ICS65.120 CCSB46 中华人民共和国国家标准 GB/T21037—2024 代替GB/T21037—2007 饲料中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶和 二甲氧甲基苄氨嘧啶的测定 Determinationofdiaveridine,trimethoprimandormetopriminfeeds 2024-03-15发布 2024-10-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T21037—2007《饲料中三甲氧苄胺嘧啶的测定 高效液相色谱法》,与 GB/T21037—2007相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 增加了二甲氧苄氨嘧啶和二甲氧甲基苄氨嘧啶的测定方法(见第1章); b) 适用范围中增加了精料补充料和动物源性饲料原料(见第1章); c) 更改了检出限和定量限(见第1章,2007年版的第1章); d) 增加了液相色谱-串联质谱法(见第4章); e) 更改了原理(见5.1,2007年版的第3章); f) 更改了试验步骤(见5.5,2007年版的第7章); g) 更改了精密度(见5.7,2007年版的第9章)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。 本文件起草单位:四川威尔检测技术股份有限公司、山东省畜产品质量安全中心、通威农业发展有 限公司。 本文件主要起草人:张凤枰、王鑫、李俊玲、唐华英、孙延军、杜雪莉、杨发树、张璐。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2007年首次发布为GB/T21037—2007; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T21037—2024 饲料中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶和 二甲氧甲基苄氨嘧啶的测定 1 范围 本文件描述了饲料中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶和二甲氧甲基苄氨嘧啶的液相色谱-串联质 谱和高效液相色谱测定方法。 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料和动物源性饲料原料中二甲氧 苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶和二甲氧甲基苄氨嘧啶的测定。 本文件液相色谱-串联质谱法的检出限为2.5μg/kg,定量限为5.0μg/kg;高效液相色谱法的检出 限为0.25mg/kg,定量限为0.50mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 液相色谱-串联质谱法(仲裁法) 4.1 原理 试样中的待测物在弱碱性条件下用乙酸乙酯提取、正己烷脱脂,混合型强阳离子交换小柱净化,液 相色谱-串联质谱仪测定,内标法定量。 4.2 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 4.2.1 水:GB/T6682,一级。 4.2.2 甲醇:色谱纯。 4.2.3 乙腈:色谱纯。 4.2.4 甲酸:色谱纯。 4.2.5 乙酸铵:色谱纯。 4.2.6 氨水。 1GB/T21037—2024 4.2.7 乙酸乙酯。 4.2.8 乙酸钠溶液(82g/L):称取8.2g乙酸钠,用水溶解,转移至100mL容量瓶中,定容,混匀。 4.2.9 5%乙酸溶液:移取5mL冰乙酸于100mL容量瓶中,用水稀释、定容,混匀。 4.2.10 1%乙酸-乙腈溶液:移取1mL冰乙酸于100mL容量瓶中,用乙腈(4.2.3)稀释、定容,混匀。 4.2.11 乙腈-5%乙酸溶液:移取10mL乙腈(4.2.3)于100mL容量瓶中,用5%乙酸溶液(4.2.9)稀释、 定容,混匀。 4.2.12 正己烷乙腈饱和溶液:量取80mL正己烷于100mL分液漏斗中,加入10mL乙腈(4.2.3) 后,剧烈振摇5min,静置分层后,弃去乙腈层。 4.2.13 8%氨水-甲醇溶液:量取50mL甲醇(4.2.2)于100mL容量瓶中,再加入8mL氨水(4.2.6),用 甲醇稀释、定容,混匀。 4.2.14 0.2%甲酸溶液:量取500mL水于1000mL容量瓶中,加入2mL甲酸(4.2.4),用水稀释、定 容,混匀。 4.2.15 乙酸铵-0.2%甲酸溶液:称取0.154g乙酸铵(4.2.5),用0.2%甲酸溶液(4.2.14)溶解,转移至 1000mL容量瓶,定容,混匀。 4.2.16 复溶液:移取150mL乙腈(4.2.3)于1000mL容量瓶中,用乙酸铵-0.2%甲酸溶液(4.2.15)定 容,混匀。 4.2.17 标准储备溶液(1mg/mL):称取二甲氧苄氨嘧啶(CAS:5355-16-8,纯度不低于98%)、三甲氧 苄氨嘧啶(CAS:738-70-5,纯度不低于98%)和二甲氧甲基苄氨嘧啶(CAS:6981-18-6,纯度不低于 98%)标准品各10mg(精确至0.01mg),分别置于10mL容量瓶中,用1%乙酸-乙腈溶液(4.2.10)溶 解、定容,混匀。-18℃以下贮存,有效期6个月。 4.2.18 混合标准中间溶液Ⅰ(10μg/mL):分别准确移取二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶和二甲氧甲 基苄氨嘧啶标准储备溶液(4.2.17)各1mL于100mL容量瓶中,用1%乙酸-乙腈溶液(4.2.10)稀释、定 容,混匀。-18℃以下贮存,有效期3个月。 4.2.19 混合标准中间溶液Ⅱ(1μg/mL):准确移取1mL混合标准中间溶液Ⅰ(4.2.18)于10mL容量 瓶中,用1%乙酸-乙腈溶液(4.2.10)稀释、定容,混匀。临用现配。 4.2.20 内标标准储备溶液(1mg/mL):称取d9-三甲氧苄氨嘧啶(CAS:1189460-62-5,纯度不低于 98%)标准品10mg(精确至0.01mg)于10mL容量瓶中,用1%乙酸-乙腈溶液(4.2.10)溶解、定容,混 匀。-18℃以下贮存,有效期6个月。 4.2.21 内标中间溶液(10μg/mL):准确移取1mL内标标准储备溶液(4.2.20)于100mL容量瓶中,用 1%乙酸-乙腈溶液(4.2.10)稀释、定容,混匀。-18℃以下贮存,有效期3个月。 4.2.22 内标工作溶液(1μg/mL):准确移取1mL内标中间溶液(4.2.21)于10mL容量瓶中,用1%乙 酸-乙腈溶液(4.2.10)稀释、定容,混匀。临用现配。 4.2.23 混合标准系列溶液:准确移取适量体积的混合标准中间溶液Ⅱ(4.2.19)及100μL内标工作溶 液(4.2.22)于10mL容量瓶中,用复溶液(4.2.16)稀释、定容,混匀,配制成质量浓度分别为0.5ng/mL、 1.0ng/mL、2.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL和内标质量浓度均为10ng/mL的混 合标准系列溶液。临用现配。 4.2.24 混合型强阳离子交换小柱:60mg/3mL,或性能相当者。 4.2.25 微孔滤膜:0.22μm,有机系。 4.3 仪器设备 4.3.1 液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源(ESI)。 2GB/T21037—2024 4.3.2 分析天平:精度为0.1mg、0.01mg。 4.3.3 涡旋混合器。 4.3.4 冷冻离心机:转速不低于10000r/min。 4.3.5 超声波清洗器。 4.3.6 固相萃取装置。 4.3.7 氮吹仪。 4.4 样品 按照GB/T20195规定制备试样,至少200g,粉碎使其全部过0.425mm试验筛,混合均匀,装入密 闭容器中,备用。 4.5 试验步骤 4.5.1 提取 平行做2份试验。称取试样约2g(精确至0.1mg),置于50mL离心管中,加入100μL内标工作 溶液(4.2.22)、10mL乙酸钠溶液(4.2.8)和0.5mL氨水(4.2.6),涡旋混合2min,准确加入10mL乙酸 乙酯(4.2.7),涡旋混合2min,超声提取10min(5min涡旋混合1次),于4℃下10000r/min离心 5min,移取上层有机相至另一50mL离心管中。再准确加入10mL乙酸乙酯(4.2.7)重复提取1次,合 并有机相,混匀。准确移取2mL有机相,50℃下氮气吹至近干,加入3mL乙腈-5%乙酸溶液(4.2.11) 溶解残渣,涡旋混合30s,再加入3mL正己烷乙腈饱和溶液(4.2.12),涡旋混合30s,于4℃下 10000r/min离心5min,弃去上层正己烷溶液,取全部下层溶液,备用。 注:若提取液乳化严重,弃去上层正己烷溶液后,用3mL正己烷乙腈饱和溶液(4.2.12)重复脱脂。 4.5.2 净化 混合型强阳离子交换小柱依次用3mL甲醇(4.2.2)、3mL乙腈-5%乙酸溶液(4.2.11)活化,取备用 液(4.5.1)全部过柱。分别用3mL乙腈-5%乙酸溶液(4.2.11)、3mL甲醇(4.2.2)淋洗,抽干后加入 5mL8%氨水-甲醇溶液(4.2.13)洗脱,收集洗脱液,50℃下氮气吹至近干,准确加入1mL复溶液 (4.2.16),涡旋混合30s,过微孔滤膜(4.2.25),滤液待测。 4.5.3 测定 4.5.3.1 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下: a) 色谱柱:C18柱,柱长50mm,内径2.1mm,粒径1.8μm,或性能相当者; b)