ICS 65.020 CCS B61 43 湖南省 地方 标准 DB 43/T 2486—2022 灰毡毛忍冬组织培养育苗技术规程 Code of practice for propogation via tissue culture of Lonicera macranthoides Hand.-Mazz. 2022 - 12 - 09发布 2023 - 03 - 9实施 湖南省市场监督管理局 发布 DB 43/T 2486 —2022 I 目次 前言............................................................................... III 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 外植体采集 ........................................................................ 1 5 外植体处理 ........................................................................ 1 6 培养基制备 ........................................................................ 2 7 组织培养 .......................................................................... 2 8 移栽 .............................................................................. 3 9 容器苗培育 ........................................................................ 3 10 苗木出圃 ......................................................................... 4 11 档案管理 ......................................................................... 4 附录A（规范性） 灰毡毛忍冬组织培养培养基配方 ........................................ 6 DB 43/T 2486 —2022 III 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖南省农业农村厅提出。 本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：湖南省林业科学院、湖南中医药研究院、江苏省中国科学院植物研究所、隆回县 农业综合服务中心、 金陵药业股份有限公司、 溆浦县农业技术推广中心、 重庆市秀 山县中药材产业中心。 本文件主要起草人：王湘莹、王晓明、李永欣、蔡能、曾慧杰、陈艺、曾宏亮、陈雨、周融融、乔 中全、王昊、冯煦、王颖、李剑、朱勇、杨美森。 DB 43/T 2486 —2022 1 灰毡毛忍冬组织培养育苗技术规程 1 范围 本文件规定了灰毡毛忍冬（ Lonicera macranthoides Hand. -Mazz.）组织培养育苗技术的外植体 采集、外植体处理、培养基制备、组织培养、移栽、容器苗培育、苗木管理、苗木出圃、档案管理等要 求。 本文件适用于适用于灰毡毛忍冬组织培养育苗。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6001 育苗技术规程 LY/T 1000 容器育苗技术 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 毡毛忍冬 Lonicera macranthoides Hand.- Mazz. 为忍冬科忍冬属植物，俗称山银花、金银花。 壮苗培养 strong seedling culture 将增殖的丛芽分成单芽茎段接种到壮苗培养基上，使其生长粗壮。 4 外植体采集 采集时间 在3～4月晴天叶片表面露水干后采集外植体。 外植体选择 选择生长健壮、无病虫害的 3～5年生植株采集外植体。从当年生嫩枝上剪取带顶芽或腋芽的茎段， 留叶柄基部，去掉叶片。将采集的嫩枝低温保湿带回实验室，取嫩枝顶端 4 cm～6 cm作为外植体。 5 外植体处理 清洗 DB 43/T 2486 —2022 2 先用自来水冲洗外植体 3次～5次，每次 5 min～7 min，然后用软毛刷蘸中性洗洁精溶液轻轻刷洗， 再用流水冲洗外植体至洁净。 消毒 在超净台上将外植体在 75%酒精浸泡 10 s，无菌水冲洗 2次～3次，用0.1%升汞溶液（添加 2滴～3滴 吐温80）浸没外植体 5 min，无菌水冲洗 4次～5次，用灭菌滤纸吸干外植体表面 水分。 6 培养基制备 培养基配方 初代培养基、继代培养基、壮苗培养基与生根培养基的配方见规范性附录 A。 培养基配制、灭菌与保存 参照LY/T 1882 执行。 7 组织培养 培养条件 培养温度为 25 ℃±2 ℃，每天光照时间为 12 h，光照强度为 1 500 lx～2 000 lx 。 初代培养 将灭菌的外植体切成长 1.5 cm～2.5 cm带腋芽的小茎段，接种在初代培养基上，培养 30 d左右。 继代培养 7.3.1 初代转接 将初代培养诱导的萌芽切成长 2.0 cm～2.5 cm的茎段，接种在继代培养基上。 7.3.2 继代转接 将继代培养增殖的丛生芽按 2个～3个芽为一个单位分开，切去基部褐变的愈伤组织，接种在新的继 代培养基上。 7.3.3 继代周期 每隔25 d～30 d将继代苗转接到新的继代培养基，继代培养控制在 16代内。 7.3.4 增殖材料更新 增殖材料继代培养超过 16代或出现退化导致苗细弱时，重新采集外植体更新繁殖材料。 壮苗培养 将长2.0 cm～2.5 cm的继代苗接种在壮苗培养基上。 生根培养