DB43/T2700—2023 43 湖 南 省 地 方 标 准ICS CCS 65.020.20 B 35 发 布 湖南省市场监督管理局羊肚菌液体发酵制种技术规程 Technical regulation for liquid fermentation of morchella strains 2023-08发布-22 2023-11实施-22 DB43/T 2700—2023 I 目 次 前言 ································ ································ ································ ·························· Ⅲ 1 范围 ································ ································ ································ ······················ 1 2 规范性引用文件 ································ ································ ································ ······· 1 3 术语和定义 ································ ································ ································ ············· 1 4 场地与设施 ································ ································ ································ ············· 1 5 液体菌种发酵 ································ ································ ································ ·········· 2 6 液体菌种转接 ································ ································ ································ ·········· 3 7 废弃物处理 ································ ································ ································ ············· 3 8 档案管理 ································ ································ ································ ················ 3 附录A（资料性） 羊肚菌摇瓶种培养基配方 ································ ································ ····· 4 附录B（资料性） 羊肚菌液体发酵培养基配方 ································ ································ ·· 5 附录C（资料性） 羊肚菌液体发酵制种档案 ································ ································ ····· 6 DB43/T 2700—2023 II DB43/T 2700—2023 III 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发 布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖南省农业农村厅提出。 本文件由湖南农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：湖南省微生物研究院、中南林业科技大学、湖南省产商品质量监督检验研究院、 益阳欣博农业发展有限公司、湖南湘蕈生物科技有限公司、常德市永春堂生物科技有限公司。 本文件主要起草人：许隽、范婷婷、钟文涛、杨迪、唐少军、马文华、任锐、贺月林、喻桃生、邵 晨霞、杨祎、朱华珺、马文杰。 DB43/T 2700—2023 IV DB43/T 2700—2023 1 羊肚菌液体发酵制种技术规程 1 范围 本文件规定了羊肚菌液体发酵制种的场地与设施设备、液体菌种发酵、液 体菌种转接、废弃物 处理、档案管理等技术要求。 本文件适用于湖南省内梯棱羊肚菌液体发酵制备栽培种。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 150.4 压力容器 第4部分：制造、检验和验收 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB/T 12728 食用菌术语 GB 50073 洁净厂房设计规范 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规 程 NY/T 1846 食用菌菌种检验规程 NY/T 1935 食用菌栽培基质质量安全要求 DB43/T 2326 桑黄液体菌种生产技术规程 DB43/T 2327 羊肚菌菌种质量检验规程 3 术语和定义 GB/T 12728 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 羊肚菌 morchella spp. 隶属子囊菌门（ Ascomycota ） 、盘菌纲（ Discomycetes ） 、盘菌目（ Pezizales ） 、羊肚菌科 （Morchellaceae ） 、羊肚菌属（ Morchella ） ，因其外表凹陷状似羊肚 而得名。 4 场地与设施设备 4.1 场地环境 液体发酵制种场地环境条件应符合 NY/T 528 的规定，生产用水应符合 GB 5749的规定。 4.2 设施设备 厂房应符合 GB 50073 的规定，压力容器应符合 GB/T 150.4 的规定。 DB43/T 2700—2023 2 5 液体菌种发酵 5.1 工艺流程 母种制备→摇瓶种制备→发酵罐准备→基质配制→灭菌→冷却→接种→发酵培养→菌种检测→菌 种保藏。 5.2 母种制备 母种制备应符合 NY/T 528 的规定。 5.3 摇瓶种制备 5.3.1 培养基 原料应符合 NY/T 1935 的规定，配方 参照附录 A。 5.3.2 装液量 采用1000 mL三角瓶，装液量为 300 mL～400 mL,用纱布和牛皮纸封口。 5.3.3 灭菌 采用高温高压灭菌，在 121 ℃～126 ℃，0.11 MPa ～0.16 MPa 条件下，保持 20 min～30 min。 5.3.4 接种 培养基冷却至常温，在无菌条件下将母种打孔成直径约 10 mm的菌丝块，每 100 mL液体培养基接 种3～5个菌丝块。 5.3.5 培养 在18 ℃条件下静置培养 2 d～3 d，待菌丝块萌发出白色菌丝体后，置于振荡培养箱， 120 r/min 振荡培养 4 d～5 d，即可培养出成熟的摇瓶菌种，菌种检测应符合 NY/T 1846 的规定。 5.4 发酵罐液体菌种制备 5.4.1 发酵罐准备 发酵罐检查、清洗和空消应符合 DB43/T 2326 的规定。 5.4.2 基质配制 原料应符合 NY/T 1935 的规定，配方参照附录 B，原料搅拌均匀后加入发酵罐，装液量不超过罐体 容量的70％为宜。 5.4.3 灭菌 当罐体压力达到 0.11 MPa ，温度达到 121 ℃以上，保持 40 min～60 min。 5.4.4 冷却 灭菌后将冷水通入发酵罐夹层循环降温，培养液温度降至 20℃以下。