ICS 71.100.70 Y 42 GD 中华人民共和国国家标准 GB/T 30089—2013 化妆品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲 的测定 液相色谱/串联质谱法 Determination of chlorporpamide,carbutamide and tolbutamide in cosmetics by LC-MS/MS method 2013-12-17发布 2014-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T30089—2013 前言 本标准起草单位：国家化妆品质量监督检验中心（北京）、北京市海淀区产品质量监督检验所、中检 联盟（北京）质检技术研究院。 本标准主要起草人：郭启雷、杨红梅、史海良、赵丽、刘艳琴、田艳玲。 GB/T30089—2013 化妆品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲 的测定液相色谱/串联质谱法 1范围 本标准规定了化妆品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲的液相色谱/串联质谱测定方法 本标准适用于水剂类、膏霜类、凝胶类、粉类及唇膏类化妆品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁腺的 测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 水剂类、膏霜类、凝胶类、粉类化妆品用甲醇提取；唇膏类化妆品经四氢呋喃分散，甲醇提取，固相萃 取小柱净化，采用高效液相色谱/串联质谱仪测定，外标法定量 4. 试剂与材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水， 4.1 乙睛：色谱纯。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 甲酸：色谱纯。 4.4 四氢呋喃。 4.5 氨水。 4.6 氯化钠。 4.7 0.1%甲酸水溶液：准确移取1mL甲酸（4.3）至1000mL容量瓶中，用水定容。 4.8 2%甲酸甲醇溶液：准确移取10mL甲酸（4.3）至500mL容量瓶中，用甲醇（4.2)定容。 4.9 5%氨水甲醇溶液：准确移取25mL氨水（4.5）至500mL容量瓶中，用甲醇（4.2）定容。 标准样品：氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲标准样品，具体信息见表1。 4.10 表1标准样品信息 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量 氯磺丙脲 Chlorpropamide 94-20-2 Co His CIN, O, S 276.74 氨磺丁脲 Carbutamide 339-43-5 Ch Hi N, O, S 271.34 甲苯磺丁脲 Tolbutamide 64-77-7 C12 H1s N2 O, S 270.35 1 GB/T30089—2013 4.11标准溶液。 4.11.1标准储备溶液：准确称取0.1g氯磺内、氨磺丁脉、甲苯磺丁脉标准样品（4.10）（精确至 0.0001g），分别用甲醇（4.2)配制成浓度为1mg/mL的标准储备液，4℃冰箱保存，有效期6个月。 4.11.2混合标准储备溶液：分别准确量取1.00mL氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲标准储备溶液 （4.11.1）至100mL容量瓶中，用甲醇（4.2）稀释定容，配制成0.01mg/mL的混合标准储备溶液，4℃冰 箱保存，有效期1个月 （4.2）稀释定容，配制成100ng/mL的混合标准工作溶液，4℃冰箱保存，临用前配制。 4.12PAX固相萃取小柱：CleanertPAX阴离子交换柱或性能相当者，60mg/3mL,预先用3mL甲醇 （4.2）、3mL5%氨水甲醇溶液（4.9）活化。 4.13微孔滤膜：0.22μm，有机相。 5仪器和设备 5.1 高效液相色谱/串联质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源。 5.2 分析天平：感量分别为0.0001g和0.00001g。 5.3 高速离心机：离心力不低于6000g。 超声波清洗器。 5.5 涡旋混合器。 5.6 氮吹仪。 6分析步骤 6.1样品制备 6.1.1水剂类样品 称取样品1.0g（精确至0.001g），加人甲醇（4.2)定容至5.0mL，涡旋30s，必要时6000g离心 6.1.2膏霜类、凝胶类、粉类样品 称取样品0.5g（精确至0.001g），加人甲醇（4.2）定容至5.0mL，加人氯化钠（4.6）2g，剧烈振荡使 样品分散，涡旋1min，超声15min，6000g离心10min，取上清液经0.22μm微孔滤膜（4.13）过滤，滤 液用液相色谱/串联质谱仪测定。 6.1.3唇膏类样品 称取样品0.4g（精确至0.001g），加人2mL四氢呋喃（4.4），剧烈振荡使样品分散，涡旋1min，超 心10min，取5mL上清液流经已预先活化的PAX固相萃取小柱（4.12），待上清液自然流尽后，用3mlL 甲醇（4.2）淋洗，用吸球吹出小柱中残留液体，弃去。再加人3mL2%甲酸甲醇溶液（4.8）洗脱，待甲酸 甲醇溶液自然流尽后，用吸球吹出小柱中残留液体，收集洗脱液，缓慢氮气流下吹干，准确吸取1mL甲 醇（4.2）溶解，经0.22um微孔滤膜（4.13）过滤，滤液用液相色谱/串联质谱仪测定。 6.2标准工作曲线的制备 取相应的空白样品，按照步骤6.1进行处理，用得到的空白样品提取液稀释混合标准工作溶液 2 GB/T 30089—2013 （4.11.3），配制所需浓度系列的标准溶液，按浓度从低到高依次经液相色谱/串联质谱仪测定，以定量离 子的峰面积为纵坐标，以标准溶液浓度为横坐标，得标准工作曲线。 氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲的LC-MS/MS多反应监测质量色谱图参见图A.1。 6.3 测定 6.3.1 液相色谱参考条件 色谱柱：C8色谱柱，150mmX2.1mm(i.d.）3.5μm，或性能相当者； a) b) 流动相：流动相及梯度洗脱程序见表2； c) 流速：0.3mL/min； d) 柱温：40℃； e) 进样量：5μL。 表2液相色谱梯度洗脱程序 时间 A相：乙睛/% B相：0.1%甲酸水溶液/% min 0 20 80 5 40 60 12 40 60 12.1 20 80 6.3.2 质谱参考条件 a) 离子源：电喷雾离子源（ESI）； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 监测方式：多反应监测（MRM)； d) 干燥气：氮气，温度350℃，流速10L/min； 雾化器：氮气，压力40psi*； f) 毛细管电压：4000V。 g) 保留时间、定性离子对、定量离子对、碎裂电压及碰撞能量见表3。 表3氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲的质谱参数 保留时间 碎裂电压 碰撞能量 化合物 定性离子对（m/z） 定量离子对（m/） min V ev 272.2/92.1 30 氨磺丁脲 6.8 272.2/74.2 80 272.2/74.2 10 277.1/175.0 15 氯磺丙脲 10.0 277.1/111.0 80 277.1/111.0 35 271.1/155.0 15 甲苯磺丁脲 11.1 271.1/91.1 90 271.1/91.1 35 *1psi=0.006895MPa 3