ICS 67.050 X 04 GE 中华人民共和国国家标准 GB/T 23377—2009 食品中脱氢乙酸的测定 高效液相色谱法 Determination of dehydroacetic acid in food- High performance liquid chromatography 2009-04-08发布 2009-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 23377—2009 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由青岛市质量技术监督局提出。 本标准由中国标准化研究院归口。 本标准主要起草人：杨红梅、张辉珍、李惠颖、王晓滨、刘艳琴、王浩、李昭勇、谭燕、闫龙宝 1 GB/T23377—2009 食品中脱氢乙酸的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了黄油、酱菜、发酵豆制品、面包、糕点、焙烤食品馅料、复合调味料、果蔬汁中脱氢乙酸 含量的高效液相色谱测定方法 本标准适用于黄油、酱菜、发酵豆制品、面包、糕点、焙烤食品馅料、复合调味料、果蔬汁中脱氢乙酸 含量的测定，其他食品可参照执行。 本标准定量限为5mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987,MOD） 3原理 用氢氧化钠溶液提取试样中的脱氢乙酸，经脱脂、去蛋白处理后，用高效液相色谱紫外检测器测定 外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2正已烷。 4.3 乙酸铵：优级纯。 4.4 甲酸溶液：10%。取10mL甲酸，加水90mL，混匀。 4.5 乙酸铵溶液：0.02mol/L。称取1.54g乙酸铵，用水溶解并定容至1L。 4.6 氢氧化钠溶液：20g/L。称取20.0g氢氧化钠，用水溶解并定容至1L。 4.7 硫酸锌溶液：120g/L。称取120.0g七水硫酸锌，用水溶解并定容至1L。 4.8 甲醇溶液：70%。取70mL甲醇（4.1），加30mL水，混匀。 4.9脱氢乙酸标准样品：纯度≥98%。 4.10脱氢乙酸标准储备液：1000mg/L。准确称取100mg脱氢乙酸标准样品，用10mL20g/L的氢 氧化钠溶液溶解，用水定容至100mL，配成1000mg/L的标准储备液，4℃保存，可使用3个月 4.11脱氢乙酸标准工作液：分别吸取0.1mL、1.0mL、5.0mL、10.0mL、20.0mL的脱氢乙酸储备 液，用水稀释至100mL，得到浓度为1.0mg/L、10.0mg/L、50.0mg/L、100.0mg/L、200.0mg/L的 标准工作液，4℃保存，可使用1个月 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 1 GB/T 23377—2009 5.2不锈钢高速均质器。 5.3粉碎机。 5.4分析天平：感量0.0001g和感量0.01g。 5.5超声波发生器：功率大于180W。 5.6涡旋混合器。 5.7离心机。 5.8Cis固相萃取柱：500mg，6mL（使用前用5mL的甲醇、10mL水活化，使柱子保持湿润状态）。 6分析步骤 6.1试样的制备与提取 6.1.1果蔬汁：准确称取2g~5g试样，精确至0.01g。置于50mL容量瓶中，加入约10mL水，用氢 氧化钠溶液（4.6)调pH值至7～8，加水稀释至刻度，摇匀，置于离心管中，4000r/min离心10min。取 20mL上清液用10%的甲酸（4.4）调pH值至4～6，定容到25mL。取5mL过已经活化的固相萃取 柱，用5mL水淋洗，用2mlL70%的甲醇溶液（4.8）洗脱，收集洗脱液，过0.45μm滤膜，供高效液相色 谱测定。 6.1.2酱菜、发酵豆制品：样品用不锈钢高速均质器均质。准确称取2g5g均匀试样，精确至 0.01g。置于25mL容量瓶中，加人约10mL水、5mL硫酸锌溶液（4.7），用氢氧化钠溶液（4.6）调 pH值至7~8，加水定容至刻度，超声提取10min。取适量置于10mL离心管中，4000r/min离心 10min，取上清液过0.45μm滤膜，供高效液相色谱测定 6.1.3黄油、面包、糕点、焙烤食品馅料、复合调味料：样品用粉碎机磨碎或不锈钢高速均质器均质。准 确称取2g~5g均匀试样，精确至0.01g，置于25mL容量瓶（如需过固相萃取柱则用50mL容量瓶） 中，加人约10mL水、5mL硫酸锌溶液（4.7），用氢氧化钠溶液（4.6）调pH值至7～8，加水定容至刻 度，超声提取10min，转移到分液漏斗中，加人10mL正已烷，振摇1min，静置分层，弃去正已烷层，再 加入10mL正已烷重复进行一次，取下层水相置于离心管中，4000r/min离心10min。取上清液过 0.45μm滤膜，供高效液相色谱测定。若高效液相色谱分离效果不理想时，可取20mL上清液，用10% 的甲酸（4.4）调pH值至4～6，定容到25mL，取5mL过已经活化的固相萃取柱，用5mL水淋洗，用 2mL70%的甲醇溶液（4.8洗脱，收集洗脱液，过0.45μm滤膜，供高效液相色谱测定。 6.2高效液相色谱参考条件 a) 色谱柱：Cis柱，5μm，250mm×4.6mm（内径）或相当者； b) 流动相：甲醇+0.02mol/L乙酸铵（10+90，体积比）； c) 流速：1.0mL/min; (P 柱温：30℃； 进样量：10μL； f）检测波长：293nm。 6.3定性分析 酸的色谱峰（参见附录A）。必要时应采用其他方法进一步定性确证。 6.4定量测定 以脱氢乙酸标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线 对试样进行定量，标准工作溶液和试样溶液中脱氢乙酸的响应值均应在仪器检测线性范围内。在上述 色谱条件下，脱氢乙酸标准样品色谱图参见附录A。 6.5空白试验 除不加试样外，空白试验应与样品测定平行进行，并采用相同的分析步骤，取相同量的所有试剂。 2 GB/T23377—2009 6. 6 平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定 6.7回收率试验 样品中添加标准溶液，按步骤6.1～6.6操作，测定后计算样品的添加回收率。 7 结果计算 样品中脱氢乙酸的含量按式（1）计算： ...(1) m 式中： X 样品中脱氢乙酸的含量，单位为克每千克（g/kg）； 由标准曲线查得试样溶液中脱氢乙酸的浓度，单位为毫克每升（mg/L）； 由标准曲线查得空白试样溶液中脱氢乙酸的浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V一试样溶液总体积，单位为毫升（mL）； f——过固相萃取柱换算系数（f=0.5）； 样品的质量，单位为克（g）。 计算结果保留至小数点后3位。 回收率 8 9 允许差 在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 3