ICS 13.060.70 Z 16 陕 DB61 西 省 地 方 标 准 DB 61/T 1138—2018 水质 粪大肠菌群的测定 酶底物法 Water quality Determination of fecal coliforms 2018 - 04 - 12 发布 陕西省质量技术监督局 Enzyme substrate method 2018 - 05 - 12 实施 发 布 DB61/T 1138—2018 目  次 前  言............................................................................................................................................................... II 1 范围................................................................................................................................................................... 1 2 规范性引用文件............................................................................................................................................... 1 3 术语和定义....................................................................................................................................................... 1 4 方法原理........................................................................................................................................................... 1 5 试剂与材料....................................................................................................................................................... 1 6 仪器与设备....................................................................................................................................................... 2 7 样品................................................................................................................................................................... 2 8 分析步骤........................................................................................................................................................... 3 9 结果计算与表示............................................................................................................................................... 4 10 质量保证和质量控制..................................................................................................................................... 5 11 废物处理......................................................................................................................................................... 5 附录 A （资料性附录） 酶底物法培养基的基本成分................................................................................. 6 附录 B （规范性附录） 粪大肠菌群检数表..................................................................................................7 附录 C （规范性附录） 51 孔定量孔板 MPN 表.............................................................................................8 附录 D （规范性附录） 97 孔定量孔板 MPN 表.............................................................................................1 I DB61/T 1138—2018 前  言 本标准按照GB/T 1.1—2009和HJ 168—2010给出的规则起草。 本标准由陕西省环境监测中心站和陕西省环境保护厅提出。 本标准由陕西省环境保护厅归口。 本标准起草单位：陕西省环境监测中心站。 本标准主要起草人：许锋、张会强、刘敏、周弛、吴卫东、马文鹏、张秦铭、宁西翠、许伊蕾、张 静雪。 本标准由陕西省环境监测中心站负责解释。 本标准首次发布。 联系信息如下： 单位：陕西省环境监测中心站 电话：029-85429127 地址：陕西省西安市雁塔区西影路106号 邮编：710054 II DB61/T 1138—2018 水质 粪大肠菌群的测定 酶底物法 1 范围 本标准规定了水中粪大肠菌群测定的酶底物法的术语和定义、方法原理、试剂与材料、仪器与设 备、样品、分析步骤、结果计算与表示、质量保证和质量控制、废物处理的要求。 本标准适用于地表水、生活污水和废水中粪大肠菌群的测定。 当接种量为300mL时，方法的检出限为3MPN/L，检测范围为3MPN/L～230MPN/L；当接种量为100mL 时，方法的检出限为10MPN/L，采用51孔定量孔板的检测范围为10MPN/L～2005MPN/L，采用97孔定量孔 板的检测范围为10MPN/L～24196MPN/L。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5750.12 生活饮用水标准检验方法 微生物指标 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 粪大肠菌群 fecal coliforms 粪大肠菌群，又称耐热大肠菌群（thermotolerant coliforms）。是一种通常在44.5℃下培养发 酵乳糖产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 3.2 最可能数 most probable number；MPN 基于泊松分布的一种间接计数方法。 4 方法原理 粪大肠菌群在邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）培养基上培养产生β-D-半乳糖苷酶（β -D-galactosidase），该酶可以分解色源底物释放出黄色的邻硝基苯酚，通过颜色变化定性，MPN法定 量。 5 试剂与材料 1 DB61/T 1138—2018 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 中规定的一级水。 培养基选择市售商品化酶底物法试剂，或自行配制培养基，基本成分参照附录 A。 硫代硫酸钠（Na2S2O3）。 乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）。 氯化钠（NaCl）。 硫代硫酸钠溶液：ρ（Na2S2O3）＝0.10g/mL。 注：称取硫代硫酸钠（5.2）10g，适量水溶解，定容至100mL，临用现配。 5.7 乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）溶液：ρ（C10H14N2O8Na2·2H2O）＝0.15g/mL。 注：称取乙二胺四乙酸二钠（5.3）15g，适量水溶解，定容至100mL，摇匀，常温下可存放30d。 5.8 灭菌生理盐水:ρ（NaCl）=0.9%（m/v）。 注：称取氯化钠（5.4）0.9g，适量水溶解，定容至100mL，经121℃高压蒸汽灭菌20min，备用。 6 仪器与设备 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 6.10 6.11 6.12 6.13 6.14 7 采样瓶：500mL 棕色磨口玻璃瓶。 恒温培养箱：44.5℃±0.5℃。 高压蒸汽灭菌器：121℃、0.101Mpa。 冰箱：0℃～4℃。 恒温干燥箱：0℃～300℃。 程控定量封口机：带 51 孔和 97 孔胶托。 51 孔和 97 孔定量孔板：无菌。 100mL 无菌取样瓶。 试管：Φ15mm×150mm，带透气胶塞。 标准阳性比色盘。 移液管：1mL、10mL，也可采用体积可调式移液器。 锥形瓶：500mL。 量筒：100mL。 移液管、试管、量筒、采样瓶等均需包扎后经 121℃高压蒸汽灭菌 20min，备用。 样品 7.1 样品采集 7.