 ： 准确移取标准储备液 （ ４．１７ ） 各 １ｍＬ 于 １０ｍＬ 容量瓶中 ， 用甲醇定容至刻 度 ， 配制成浓度为 １０ μ ｇ ／ ｍＬ 的混合中间标准溶液 ， ４℃ 冷藏避光保存 ， 有效期 １ 个月 。 ４ ． １９ 　 混合标准工作溶液 ： 根据需要用甲醇把混合中间标准溶液 （ ４．１８ ） 稀释成适合浓度的混合标准工 作溶液 ， 现用现配 。 ４ ． ２０ 　 内标标准储备液 ： 准确称取适量 ５ ， ６ 二甲基硫氧嘧啶 （ 精确至 ０．０００１ｇ ）， 用甲醇溶解 ， 配制成浓 度为 １００ μ ｇ ／ ｍＬ 的内标标准储备溶液 ， －１８℃ 冷冻避光保存 ， 有效期 ３ 个月 。 ４ ． ２１ 　 内标标准工作溶液 ： 准确移取 ０．１ｍＬ 内标标准储备液 （ ４．２０ ） 于 １０ｍＬ 容量瓶中 ， 用甲醇定容至 刻度 ， 配制成浓度为 １ μ ｇ ／ ｍＬ 的内标标准工作溶液 ， ４℃ 冷藏避光保存 ， 有效期 １ 个月 。 ４ ． ２２ 　 ＨＬＢ 固相萃取柱 ： ２００ｍｇ ， ６ｍＬ ， 或相当者 。 ４ ． ２３ 　 微孔滤膜 ： ０．２０ μ ｍ ， 有机相 。 ４ ． ２４ 　 氮气 ： 纯度 ≥ ９９．９９９％ 。 ４ ． ２５ 　 氩气 ： 纯度 ≥ ９９．９９９％ 。 ５ 　 仪器和设备 ５ ． １ 　 液相色谱 ／ 串联质谱仪 ： 配备电喷雾离子源 （ ＥＳＩ ）。 ５ ． ２ 　 组织捣碎机 。 ５ ． ３ 　 分析天平 ： 感量 ０．０００１ｇ ， ０．０１ｇ 。 ５ ． ４ 　 均质器 ： １００００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ５ ． ５ 　 振荡器 。 ５ ． ６ 　 离心机 ： １００００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ５ ． ７ 　 氮吹仪 。 ５ ． ８ 　 旋涡混合器 。 ５ ． ９ 　 超声波水浴 。 ５ ． １０ 　 减压浓缩仪 。 ５ ． １１ 　 梨形瓶 ： １００ｍＬ 。 ５ ． １２ 　 具塞塑料离心管 ： ５０ｍＬ 。 ５ ． １３ 　 刻度试管 ： １０ｍＬ 。 ５ ． １４ 　 移液枪 ： ５ｍＬ ， １ｍＬ ， ２００ μ Ｌ 。 ５ ． １５ 　 分液漏斗 ： ５０ｍＬ 。 ６ 　 试样制备 ６ ． １ 　 肌肉和内脏 从原始样品取出有代表性样品约 ５００ｇ ， 用组织捣碎机充分捣碎混匀 ， 均分成两份 ， 分别装入洁净容 器作为试样 ， 密封 ， 并标明标记 。 将试样置于 －１８℃ 冷冻避光保存 。 ６ ． ２ 　 奶 从原始样品取出有代表性样品约 ５００ｇ ， 充分搅拌混匀 ， 均分成两份 ， 分别装入洁净容器作为试样 ， 密封 ， 并标明标记 。 将试样置于 ４℃ 冷藏避光保存 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ２１３１０ — ２００７ ６ ． ３ 　 蛋 从原始样品取出有代表性样品约 ５００ｇ ， 去壳后用组织捣碎机搅拌充分混匀 ， 均分成两份 ， 分别装入 洁净容器作为试样 ， 密封 ， 并标明标记 。 将试样置于 ４℃ 冷藏避光保存 。 注 ： 在制样的操作过程中 ， 应防止样品污染或残留物含量发生变化 。 ７ 　 样品处理 ７ ． １ 　 提取 称取约 ５ｇ 试样 （ 精确至 ０．０１ｇ ） 于 ５０ｍＬ 塑料离心管中 ， 依次加入 １５０ μ Ｌ 内标标准工作液 （ ４．２１ ）、 ５０ μ Ｌ 巯基乙醇 （ ４．７ ）、 ３０ μ Ｌ０．１ｍｏＬ ／ Ｌ 的乙二胺四乙酸二钠溶液 （ ４．１０ ） 和适量无水硫酸钠 （ ４．９ ）， 吸去样品中的水分 ， 再加入 ２０ｍＬ 乙酸乙酯 ， 用均质器以 １００００ｒ ／ ｍｉｎ 均质 １ｍｉｎ 后 ， 振荡提取 ２０ｍｉｎ ， 再以 ４０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 ５ｍｉｎ ， 收集上清液于 １００ｍＬ 梨形瓶中 。 残渣用 ２０ｍＬ 乙酸乙酯再提取 一次 ， 合并上清液 ， 在 ４０℃ 水浴中减压浓缩至近干 。 残留物用 １０ｍＬ 乙腈溶解 ， 并转移至 ５０ｍＬ 分液 漏斗中 ， 用 ３０ｍＬ 乙腈饱和后的正己烷 （ ４．１１ ） 分三次液液分配 ， 去除油脂 。 收集乙腈层 ， 在 ４０℃ 水浴中 减压浓缩至近干 ， 残留物用 １０ｍＬ０．００２５ｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸 （ ４．１３ ） 溶解 ， 超声波水浴助溶 ５ｍｉｎ 后 ， 待净化 。 ７ ． ２ 　 净化 ＨＬＢ 固相萃取柱依次用 ５ｍＬ 甲醇 、 ５ｍＬ 水预淋洗