ICS 01.040.67 X 34 DB45 广 西 壮 族 自 治 区 地 方 标 准 DB45/T 2143—2020 甘蔗叶中多糖的测定 苯酚-硫酸法 Determination of polysaccharide in sugar cane leaves—Phenol-sulfuric acid colorimetry 2020 - 07 - 24 发布 广西壮族自治区市场监督管理局 2020 - 08 - 20 实施 发 布 — DB45/T 2143 2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由广西壮族自治区糖业发展办公室提出并宣贯。 本标准由广西糖业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：广西中医药大学、广西大海阳光药业有限公司。 本标准主要起草人：侯小涛、邓家刚、郝二伟、杜正彩、秦健峰、黄大权、和顺利、何文然。 I — DB45/T 2143 2020 甘蔗叶中多糖的测定 苯酚-硫酸法 1 范围 本标准规定了甘蔗叶中多糖含量的测定方法：苯酚-硫酸法。 本标准适用于所有品种的甘蔗叶中多糖含量的测定。 本标准方法的检出限为0.5 mg/kg。 本标准方法的线性范围为0.01 mg/mL～0.06 mg/mL。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 甘蔗叶多糖 sugarcane leaf polysaccharide β α 甘蔗叶中以 -D-葡聚糖或 -D-葡聚糖或其他碳糖为主链的一系列高分子化合物。 4 方法提要 甘蔗叶多糖在浓硫酸的作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚反应生成橙黄 色溶液，在485 nm处有特征吸收，与标准系列比较定量。 5 试剂和材料 试验用水：试验用水应符合 GB/T 6682—2008 中三级水的规定。 硫酸（H SO ），分析纯，ρ=1.84 g/mL。 无水乙醇（C H OH），分析纯。 苯酚（C H O），分析纯，重蒸馏。 80％乙醇溶液。 D-无水葡萄糖（C H O ）对照品，使用前应于 105℃恒温烘干至恒重。 80％苯酚溶液：称取 80g 苯酚（5.4）于 100 mL 烧杯中，加水溶解，转移至 100 mL 棕色容量瓶中 并定容，摇匀后，置 4 ℃冰箱中储存备用。 5.8 5％苯酚溶液：吸取 5 mL 80％苯酚溶液（5.7），溶于 75 mL 水中，混匀，现用现配。 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 2 4 2 5 6 6 6 12 6 1 DB45/T 2143—2020 密 5.9 0.1 mg/mL 标准葡萄糖溶液：取 100 mg D-无水葡萄糖（5.6），精 称定，置于 500 mL 烧杯中， 加水溶解，转移至 1 000 mL 容量瓶中，摇匀后，置 4 ℃冰箱中储存备用。 6 仪器和设备 紫外 见 度计 天平 感 超声波 器 涡旋振荡器 离心机 r i 6.1 /可 分光光 。 6.2 分析 ， 量为 0.1 mg。 6.3 提取 。 6.4 。 6.5 ，4 000 /m n。 7 样品制备与保存 7.1 试样制备 将采回的甘蔗叶清洗干净除去泥沙等杂质，切成小段，置于恒温干燥箱中60 ℃干燥，粉碎后过60 目筛处理后，混合均匀。 7.2 样品保存 样 试 于-18 ℃以下冰箱 内保存。制样和样品保存过程中，应防止样品污染和待测物损失。 8 测定步骤 8.1 样品处理 样 粉末约 密 器 i 之 离心机 次 每次3 i 冷却 滤纸过滤 即得样 具塞锥形 料 :3 入 r i 离心 i 弃去上清 残渣 3次滤 到 超声 超声 3 刻度 取 品 1g，精 称定。置于100 mL 瓶中，按物 比1 0，加 无水乙醇，置 提 取 中提取40 m n， 后于 以4 000 /m n 10 m n， 液， 加50 mL水， 提取 ， 0 m n， 后用 ，合并 液，混匀后移取1 mL 25 mL容量瓶中，加水至 ， 摇匀， 品测定液。 8.2 绘制标准曲线 别 密 具塞 管 3 3 剂空白 参 度 纵坐 绘制 分 精 量取0.1 mg/mL的葡萄糖溶液（5.9）0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0. mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL置于 试 中， 加水 至1.0 mL后，分 加 1.0 mL 5％苯酚溶液（5.8）和 mL硫酸（5.2）， 混合后，置水 中 水加 10 m n， 至室温后，用试 作为 比溶液，用 /分光光 在485 nm处测定吸光 。以葡萄糖溶液的浓 为 标，吸光 为 标， 葡萄糖标准 线， 振荡 度计 8.3 比色测定 密 度平均值 样 各 补 别 入 浴锅 沸 热 i 冷却 度 度 横坐 样 与试 的测定 2 曲 具塞试管中，按步骤8.2操作，测定吸光度，重复3次，取吸光 精 吸取 品测定液1.00 mL于20 mL 。 8.4 空白试验 紫外 平行进行，取相同量的所有试剂，采用相同的分析步骤，但不加试样。 — DB45/T 2143 2020 9 结果计算 样品中多糖含量以质量分数ω计，单位以克每百克（g/100g）表示，按式（1）计算： ................................ (1) 式中： ρ ——比色测定的吸光值扣除空白试验值后，从标准曲线上查得样品测定液的浓度，单位为毫克每 毫升（mg/mL）； V ——样品测定液的体积，单位为毫升（mL）； V ——样品提取液的体积，单位为毫升（mL）； V ——配置样品测定液所用的样品提取液的体积，单位为毫升（mL）； m ——样品质量，单位为克（g）； 0.9——葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数。 1 2 3 注：计算结果保留至小数点后两位。 10 重复性 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。 3 中华人民共和国广西地方标准 甘蔗叶中多糖的测定 苯酚-硫酸法 DB 45/T 2143―2020 广西壮族自治区市场监督管理局统一印刷 版权专有 侵权必究