ICS 65. 120 B 46 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 23883—2009 饲料中篦麻碱的测定 高效液相色谱法 Determination of ricinine in feeds- High performance liquid chromatography 2009-05-26发布 2009-10-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T23883—2009 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)提出并归口。 本标准起草单位：中国农业大学、农业部饲料效价与安全监督检验测试中心（北京）。 本标准主要起草人：王宗义、张丽英、杨文军、贺平丽、李冰颖。 GB/T23883—2009 饲料中篦麻碱的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定饲料中葩麻碱（化学名为3-氰基-4-甲氧基-N-甲基-2-吡啶酮， 分子式为CH.NzOz，摩尔质量为164.16g/mol)的方法。 本标准适用于葩麻粕、配合饲料和浓缩饲料中葩麻碱的测定 本法的检测限为5mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195动物饲料试样的制备 3原理 用甲醇提取试样中葩麻碱，经固相萃取净化，高效液相色谱分离，紫外检测，外标法定量。 4试剂和溶液 除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682二级用水规定。 4.1无水甲醇 4.2乙腈 色谱纯。 4.31%（体积分数）氨水溶液 移取1.0mL浓氨水溶液于100.0mL容量瓶中，用水定容至刻度。 4.430%（体积分数）的甲醇溶液 移取30mL甲醇于100.0mL容量瓶中，用水定容至刻度。 4.5葩麻碱标准品 纯度大于99%。 4.6葩麻碱标准溶液 4.6.1葩麻碱标准储备液：称取葩麻碱标准品适量，用甲醇溶解，配制成浓度为1.00mg/mL标准储备 液，于一18℃条件下储存。有效期为6个月。 4.6.2葩麻碱标准工作液I：用甲醇逐次稀释葩麻碱标准储备液至最终浓度分别为5.0μg/mL、 10μg/mL、20μg/mL30μg/mL和40μg/mL的标准工作液。有效期为30d。 4.6.3葩麻碱标准工作液I：用30%甲醇（4.4）逐次稀释储备液至最终浓度分别为0.5μg/mL、 2.0μg/mL、5.0μg/mL、10μg/mL和20μg/mL的标准工作液。有效期为30d。 5仪器与设备 5.1分析天平：感量为0.0001g。 1 GB/T238832009 5. 2 离心机：转速大于3000r/min。 5. 3 恒温水浴。 5.4涡旋振荡器。 5.5定量滤纸。 5.6 固相萃取小柱：亲水亲油平衡型聚合物填料，30mg，1mL，或性能相当者。 5.7 固相萃取装置。 5.8 氮吹仪。 5. 9 高效液相色谱仪：配有紫外检测器。 6试样制备 按照GB/T20195的规定制备试样，粉碎过孔径0.45mm目筛，充分混勾，装瓶，备用。 7测定步骤 7.1提取 准确称取篦麻粕试样0.5g（精确至0.0001g）或饲料试样5g（精确至0.001g）于50mL带螺口离 心管中，加20mL甲醇，紧盖子，于75℃水浴中提取4h（约每30min取出于涡旋振荡器上振荡 30s）。取出于离心机上以3000r/min离心10min，将上层清液通过带有定量滤纸的50mL漏斗过滤 于50mL容量瓶中，残渣再分别用20mL和10mL甲醇按上述方法提取10min，离心，合并提取液，最 后用无水甲醇定容至刻度。 对于葩麻试样，取上述提取液过0.45μm滤膜，可直接上机测定；饲料试样提取液则需作进一步 净化处理。 7.2净化 移取提取液（7.1)2.00mL于10mL试管中，于氮气吹干仪上吹干，加入2.00mL氨水溶液（4.3）， 于涡旋振荡器上振荡30.S。 将固相萃取柱（5.6）置于固相萃取装置上，依次用1.0mL甲醇和1.0mL水活化；加载1.00mL该 试样溶液，控制流速不超过1.0mL/min；用1.0mL水淋洗小柱，抽干1min；最后用1.00mL30%的甲 醇（4.4）洗脱，加压，完全收集洗脱液到进样瓶中。 7.3测定 7.3.1色谱条件 色谱柱：Cs填料，长150mm，内径3.9mm，粒度5μm，或相当者。 流动相：乙睛十水=10十90。 流速：1.0mL/min。 进样体积：20μL。 检测波长：308nm。 7.3.2定量方法 使用葩麻碱标准工作液I（4.6.2），以峰面积对浓度的工作曲线，对葩麻粕样品进行外标法定量；同 样使用葩麻碱标准工作液Ⅱ（4.6.3），以峰面积对浓度的工作曲线，对饲料样品进行外标法定量。葩麻 碱标准品的色谱图参见附录A。 8结果计算 试样中葩麻碱质量分数（mg/kg）按式（1）计算： 2 GB/T23883—2009 CXV ..·(1) m 式中： 为根据工作准曲线计算的上机试样溶液葩麻碱浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V一一为提取溶液体积，单位为毫升（mL)； m一一为试样质量，单位为克（g）。 测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。 9 重复性 在重复性条件下，完成两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。