ICS 67.040 X 04 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 23496—2009 食品中禁用物质的检测 碱性橙染料 高效液相色谱法 Determination of forbidden materials in foodsDyes of basic orange- High performance liquid chromatography method 2009-04-27发布 2009-08-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T23496—2009 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：湖北省产品质量监督检验研究院（国家饮料及粮油制品质量监督检验中心）。 本标准主要起草人：文红、朱宽正、张莉、王红、吕晓华、陈有武、范志勇、李涛。 GB/T23496—2009 食品中禁用物质的检测碱性橙染料 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了食品中禁用物质一一碱性橙染料的检测方法。 本标准适用于食品中禁用物质一一碱性橙染料的高效液相色谱法检测。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987.MOD） 3原理 样品经无水乙醇提取、浓缩、定容液定容后，用反相色谱柱分离、紫外检测器进行色谱分析测定。 4试剂和溶液 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682中一级水要求， 4.1无水乙酸铵，优级纯。 4.2无水硫酸钠。 4. 3 3正已烷。 4.4无水乙醇。 甲醇，色谱纯。 4.6 乙腈，色谱纯。 4.7 20mmol/L乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵溶于1000mL水中。 4.8定容液：取65ml甲醇加人35mL20mmol/L乙酸铵溶液中，混匀。 4. 9 标准品：碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22，纯度≥95%。 4.101.0mg/mL碱性橙染料标准储备溶液：分别称取100mg（精确至0.1mg）碱性橙2、碱性橙21、 碱性橙22，置于100mL容量瓶中，加无水甲醇溶解并定容至刻度，混匀，该溶液在4℃条件下避光保 存，有效期为1个月。 4.11碱性橙染料标准工作溶液（使用时配制） 4.11.10.1mg/mL碱性橙染料标准溶液A：准确移取10mL碱性橙染料标准储备溶液（4.10）于 100mL容量瓶中，用定容液定容至刻度，混匀。 4.11.2分别移取碱性橙染料标准溶液A（4.11.1）1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL、20.00mL 于100mL容量瓶中，用定容液定容至刻度，混匀。分别相当于1.00μg/ml、2.00μg/ml、5.00μg/mL、 10.00μg/mL、20.00μg/mL浓度标准溶液 5仪器与设备 SXIG 5.1高效液相色谱仪，附有紫外检测器。 1 GB/T23496—2009 5. 2 2天平：感量0.0001g和0.01g。 5. 3 超声波清洗仪。 5. 4 旋转蒸发仪。 5.5 离心机：3000r/min。 5.6氮吹仪。 5.7旋涡振荡器。 5.8电热板。 6分析步骤 6.1样品处理 6.1.1固体样品（如辣椒粉、豆制品等） 将样品粉碎混匀，称取20g（准确至0.01g）样品，置于50mL离心管中，加5g无水硫酸钠，25mL 无水乙醇超声提取30min，3000r/min，离心10min，将上层提取清液倾出置于离心管中，再次加人 10mL无水乙醇，重复提取3次，合并提取液，3000r/min，离心10min，将上层提取清液倾倒于圆底烧 液溶解并定容至2mL；经0.45μm滤膜过滤后待进样。 6.1.2液体样品 将样品混匀，称取20g（准确至0.01g）样品，置于100mL烧杯中，电热板上加热挥发至近干，用无 水乙醇溶解并转移到刻度试管中，在50℃条件下氮气吹干，用定容液溶解并定容至2mL；经0.45μm 滤膜过滤后待进样。 6.1.3含油样品 将样品混勾，称取20g（准确至0.01g）样品，置于50mL离心管中，加5g无水硫酸钠，25mL无水 乙醇超声提取30min，3000r/min，离心10min，将上层提取清液倾出置于离心管中，再次加入10ml 无水乙醇，重复提取3次，合并提取液，3000r/min，离心10min，将上层提取清液倾倒于圆底烧瓶中， 于40℃减压浓缩至近十，用15mL乙睛溶解并转移到25mL刻度试管中，加入2mL正已烷，涡旋振荡 萃取，弃去正已烷层，重复3次，将乙睛层倒人圆底烧瓶中，于50℃减压浓缩至近干，用无水乙醇溶解并 进样。 6.2高效液相色谱测定 6.2.1色谱条件 色谱柱：Cis（4.6mm×250mm，5μm）（或相当型号色谱柱）； b) 流动相：甲醇+20mmol/L乙酸铵=65+35； 流速：1.0mL/min; d) 柱温：室温； e） 检测波长：碱性橙2,449nm；碱性橙21、碱性橙22，485nm； f）进样量：20μL。 6.2.2标准曲线绘制 用配制的碱性橙染料标准工作溶液（4.11.2)绘制以峰面积为纵坐标、工作溶液浓度为横坐标的标 准工作曲线。 6.2.3定量分析 待测样液中应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后在进样分析 7结果计算 试样中每种碱性橙染料的含量按式（1)分别计算： 2 GB/T23496—2009 CXVX1000 X= ...(1) mX1000 式中： X—一试样中每种碱性橙染料的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； c—由标准曲线查出的试样液中每种碱性橙染料的浓度，单位为微克每毫升（μug/mL)； V一一样品最终定容体积，单位为毫升（mL）； m试样的质量，单位为克（g）。 计算结果保留小数点后一位数字。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。